B16-F10-celler – En undersøkelse av B16-F10-melanomcellelinjen i metastaseforskning
B16-F10-celler utgjør en melanomcellelinje avledet fra C57BL/6J-mus. De er mye brukt i hudkreftforskning. Forskere bruker disse cellene til å studere tumorutvikling og -progresjon samt terapeutiske tiltak. Denne artikkelen vil dekke de grunnleggende aspektene ved B16-F10-melanomceller. Den vil blant annet omfatte:
- Vekstmedium
- B16-F10-celler dyrkes i DMEM-medium. Mediet er tilsatt 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, 4,5 g/L glukose og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevekst. Mediet bør skiftes ut 2 til 3 ganger per uke.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for B16-F10-celler er omtrent 20,1 timer. Den kan variere fra 17 til 21 timer, avhengig av dyrkingsforholdene.
- Veksttype
- B16-F10 er en vedheftende cellelinje. Cellene vokser raskt og danner monolag.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill B16-F10
- Opprinnelse og generelle egenskaper ved B16-F10-cellelinjen
- Informasjon om dyrking av B16-F10-celler
- B16-F10-celler: Fordeler og ulemper
- Forskningsanvendelser av B16-F10-celler
- Publikasjoner om B16-F10-cellelinjen
- Ressurser for B16-F10-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
- Opprinnelse og generelle egenskaper ved B16-F10-cellelinjen
- Informasjon om dyrking av B16-F10-celler
- B16-F10-celler: Fordeler og ulemper
- Forskningsanvendelser av B16-F10-celler
- 5. Publikasjoner om B16-F10-cellelinjen
- Ressurser for B16-F10-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
- Ofte stilte spørsmål
Opprinnelse og generelle egenskaper ved B16-F10-cellelinjen
Denne delen gir deg innsikt i opprinnelsen og de karakteristiske egenskapene til B16F10-melanomtumorceller. Den vil hjelpe deg med å bruke cellelinjen effektivt i forskningsarbeidet ditt. Hovedsakelig vil du lære: Hva er B16-F10-celler? Hva stammer B16F10 fra? Hva er morfologien til B16F12-cellelinjen? Hva er størrelsen på B16F10-cellen?
- B16-F10 er en subklon av B16-tumorcellelinjen avledet fra hudvev fra C57BL/6J-mus. Her ble B16F10-melanomceller utviklet etter intravenøs injeksjon av B16-linjen i immunsvekkede eller syngene mus. Disse cellene ble valgt ut på grunn av deres potensial for å danne metastaserende lungekolonier in vivo og ble deretter etablert etter ti sykluser med lungekoloni-dannelse in vitro [1]. Den ble utviklet av Fidler og kolleger i 1976.
- B16-F10-cellelinjer har et epitel-lignende og spindelformet utseende.
- Den omtrentlige størrelsen på B16-F10-celler er 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1- og B16-F10-celler
B16-F1- og B16-F10-celler stammer fra B16-stamcellelinjen. Begge har samme opprinnelse og har nesten like egenskaper. Hovedforskjellen er imidlertid deres evne til å danne metastaser. B16-F10-celler har høy, mens B16-F1 har lavt metastatisk potensial [3].
Informasjon om dyrking av B16-F10-celler
Før du håndterer og dyrker en cellelinje, må du vite om dens doblingstid, vekstmedier, betingelser og protokoller for cellekultur. I dette avsnittet vil vi diskutere: Hva er doblingstiden for B16-F10-celler? Hvordan dyrker man B16-F10-celler? Hva er B16-F10-cellemediet? Hvilke dyrkingsbetingelser anbefales for B16-F10-celler?
Viktige punkter for dyrking av B16-F10-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for B16-F10-celler er omtrent 20,1 timer. Den kan variere fra 17 til 21 timer, avhengig av dyrkingsforholdene.
Adherent eller i suspensjon:
B16-F10 er en vedheftende cellelinje. Cellene vokser raskt og danner monolag.
