A375-cellelinjen – En guide til melanomforskning

A375 er en human melanomcellelinje som er mye brukt i toksikologi- og immuno-onkologisk forskning. Forskere bruker denne cellelinjen til å studere kreftbiologi og signalveier, teste eller screene potensielle kreftmidler og utvikle nye og effektive behandlingsformer.

Opprinnelse og generelle egenskaper ved A375-celler

Å vite om en cellelinjes opprinnelse og generelle egenskaper kan hjelpe deg med å planlegge bruken av den i forskning. Denne delen av artikkelen vil dekke opprinnelsen og egenskapene til A375-cellelinjen. For eksempel, hva er A375-cellelinjen? Hva er egenskapene til A375-cellelinjen? Hvor kommer A375-celler fra? Hva er morfologien til A375-melanomceller? Hva er størrelsen på A375-celler?

• Hudkreftcellelinjen A375 stammer fra eksplantatkulturen av en solid svulst hos en 54 år gammel kvinne med malignt melanom [1].
• A375-celler har epitel-lignende morfologi.
• A375-cellestørrelsen er relativt mindre sammenlignet med andre cellelinjer. De har omtrent en diameter på 12 µm.
• A375-melanomcellene er hypotriploide. Det modale kromosomtall for denne cellelinjen er 62. Vanligvis har hver celle ni markørkromosomer og én kopi av normale N2-, N6- og N22-kromosomer.

A375-celler: Informasjon om cellekulturer

A375-cellekulturer er enkle å vedlikeholde. De har ingen spesielle krav til cellekulturen. Denne delen vil hjelpe deg med å lære den nødvendige informasjonen om cellekulturen. For eksempel hva er doblingstiden for A375? Hva er mediet for A375-cellelinjen? Hva er såtettheten for A375? Er A375-melanomceller vedheftende?

Viktige punkter for dyrking av A375-celler

Populasjonens doblingstid:

Doblingstiden for A375 er 20 timer.

Adhærent eller i suspensjon:

A375 er en vedheftende human melanomcellelinje.

Utsåingstetthet:

En celletetthet på 1 x 10⁴ celler/cm² er ideell for A375-cellekulturer. Adhærente celler skylles med 1 x fosfatbuffersaltvann (PBS) og inkuberes med passasjeløsning (Accutase). Deretter tilsettes cellene dyrkningsmedium og sentrifugeres. De høstede cellene resuspenderes i et dyrkningsmedium og fordeles i nye kolber for vekst.

Vekstmedium:

DMEM anbefales som ideelt A375-medium når det tilsettes 10 % føtal bovint serum (FBS), 4,5 g/l glukose, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamin og 1,0 mM natriumpyruvat. A375-mediet bør skiftes ut 2–3 ganger i uken.

Vekstbetingelser:

A375-melanomceller dyrkes i en fuktet inkubator (37 °C) med 5 % CO2-tilførsel.

Oppbevaring:

Frosne A375-celler bør oppbevares under -150 °C i dampfasen av flytende nitrogen eller i en elektrisk fryser.

Fryseprosess og medium:

CM-1- eller CM-ACF-medier brukes til å fryse A375-cellelinjen. En langsom fryseprosess som tillater en gradvis temperaturreduksjon på 1 °C, er valgt for å beskytte cellenes levedyktighet.

Tineprosess:

Det frosne A375-melanomcelleampullet ristes raskt i vannbadet i 40 til 60 sekunder til det bare er en liten isklump igjen. Cellene tilsettes ferskt medium og sentrifugeres for å fjerne frysemediumelementer. Den oppnådde cellepelleten ble igjen resuspendert og hellet i nye kolber.

Biosikkerhetsnivå:

A375-kulturer håndteres og oppbevares i laboratoriemiljøer med biosikkerhetsnivå 1.

Forskningsanvendelser av A375-cellelinjen

A375-cellelinjen har omfattende forskningsanvendelser innen kreftforskning. Her er noen av de vanligste områdene hvor A375-celler benyttes.

