DLD-1-celler: Anvendelser og innsikt i DLD-1-celler i forskning på tykktarmskreft
DLD-1 er en human kolorektal karsinomcellelinje som ofte brukes i kreftforskning. Den er et verdifullt verktøy for å undersøke ulike aspekter ved tykktarmskreft, inkludert tumorutvikling, progresjon, underliggende molekylære mekanismer og respons på terapeutiske midler. DLD-1 er dermed enestående når det gjelder å forstå sykdommen og utvikle potensielle behandlingsstrategier.
- Vekstmedium
- RPMI 1640 med medietilsetninger, inkludert 10 % føtal bovint serum (FBS), 2,1 mM stabilt glutamin og 2,0 g/l NaHCO3, brukes til å dyrke DLD-1-celler. Mediet bør skiftes 2–3 ganger per uke.
- Fordoblingstid
- Doblingstiden for DLD-1 er omtrent 15 timer.
- Veksttype
- DLD-1 er en vedheftende human tykktarmskreftcellelinje. Cellene vokser til monolag.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill DLD-1
- Generelle egenskaper og opprinnelse til DLD-1-celler
- Informasjon om dyrking av DLD-1-cellelinjen
- DLD-1-cellelinje: Fordeler og begrensninger
- Forskningsanvendelser av DLD-1-cellelinjen
- 5. Forskningspublikasjoner om DLD-1-celler
- Ressurser for DLD-1-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
- Ofte stilte spørsmål
Generelle egenskaper og opprinnelse til DLD-1-celler
Før en forsker begynner å arbeide med en cellelinje, må han eller hun først vurdere dens opprinnelse og generelle egenskaper. Denne delen av artikkelen er en detaljert introduksjon til DLD-1-cellelinjen. Den vil dekke følgende ofte stilte spørsmål: Hva er DLD-1-celler? Hva er en DLD-1-kreftcellelinje? Hva er mutasjonene i DLD-1-cellelinjen? Hva er størrelsen på en DLD-1-celle? Hva er morfologien til DLD-1-celler?
- DLD-1, en tykktarmskreftcellelinje, stammer fra tykktarmen til en 67 år gammel mannlig pasient med kolorektal adenokarsinom. Den ble isolert av D.L. Dexter og kolleger i perioden 1977–1979. Denne cellelinjen har samme opprinnelse som HCT-8-, HCT-15- og HRT-18-cellelinjene.
- I likhet med kolorektal kreft har DLD-1-celler en fenotype med mikrosatellittinstabilitet [1].
- DLD-1-mutasjoner inkluderer KRAS, P53, BRAF, BRCA1 og BRCA2. På grunn av DLD-1 P53-status, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 og DLD-1 KRAS-mutasjon, anses disse cellene som ideelle for kreftstudier.
- Disse cellene har en epitel-lignende morfologi.
- Størrelsen på DLD-1-cellelinjen er omtrent 15 µm.
- Den humane kolorektale kreftcellelinjen DLD-1 har en pseudodiploid karyotype. Rundt 86 % av cellene har et modalt kromosomtall på 46. Imidlertid kan polyploidi også forekomme hos 17,1 % av cellepopulasjonen.
Informasjon om dyrking av DLD-1-cellelinjen
Før du dyrker en cellelinje, må du kjenne til de grunnleggende kravene til cellekulturen. Dette avsnittet vil belyse de viktige punktene du må lære deg før du begynner å arbeide med DLD-1-cellelinjen. Dette inkluderer: Hva er DLD-1-doblingstiden? Hva er DLD-1-dyrkningsmediet? Hva er utsåingstettheten for DLD-1-celler? Hvordan dyrker man DLD-1-celler?
Viktige punkter for dyrking av DLD-1-celler
Fordoblingstid:
Doblingstiden for DLD-1 er omtrent 15 timer.
Adherent eller i suspensjon:
DLD-1 er en vedheftende human tykktarmskreftcellelinje. Cellene vokser til monolag.
Utsåingstetthet:
DLD-1-celler sås med en tetthet på 1 til 2 x 104 celler/cm2. Adhærente celler vaskes med 1x fosfatbuffersaltvann (PBS) og inkuberes med passasjeløsning (Accutase) ved romtemperatur. Etter inkubasjon i 8 til 10 minutter tilsettes løsrevne celler til dyrkningsmediet og sentrifugeres. Cellepelleten resuspenderes deretter forsiktig, og cellene helles over i nye dyrkningsbeholdere som inneholder vekstmedium.
Vekstmedium:
RPMI 1640 med medietilskudd, inkludert 10 % føtal bovint serum (FBS), 2,1 mM stabilt glutamin og 2,0 g/L NaHCO3, brukes til å dyrke DLD-1-celler. Mediet bør skiftes 2–3 ganger per uke.
Vekstbetingelser:
DLD-1-kulturer oppbevares i en fuktet inkubator ved 37 °C med 5 % CO2-tilførsel.
Oppbevaring:
DLD-1-celler oppbevares i dampfasen av flytende nitrogen eller i en elektrisk fryser med ultralav temperatur (under -150 °C).
Fryseprosess og medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysemedier kan brukes til å fryse DLD-1-cellene. Det anbefales alltid en langsom fryseprosess, som tillater en gradvis temperaturreduksjon på 1 °C, for å forhindre sjokk for cellene og beskytte deres levedyktighet.
Tineprosess:
Frosne celler tines i et vannbad forhåndsinnstilt til 37 °C i 40 til 60 sekunder, til det kun gjenstår en liten isklump. Deretter tilsettes cellene til et nytt medium og sentrifugeres. Dette trinnet er nødvendig for å fjerne komponenter fra frysemediet fra cellene. De oppsamlede cellene resuspenderes i et vekstmedium og dispenseres i kolben for vekst.