Delingsforhold:
B16-F10-celler subkultiveres med et delingsforhold på 1:2 til 1:4. Cellene vaskes med fosfatbuffersaltvann (1x) og inkuberes deretter med Accutase-passasjeløsning i 8 til 10 minutter ved romtemperatur. Cellene tilsettes ferskt medium og sentrifugeres. Den høstede cellepelleten resuspenderes igjen, og cellene fordeles i den nye kolben som inneholder ferskt dyrkningsmedium i henhold til delingsforholdet.
Vekstmedium:
B16-F10-celler dyrkes i DMEM-medium. Mediet tilsettes 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukose og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevekst. Mediet bør skiftes 2 til 3 ganger per uke.
Vekstbetingelser:
B16-F10-celler dyrkes i en fuktet inkubator ved 37 °C med 5 % CO2-tilførsel.
Oppbevaring:
Frosne celler oppbevares under -150 °C i en elektrisk fryser for ultralave temperaturer eller i dampfasen av flytende nitrogen for å opprettholde cellenes levedyktighet.
Fryseprosess og medium:
B16-F10-celler fryses ned i CM-1- eller CM-ACF-medier for oppbevaring. For dette anbefales en langsom fryseprosess som kun tillater en temperaturreduksjon på 1 °C per minutt for å forhindre at cellene utsettes for sjokk.
Tineprosess:
Frosne B16-F10-celler tines i et forhåndsinnstilt vannbad på 37 °C i 40 til 60 sekunder. Deretter tilsettes cellene til ferskt medium og sentrifugeres for å fjerne komponenter fra frysemediet. De oppsamlede cellene resuspenderes i et vekstmedium og helles i kolber for dyrking.
Biosikkerhetsnivå:
Det kreves et laboratorium med biosikkerhetsnivå 1 for å håndtere og opprettholde B16-F10-cellelinjen.
B16-F10-celler: Fordeler og ulemper
I likhet med andre cellelinjer har også B16-F10 noen fordeler og ulemper. Noen viktige fordeler og ulemper ved denne hudmelanomcellelinjen blir omtalt i dette avsnittet.
Fordeler
B16-F10-cellelinjen er mye brukt i kreftforskning. Fordelene med B16-F10-celler er:
Metastasepotensial
B16F10-celler fra hudmelanom har høyt metastatisk potensial, noe som gjør dem verdifulle for studier av kreftmetastaser og underliggende mekanismer.
In vitro-tumormodell
B16-F10-celler fungerer som en in vitro-modell for å studere kreftprogresjon og -vekst, og hjelper forskere med å forstå de cellulære og molekylære mekanismene som driver kreft.
Ulemper
Ulempene ved B16-F10-cellelinjen er:
Mus-avledet cellelinje
B16-F10 er en mus-avledet cellelinje, noe som begrenser dens anvendelighet i studier spesifikt rettet mot mennesker. Forskningsresultater fra disse cellene kan ikke alltid overføres direkte til menneskelig biologi.
Forskningsanvendelser av B16-F10-celler
B16-F10-cellelinjen brukes mye i kreftforskning. Her diskuteres noen lovende anvendelser av denne cellelinjen.
- Kreftforskning: B16-F10-cellelinjen er en verdifull modell for å studere kreftcelleprosesser, inkludert proliferasjon, invasjon, migrasjon og celledød eller apoptose. Dessuten hjelper den forskere med å få innsikt i molekylære mekanismer og veier som driver disse cellulære prosessene. En studie gjennomført i 2018 undersøkte rollen til CCR5 (C-C-kemokinreseptor type fem) i overgangen fra epitelceller til mesenkymale celler og metastasering i melanomceller. Funnene avslørte at CCR5-mangel begrenser tumorvekst og metastase, mens høy ekspresjon fører til økt vekst og metastase av B16-F10-celler. Ytterligere forskning rapporterte at CCR5 regulerer TGFβ1-ekspresjon, som regulerer PI3K/AKT/GSK3β-signalering for å fremme overgangen fra epitel til mesenkym og cellemigrasjon [4].
