B16-celler – Grunnleggende guide til B16-melanomceller i kreftforskning
B16 er en hudkreftcellelinje (melanom) av muselig opprinnelse. Denne cellelinjen er en effektiv in vitro-modell for å studere hudkreft hos mennesker. Den brukes ofte til å undersøke dannelse av solide svulster og metastasering av kreftceller.
- Vekstmedium
- B16-celler dyrkes i EMEM-medium (Eagle's Minimum Essential Medium) som inneholder 10 % føtal bovint serum (FBS). Vekstmediet bør skiftes ut 2–3 ganger i uken.
- Fordoblingstid
- Den gjennomsnittlige fordoblingstiden for B16-celler er estimert til 24 timer.
- Veksttype
- B16-celler er vedheftende og vokser i monolag.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill B16
Denne artikkelen vil hjelpe deg med å forstå grunnleggende fakta om B16-melanomcellelinjen. Mer spesifikt vil den gå gjennom følgende:
Generelle egenskaper og opprinnelse til B16-cellelinjen
Denne delen av artikkelen vil omhandle de karakteristiske egenskapene til B16-melanomcellelinjen. Du vil få svar på følgende ofte stilte spørsmål. For eksempel: Hva er B16-kreftcellelinjen? Hvor stammer B16-cellene fra? Hva er størrelsen på B16-cellene?
- B16-cellelinjen ble etablert i 1954. Disse cellene stammer fra C57BL/6J-mus som spontant utviklet en svulst i huden ved Jackson Laboratories i Maine.
- Dette er melaninproduserende epitelceller som har evnen til å metastasere i milten, leveren og lungene.
- Melanom-B16-cellene vokser som monolag og viser epitel-lignende og spindelformet cellemorfologi.
- Størrelsen på B16-cellelinjen er omtrent 15,4 μm.
- Det finnes forskjellige subkloner av B16-celler, inkludert B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 og B16F10. Disse sublinjene er forskjellige fra de opprinnelige B16-cellene og beholder noen spesifikke egenskaper. De har for eksempel forskjeller i morfologi, cellestørrelse og andre egenskaper. B16F10 har høy evne til lungemetastaser, og B164A5 er den mest aggressive hudkreftcellelinjen sammenlignet med B16F10, B16-GMCSF og B16FLT3 [1].
Informasjon om dyrking av B16-cellelinjen
Før du opprettholder eller dyrker en cellelinje, kan det være lurt å se etter viktig informasjon om doblingstid, celletype, vekstmedier, dyrkingsbetingelser osv. Denne delen inneholder all nødvendig informasjon for dyrking av B16-celler.
Viktige punkter for dyrking av B16-celler
Populasjonens doblingstid:
Den gjennomsnittlige fordoblingstiden for B16-celler er estimert til 24 timer.
Adhærent eller i suspensjon:
B16-celler er vedheftende og vokser i monolag.
Utsåingstetthet:
Det anbefales å så B16-celler med en celletetthet på 1 til 2 x 104 celler/cm2. Festede B16-celler skylles med 1 x PBS og løsnes fra overflaten ved hjelp av Accutase-løsning. Cellene sentrifugeres, og cellepelleten resuspenderes i vekstmediet. Senere overføres disse cellene til en ny kolbe for vekst.
Vekstmedium:
B16-celler dyrkes i EMEM-medium (Eagle's Minimum Essential Medium) som inneholder 10 % føtalt bovint serum (FBS). Vekstmediet bør skiftes ut 2–3 ganger i uken.
Vekstbetingelser:
En fuktet inkubator med 5 % CO2-tilførsel og 37 °C temperatur brukes til å dyrke B16-cellelinjen.
Oppbevaring:
Disse cellene oppbevares ved temperaturer under -150 °C eller i dampfasen av flytende nitrogen for å beskytte cellenes levedyktighet.
Fryseprosess og medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysemedium brukes til å fryse B16-celler ved hjelp av en langsom fryseprosess.
Tineprosess:
Frosne B16-celler tines ved 37 °C i et vannbad som inneholder et antimikrobielt middel. Tinte celler kan dyrkes direkte ved å dispensere dem i kolber som inneholder vekstmedium. Dessuten kan disse cellene sentrifugeres for å fjerne komponenter fra frysemediet og deretter dyrkes i nytt medium.
Biosikkerhetsnivå:
B16-cellelinjen skal håndteres eller oppbevares i et laboratorium med biosikkerhetsnivå 1.
B16-cellelinjen: Fordeler og ulemper
I likhet med andre cellelinjer har B16 en unik blanding av fordeler og ulemper. Noen viktige fordeler og ulemper ved denne melanomcellelinjen er oppført i denne delen.
Fordeler
B16 er det første effektive museverktøyet som er mye brukt i metastaseforskning på grunn av fordelene det gir. Noen fordeler ved denne hudkreftcellelinjen er:
Enkel å dyrke
B16-cellelinjen er enkel å dyrke i forskningslaboratorier. Den brukes mye til å studere kreftcellebiologi, signalveier og mer.
Rask vekst
B16-melanomcellelinjen har en høy proliferasjonshastighet, noe som gjør den egnet for å studere celledeling og vekstprosesser.
Tumorigenisitet
B16 er en tumorigenisk cellelinje med tumorlignende egenskaper som invasjon, migrasjon og proliferasjon. Den er verdifull for å studere tumordannelse, progresjon og metastase.
Ulemper
Ulempene ved B16-cellelinjen er:
Manglende relevans for mennesker
Siden B16 er en musemelanomcellelinje, representerer den kanskje ikke nøyaktig biologien til hudkreft hos mennesker, noe som begrenser overførbarheten av forskningsresultatene.