• Kreftforskning: A375-celler har mange anvendelser i melanomforskning. Forskere brukte disse cellene til å undersøke hudkreftbiologi, prosesser og underliggende cellesignaliseringsmekanismer, inkludert celleproliferasjon, migrasjon og invasjon. Dette kan også hjelpe forskere med å identifisere nye molekylære terapeutiske mål. En studie utført av Lin Zhu og kolleger i 2019 brukte svært aggressive melanomceller A375 og fant ut hvilken rolle mikroRNA-3662 spiller for veksten og invasjonen av A375-melanomceller. Studiens funn viser at mikroRNA-3662 retter seg mot ZEB1-genet og regulerer melanomcelleveksten in vitro og in vivo i A375-tumormodellen [2]. På samme måte fant forskning utført i 2018 at PI3K/AKT- og MAPK/ERK-signalveiene er involvert i proliferasjonen og metastaseringen av A375-cellelinjen [3].
• Legemiddelutvikling og testing: A375-cellelinjen er en nyttig in vitro-tumormodell for testing og screening av potensielle kreftmedisiner. Forskere evaluerer toksisiteten og effekten av nye kjemoterapeutiske legemidler, forbindelser og andre behandlingsformer ved hjelp av disse A375-melanomcellene. For eksempel undersøkte en studie kreftbekjempende egenskaper hos mikro- og nanovesikler avledet fra grapefrukt på A375-melanomceller fra mennesker. Resultatene viste at mikro- og nanovesikler induserer cellecyklusstans og apoptose og hemmer genuttrykk i celleproliferasjon, migrasjon og invasjon [4].

A375-celler: Publikasjoner

Noen viktige forskningspublikasjoner om A375-celler er nevnt her.

Vitamin D og dets lavkalsemiske analoger modulerer de kreftbekjempende egenskapene til cisplatin og dacarbazin i den humane melanomcellelinjen A375

Denne studien ble publisert i Journal of Oncology i 2019. Studien foreslo at kombinasjonsbehandling med vitamin D og analoger forbedrer den kreftbekjempende aktiviteten til cisplatin og dakarbazin i A375-melanomceller.

In vitro-evaluering av anti-melanom-effektene (A375-cellelinje) av gel- og helbladsekstrakter fra utvalgte aloe-arter

Denne forskningen ble publisert i Journal of Herbal Medicine i 2022. Studien undersøkte de anti-melanom-effektene av aloe vera-gel i A375-melanomceller.

Fermitin-familiemedlem 2 fremmer utviklingen av melanom ved å styrke bindingen av p-α-Pix til Rac1 for å aktivere MAPK-signalveien

Denne studien i Oncogene (2021) foreslo at fermitin-familiemedlem 2 (FERMT2 eller kindlin-2) fremmer utviklingen av melanom ved å aktivere MAPK gjennom binding med p-α-Pix og Rac1.

FARP1 fremmer celleproliferasjon ved å modulere MAPK-signalveien i kutan melanom

Denne studien i The American Journal of Dermatopathology (2019) foreslo at FARP1 kan fremme utvikling og progresjon av kutan melanom. Dermed kan det være et nyttig terapeutisk mål.

Cytotoksisk og apoptotisk potensial av Phyllodium elegans-ekstrakter på humane kreftcellelinjer

Denne forskningsartikkelen ble publisert i Bioengineered (2019). Denne studien undersøkte den cytotoksiske og apoptotiske aktiviteten til et ekstrakt fra planten Phyllodium elegans på humane karsinomcellelinjer, inkludert A375.

Ressurser for A375-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer

Følgende er noen nettressurser som omhandler A375-celler.

• A375-celletransfeksjon: Denne videoopplæringen vil hjelpe deg med å lære A375-celletransfeksjon trinn for trinn.
• Cellekultivering: Denne videoen inneholder svært nyttig informasjon om dyrking av cellelinjer.

Protokollene for cellekultur for A375-celler er oppført her.

• A375-cellelinje: Denne lenken inneholder nyttig informasjon om dyrking og vedlikehold av A375-cellelinjen, inkludert A375-medier og håndtering av frosne og prolifererende A375-kulturer.

Referanser

1. Avram, S., et al., Standardisering av A375 humane melanommodeller på kyllingembryoets korioallantoismembran og Balb/c nakne mus. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 retter seg mot ZEB1 og demper invasjonen av den svært aggressive melanomcellelinjen A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C hemmer melanom A375-celleproliferasjon og metastase ved å undertrykke PI3K/Akt- og MAPK/ERK-signalveiene. Life sciences, 2018. 206: s. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Mikro- og nanovesikler avledet fra grapefrukt viser distinkte metabolomprofiler og antikreftaktiviteter i den humane melanomcellelinjen A375. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.