AGS-celler – Undersøkelse av AGS-celler fra gastrisk adenokarsinom i kreftforskning
AGS-celler utgjør en human gastrisk adenokarsinomcellelinje som er mye brukt i biomedisinsk forskning. Den brukes særlig til å studere biologien bak magekreft, inkludert tumorvekst, utvikling, progresjon og terapeutiske inngrep. I tillegg brukes den til å undersøke interaksjoner mellom vert og patogen.
- Vekstmedium
- DMEM-medium som inneholder 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 4,5 g/l glukose, 1,5 g/l NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat brukes til å dyrke AGS-celler. Mediet bør skiftes 2 til 3 ganger i uken.
- Fordoblingstid
- Doblingstiden for AGS-celler varierer mellom 24 og 48 timer.
- Veksttype
- AGS-celler er vedheftende. De vokser til monolag.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-2
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill AGS
Generelle egenskaper og opprinnelse til AGS-celler
Det er nødvendig å kjenne til en cellelinjes opprinnelse og generelle egenskaper før du begynner å arbeide med den. Dette avsnittet vil dekke følgende: Hva er AGS-celler? Hva er opprinnelsen til AGS-cellen? Hva er morfologien til AGS-kreftcellelinjen?
- AGS-cellelinjen stammer fra magevevet til en 54 år gammel kaukasisk kvinne med gastrisk adenokarsinom. Den ble isolert i 1979 [1].
- AGS-celler har epitel-lignende morfologi.
- De gastriske epiteliale AGS-cellene er hyperdiploide. Det modale kromosomtall for AGS-celler er 49, noe som forekommer i nesten 60 % av cellene. Polyploidi forekommer også i omtrent 3,6 % av cellene.
Informasjon om dyrking av AGS-cellelinjen
For riktig håndtering og forvaltning av en cellelinje må du kjenne til de grunnleggende begrepene innen dyrking. Spesielt bør du lære: Hva er AGS-cellens doblingstid? Hva er AGS-cellemediet? Hvordan subkultiverer man AGS-celler? Hvilke frysemedier brukes til gastriske epitel-AGS-celler?
Viktige punkter for dyrking av AGS-celler
Fordoblingstid:
Doblingstiden for AGS-celler varierer mellom 24 og 48 timer.
Adherent eller i suspensjon:
AGS-celler er vedheftende. De vokser til monolag.
Utsåingstetthet:
AGS-celler sås med en celletetthet på 1 x 104 celler/cm2. Ved denne tettheten danner cellene et sammenvokst monolag i løpet av 3 til 5 dager. Etter at gammelt medium er fjernet, skylles cellene med 1 x PBS og inkuberes med Accutase-disosiasjonsløsning. Løsrevne celler ble resuspendert i dyrkningsmedium og sentrifugert. Cellepelleten ble igjen resuspendert, og etter telling av AGS-celler blir de dispensert i den nye kolben for vekst.
Vekstmedium:
DMEM-medium som inneholder 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 4,5 g/L glukose, 1,5 g/L NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat brukes til å dyrke AGS-celler. Mediet bør skiftes 2 til 3 ganger i uken.
Vekstbetingelser:
AGS-celler oppbevares i en fuktet inkubator (ved 37 °C) med 5 % CO2-tilførsel.
Oppbevaring:
Frosne AGS-celler oppbevares i elektriske frysere ved temperaturer under -150 °C eller i dampfasen av flytende nitrogen i lengre tid.
Fryseprosess og medium:
CM-1- eller CM-ACF-medium brukes til å fryse AGS-celler. Cellefrysingen gjennomføres ved hjelp av en langsom fryseprosess som kun tillater et temperaturfall på 1 °C per minutt og beskytter cellenes levedyktighet.
Tineprosess:
Frosne mageepitelceller ristes raskt i et 37 °C varmt vannbad i 40 til 60 sekunder. Tinte celler resuspenderes i ferskt dyrkningsmedium og helles i nye kolber for vekst. Etter 24 timers inkubasjon fornyes mediet for å fjerne komponenter fra frysemediet. Deretter sentrifugeres de tine cellene, og elementer fra frysemediet fjernes. Deretter resuspenderes de høstede cellene på nytt og fordeles i kolben som inneholder dyrkningsmediet.
Biosikkerhetsnivå:
Laboratorieforhold på biosikkerhetsnivå 2 er avgjørende for AGS-cellekultivering.
AGS-cellelinje: Fordeler og begrensninger
Denne delen av artikkelen vil belyse noen av de viktigste fordelene og begrensningene knyttet til AGS-celler.
Fordeler
De viktigste fordelene med gastriske epitelceller (AGS-celler) er:
Enkel å dyrke
AGS-cellelinjen for gastrisk karsinom er enkel å vedlikeholde i cellekulturlaboratorier. Den har ingen kompliserte eller krevende krav til cellekultur. Videre har den gode vekstegenskaper, noe som gjør den til et ideelt valg for studier av biologien bak gastrisk kreft.
Relevans for magesvikt
AGS-celler stammer fra humant gastrisk adenokarsinom, noe som gjør dem mye brukt til å studere biologi og terapeutiske tiltak ved gastrisk karsinom.
Begrensninger
Begrensningen knyttet til AGS-cellelinjen er:
In vitro-cellemodell
AGS-celler dyrkes i biomedisinske forskningslaboratorier under kunstige forhold. Derfor gjenspeiler de kanskje ikke fullt ut det in vivo-mikromiljøet ved magekreft og andre celle- og molekylære interaksjoner.