Biosikkerhetsnivå:
DLD-1-cellelinjen oppbevares i laboratorier med biosikkerhetsnivå 1.
DLD-1-cellelinjen: Fordeler og begrensninger
I denne delen av artikkelen vil vi gjennomgå fordelene og begrensningene ved DLD-1-tykktarmskreftcellelinjen.
Fordeler
De viktigste fordelene ved DLD-1-cellelinjen er:
Modell for tykktarmskreft
DLD-1-celler har mutasjoner som ofte finnes hos pasienter med kolorektal kreft, for eksempel DLD-1 KRAS-mutasjon, DLD-1 BRCA og DLD-1 BRCA2. Denne relevansen gjør dem til en klinisk egnet cellemodell for å studere denne sykdommen.
Tumorigenisk cellelinje
DLD-1-celler er tumorigeniske. De kan forårsake svulster når de injiseres i nakne mus. Derfor bruker forskere disse cellene til å utvikle xenotransplantat-svulstmodeller som hjelper til med å undersøke svulstdannelse, utvikling og progresjon in vivo.
Begrensninger
Begrensningene knyttet til DLD-1-cellene er:
Heterogenitet
DLD-1-kolonkreftcellepopulasjoner viser genetisk og fenotypisk heterogenitet. Dette kan påvirke generaliserbarheten av forskningsresultatene.
Forskningsanvendelser av DLD-1-cellelinjen
DLD-1-cellelinjen tilbyr en rekke anvendelser innen kreftforskning. Noen fremtredende anvendelser blir diskutert i denne seksjonen.
- Kreftstudie: DLD-1-celler fungerer som en verdifull in vitro-modell for å forstå de molekylære mekanismene som ligger til grunn for vekst, utvikling og progresjon av tykktarmskreft. Videre brukes de til å studere genuttrykk, signalveier og innflytelsen av spesifikke genetiske mutasjoner på kreftcellers atferd. Forskning utført i 2022 observerte at PI3K/Akt/YAP-signalkaskaden regulerer migrasjonen og invasjonen av DLD-1-kolorektal kreftcellelinjen [2].
- Legemiddelutvikling: Forskere bruker DLD-1-cellelinjen til å teste effektiviteten av kreftmedisiner og evaluere deres potensial for behandling av tykktarmskreft. Dette bidrar til legemiddelutvikling og effektiv bekjempelse av sykdommen. En studie utført i 2022 brukte DLD-1-kreftcellelinjen og undersøkte den kreftbekjempende aktiviteten til silisiumftalocyaniner, kjemisk syntetiserte forbindelser. Studiens resultater antydet at disse forbindelsene er potente kreftbekjempende midler [3]. Interessant nok fant en annen studie kreftbekjempende potensial i et probiotisk-avledet P8-protein ved bruk av DLD-1-celler [4].
5. Forskningspublikasjoner om DLD-1-celler
Denne delen vil fremheve noen interessante og ofte siterte publikasjoner som omhandler DLD-1-kolonkreftcellelinjen.
Denne publikasjonen er publisert i Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Studien fant at diosmin, et flavonoid, induserte celledød i DLD-1-celler og også forårsaket cellecyklusstans; dermed kan det være et potensielt middel mot kreft.
Bromelain undertrykker effektivt Kras-mutert tykktarmskreft ved å stimulere ferroptose
Denne studien i Animal Cells and Systems (2018) foreslo at bromelain, et enzym, undertrykker DLD-1 KRAS-mutasjon og utøver potente cytotoksiske effekter.
Denne forskningsartikkelen ble publisert i 2019 i tidsskriftet «Environmental Toxicology». Studien undersøkte antitumoreffektene av et naturlig stoff, bergapten, ved bruk av en DLD-1-kolorektal cellelinje.
Denne studien i tidsskriftet «Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials» (2023) fant at nanokompositter av curcumin og jernoksid er svært effektive mot DLD-1-kolorektale kreftceller.
Denne forskningsartikkelen ble publisert i 2020 i Turkish Journal of Biology. Studien foreslo at et naturprodukt, epibrassinolid-mediert aktivering av AKT i DLD-1-celler, stimulerer autofagi relatert til polyaminer.
Ressurser for DLD-1-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
Følgende er noen ressurser om DLD-1-celler:
- DLD-1-transfeksjon: Denne videoopplæringen er en omfattende guide om DLD-1-in vitro-transfeksjonsprotokoll.
- DLD-1-celler: Denne forskningsartikkelen beskriver kort kravene til DLD-1-cellekultur, inkludert medier og dyrkingsbetingelser. Dessuten kan den hjelpe deg med å lære transfeksjonsprotokollen som brukes for DLD-1-celler.
Følgende lenker inneholder protokollen for dyrking av DLD-1, humane tykktarmskreftceller.
- DLD-1-cellelinje: Dette nettstedet gir grunnleggende informasjon om DLD-1-cellelinjen. Det vil hjelpe deg med å lære ulike DLD-1-cellekulturprotokoller, inkludert subkultivering og håndtering av kryokonserverte og prolifererende kulturer.
Referanser
- Gavrilas, L.I., et al., Pro-apoptotiske gener som nye mål for enkelt- og kombinasjonsbehandlinger med resveratrol og kurkumin ved tykktarmskreft. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP-signalering fremmer migrasjon og invasjon av DLD‑1-kolorektale kreftceller. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Antikreftaktivitet av nye silisiumftalocyaniner mot kolorektal adenokarsinomcellelinjen (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Kreftbekjempende egenskaper hos det probiotisk avledede P8-proteinet i kolorektal kreftcellelinjen DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.