- Legemiddeltesting og -utvikling: B16F10-melanomtumorceller er svært aggressive og dermed egnet for testing av potensielle antitumorlegemidler og behandlinger. Forskere bruker disse cellene og vurderer effekten av forskjellige forbindelser på cellevekst, proliferasjon og metastase, noe som bidrar til legemiddelutvikling. En studie utført i 2018 av Valentina Nanni og kolleger undersøkte de terapeutiske effektene av hydroalkoholisk ekstrakt av Spartiumjunceum-blomster. Studien foreslo at blomsterekstraktet var effektivt for å indusere senesens i B16-F10-celler, noe som fører til undertrykkelse av cellevekst og melanogenese, og dermed kan det utøve potensielle antikreftaktiviteter [5].
5. Publikasjoner som omhandler B16-F10-cellelinjen
Her er noen viktige forskningspublikasjoner som omhandler B16-F10-melanomcellelinjen:
Denne studien ble publisert i Nutrients (2020). Den foreslo at etanolisk ekstrakt av Sorghum bicolor har en anti-melanogen effekt i hudmelanom B16F10-celler.
Kalsitriol hemmer proliferasjon og kan potensielt indusere apoptose i B16–F10-celler
Forskningen, publisert i Medical Science Monitor Basic Research (2022), foreslo at legemidlet kalsitriol utøver antitumoreffekter i B16-F10-melanomceller ved å hemme proliferasjon og indusere apoptose.
Denne artikkelen er publisert i Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Funnene avslørte at kardoler, resorcinol-lipider, utøver intens cytotoksisitet på B16-F10-cellelinjen.
Studien, publisert i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), undersøkte det antimetastatiske potensialet til Ginkgo biloba-ekskarpekstrakt ved bruk av B16-F10-celler.
Denne forskningen i World Neurosurgery (2018) foreslo at tymokinon kan være en effektiv terapi mot intracerebrale metastatiske lesjoner, da det undertrykker B16-F10-cellevekst og induserer apoptose.
Ressurser for B16-F10-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
B16F10-endotelceller er mye brukt i hudkreftforskning. Her er noen nettressurser som forklarer protokollene for dyrking og transfeksjon:
- Transfeksjon av B16F10-melanomceller: Denne videoopplæringen kan hjelpe deg med å lære transfeksjonsprotokollen for B16-F10-celler.
- B16-F10-transfeksjon: Dette dokumentet forklarer in vitro-DNA-transfeksjonsprotokollen for hudmelanom-B16F10-celler.
Følgende lenke inneholder protokollen for cellekultur for B16-F10-celler:
- Subkultivering av B16-F10: Dette nettstedet inneholder nyttig informasjon om B16F10-melanomtumorceller. Det omfatter vekstmedier, doblingstid, dyrkingsbetingelser og protokoll for subkultivering av celler, samt håndtering av kryokonserverte og proliferative kulturer.
Referanser
- Poste, G., et al., Sammenligning av metastatiske egenskaper hos B16-melanomkloner isolert fra dyrkede cellelinjer, subkutane svulster og individuelle lungemetastaser. Cancer Research, 1982. 42(7): s. 2770–2778.
- Nakamura, M., D. Ono og S. Sugita, Mekanofenotyping av B16-melanomcellevarianter for vurdering av effekten av (-)-epigallokatekingallatbehandling ved bruk av et konisk mikrofluidisk apparat. Micromachines, 2019. 10(3): s. 207.
- Danciu, C., et al., Oppførselen til fire forskjellige B16-sublinjer av murint melanomceller: C57BL/6J-hud. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): s. 73–80.
- Liu, J., et al., Høy ekspresjon av CCR5 i melanom forsterker epitel-mesenkym-overgang og metastasering via TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): s. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalkoholisk ekstrakt av Spartium junceum L.-blomster hemmer vekst og melanogenese i B16-F10-celler ved å indusere senesens. Phytomedicine, 2018. 46: s. 1-10.