Anvendelser av AGS-celler
AGS-celler brukes spesielt til å studere biologien bak magekreft. De har mange andre lovende anvendelser innen det biomedisinske feltet. Noen av de interessante forskningsanvendelsene av AGS-celler er:
- Studie av magekreft: AGS-celler er et utmerket forskningsverktøy for å undersøke celle- og molekylære mekanismer som ligger til grunn for vekst, metastasering og invasjon av magekreft. Forskere bruker også gastriske epiteliale AGS-celler til å studere ulike cellulære prosesser, genetiske mutasjoner og signalveier i utviklingen av magekreft. En studie i Oncology Reports (2019) fant at mikroRNA-183-5p.1 fremmer spredning, migrasjon og invasjon av tumorceller ved å hemme Bcl 2/P53-signalkaskaden. I tillegg nedregulerer det også TPM1-genet for å utøve disse effektene. Dermed foreslås både mikroRNA og TPM1 som effektive molekylære mål for utvikling av målrettede behandlinger mot magekreft [2].
- Legemiddelscreening: AGS-celler har ofte blitt brukt til å screene nye og effektive legemidler mot magekreft. Forskere evaluerer cytotoksisiteten og effekten av potensielle legemidler ved hjelp av AGS-cellelinjen. Det er også gjennomført studier for å identifisere nye molekylære mål og utvikle nye målrettede behandlinger for å bekjempe magekreft. Forskning utført i 2021 benyttet AGS-magesvulstceller og studerte den terapeutiske effekten av legemidlet paklitaxel. Funnene avslørte at paklitaxel induserer en mitotisk katastrofe, en integrert mekanisme for apoptose eller celledød i AGS-celler. I tillegg fremmet det også autofagi i magesvulstceller [3].
- Interaksjoner mellom vert og patogen: AGS-kreftcellelinjen brukes også til å studere interaksjoner mellom vert og patogen. Dette hjelper forskere med å forstå de cellulære mekanismene og responsene som er involvert i en infeksjon. For eksempel observerte en studie utført i 2020 at små ikke-kodende RNA-er som finnes i ytre membranvesikler av Helicobacter pylori reduserer interleukin 8-sekresjonen i humane AGS-celler [4].
5. Forskningspublikasjoner om AGS-cellelinjen
Denne delen av artikkelen vil omhandle noen interessante og mest siterte forskningspublikasjoner som omhandler AGS-celler.
Denne studien i Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) foreslo at salidrosid, et naturlig stoff, induserer beskyttende autofagi og celledød i AGS-celler fra mageepitelet via modulering av PI3K/AKT/mTOR-signalveien.
Denne studien ble publisert i Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Den undersøkte de synergistiske antikrefteffektene av astragalus-polysakkarid og legemidlet apatinib i AGS-celler. Studienes funn avslørte at astragalus forsterker apatinibs antitumoreffekter via undertrykkelse av AKT-signalering.
Denne forskningen i Journal of Ethnopharmacology (2018) foreslo at curcuzedoalide, en naturlig forbindelse fra Curcuma zedoaria Roscoe-planten, bidrar til dens potensielle cytotoksisitet mot AGS-celler.
Overekspresjon av FOXA1 hemmer celleproliferasjon og EMT av humane AGS-celler fra magesvulst
Denne publikasjonen i Gene (2018) foreslo at oppregulering av FOXA1 undertrykker AGS-celleproliferasjon og epitel-til-mesenkym-overgang (EMT) og invasjon.
sncRNA-er pakket av Helicobacter pylori-yttermembranvesikler demper IL-8-sekresjon i humane celler
Denne forskningsartikkelen ble publisert i International Journal of Medical Microbiology i 2020. I denne studien ble AGS-celler brukt til å studere interaksjoner mellom vert og patogen. Funnene avslørte at Helicobacter pylori inneholder noe ikke-kodende RNA i sine ytre membranvesikler som påvirker IL-8-nivåene i AGS-celler.
Ressurser for AGS-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
Følgende er noen ressurser som omhandler AGS-celler.
- Transfeksjonsprotokoll for AGS-celler: Denne videoen er en trinnvis veiledning for å lære transfeksjonsprotokollen for gastriske epitel-AGS-celler.
Følgende lenke inneholder protokollen for AGS-cellekultur.
- AGS-cellekulturprotokoll: Dette nettstedet inneholder nyttig informasjon om AGS-cellemedier og cellekulturprotokoller. Kort sagt gir det en protokoll for subkultivering av gastriske epitel-AGS-celler og håndtering av prolifererende og kryokonserverte AGS-kulturer.
- Subkultivering av AGS-celler: Dette nettstedet forklarer subkultiveringsprosedyren for AGS-celler i detalj.
Referanser
- Phuc, B.H., et al., Sammenlignende genomikk av to vietnamesiske Helicobacter pylori-stammer, CHC155 fra en pasient med gastrisk kreft utenfor cardia og VN1291 fra en pasient med duodenalsår. Vitenskapelige rapporter, 2023. 13(1): s. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 fremmer migrasjon og invasjon av AGS-celler fra magesvulst ved å målrette TPM1 Rettelse i/10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): s. 2371-2381.
- Khing, T.M., et al., Effekten av paklitaxel på apoptose, autofagi og mitotisk katastrofe i AGS-celler. Scientific Reports, 2021. 11(1): s. 23490.
- Zhang, H., et al., sncRNA-er pakket av Helicobacter pylori-yttermembranvesikler demper IL-8-sekresjon i humane celler. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): s. 151356.