Heterogenitet
B16-celler er heterogene og viser varierte genetiske og fenotypiske egenskaper innenfor samme kultur. Dette kan påvirke resultatets pålitelighet og reproduserbarhet.
Anvendelser av B16-celler
B16-cellelinjen brukes mye i forskningsstudier. Noen lovende anvendelser av denne cellelinjen er:
- Tumorbiologi: Denne murine hudkreftcellelinjen er tumorigen og brukes mye for å forstå tumorbiologi. Det er gjennomført flere studier for å utforske de cellulære mekanismene bak tumorcellevekst, proliferasjon og metastase ved bruk av B16-celler. En forskningsstudie gjennomført i 2020 benyttet B16-celler for å undersøke rollen til langt ikke-kodende RNA, LncRNA MEG3, i dannelse, vekst og metastase av melanom. Denne forskningen fant at det ikke-kodende RNA-et modulerer miRNA-21/E-Cadherin-aksen for å stimulere disse cellulære hendelsene [2]. På samme måte ble det utført forskning for å undersøke den potensielle rollen til Notch1-signalering i tumorindusert immunsuppresjon ved bruk av B16-celler [3].
- Legemiddelutvikling: B16-celler brukes til å validere og teste de potensielle terapeutiske effektene av legemiddelkandidater. En studie evaluerte den antitumorale effekten av neogamboginsyre, et naturlig stoff, ved hjelp av en B16-cellelinje. Studieresultatene viste at dette stoffet modulerer PI3K/Akt/mTOR-signalveien for å forårsake kreftcelledød [4]. En annen studie undersøkte den antimalomaneffekten av ginsenosid Rg3, et saponin, ved bruk av B16-cellelinjen. Forskningen foreslo at dette naturlige stoffet forårsaket antitumoraktivitet ved å nedregulere ERK- og Akt-signalveiene [5].
5. Forskningspublikasjoner som omhandler B16-celler
Her er noen viktige forskningspublikasjoner om B16-melanomcellelinjen.
Denne publikasjonen i tidsskriftet Cancer Cell International (2020) foreslo at langt ikke-kodende RNA MEG3 forbedrer dannelsen, veksten og metastaseringen av B16-melanomceller ved å modulere miRNA-21/E-cadherin-aksen.
Denne artikkelen ble publisert i tidsskriftet International Journal of Molecular Medicine i 2018. Denne studien undersøkte den melanogene effekten og mekanismene til et psoralen-derivat – 4-metyl-6-fenyl-2H-furo[3,2-g]kromen-2-on (MPFC) – i B16-celler. Studien foreslo at dette derivatet fremmer melanogenese ved å stimulere PKA- og p38 MAPK-cellesignalering.
Notch1-signalering i melanomceller fremmet tumorindusert immunsuppresjon via oppregulering av TGF-β1
Denne forskningen ble publisert i 2018 i Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. Studiens funn tyder på at aktivering av Notch1-signalering i B16-celler kan forhindre antitumorimmunitet ved å øke uttrykket av TGF-β1-genet.
Neogamboginsyre induserer apoptose av melanom B16-celler via PI3K/Akt/mTOR-signalveien
Denne studien ble utført av Chunlan Wu og hans kolleger i 2020 og publisert i tidsskriftet Acta Biochimica Polonica. Denne forskningen fastslår at neogamboginsyre, et naturlig stoff, kan forårsake B16-melanomcelledød ved å modulere PI3K/Akt/mTOR-signalkaskaden.
Denne forskningsartikkelen ble publisert i European Journal of Medicinal Chemistry i 2018. I denne studien undersøkte forskerne kreftbekjempende egenskaper hos en forbindelse, et iridium(III)-kompleks, ved bruk av B16-melanomceller.
Ailanthone induserer cellecyklusstans og apoptose i melanomcellene B16 og A375
Denne studien foreslo at et bioaktivt stoff fra planter, Ailanthone, har kreftbekjempende potensial, da det kan indusere apoptose og cellecyklusstans i B16- og A375-melanomceller. Denne artikkelen ble publisert i Biomolecules i 2019.
Ressurser for B16-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
Det finnes begrensede ressurser om B16-cellelinjen som forklarer protokollene for dyrking og transfeksjon.
- Dyrking av melanomceller: Denne videoen gir verdifulle tips for dyrking av melanomcellelinjer.
- Subkultivering av en cellelinje: Denne videoen forklarer en generell subkultiveringsprotokoll for en cellelinje.
- Transfeksjon av B16F10-cellelinjen: Denne videoen forklarer transfeksjonsprotokollen for en sublinje av B16-melanomceller. Den kan hjelpe deg med å optimalisere transfeksjonsprotokollen for B16-celler.
Følgende er noen cellekulturprotokoller for B16-celler.
- Dyrking av B16-celler: Dette nettstedet inneholder all nødvendig informasjon for dyrking av B16-celler, inkludert vekstmedier, subkultivering, tining og frysing av celler.
Referanser
- Danciu, C., et al., Oppførselen til fire forskjellige B 16-sublinjer av murint melanomceller: C57 BL/6J-hud. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): s. 73-80.
- Wu, L., et al., LncRNA MEG3 fremmer vekst, metastase og dannelse av melanom gjennom modulering av miR-21/E-cadherin-aksen. Cancer cell international, 2020. 20: s. 1-14.
- Yang, Z., et al., Notch1-signalering i melanomceller fremmet tumorindusert immunsuppresjon via oppregulering av TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): s. 1-13.
- Wu, C., et al., Neogamboginsyre induserer apoptose av melanom B16-celler via PI3K/Akt/mTOR-signalveien. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): s. 197–202.
- Meng, L., et al., Antitumoraktivitet av ginsenosid Rg3 i melanom gjennom nedregulering av ERK- og Akt-signalveiene. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): s. 2069-2079.