NCI-H1299-celler: Forskning og kliniske implikasjoner av NCI-H1299-lungekreftceller

Informasjon om dyrking

Det er ikke enkelt å opprettholde en cellelinjekultur før du kjenner til all viktig informasjon om den, inkludert: Hva er doblingstiden for NCI-H1299? Hva er utsåingstettheten for NCI-H1299? Hva er cellemediet for NCI-H1299? Hvordan dyrker man NCI-H1299-cellelinjer? Dette avsnittet vil hjelpe deg med å finne svarene på alle disse spørsmålene om dyrking av NCI-H1299-celler.

Viktige punkter for dyrking av NCI-H1299-celler

Fordoblingstid:

Fordoblingstiden for NCI-H1299 ligger mellom 22 og 30 timer.

Adherente eller i suspensjon:

NCI-H1299 er en vedheftende cellelinje.

Subkultiveringsforhold:

NCI-H1299-celler subkultiveres i et anbefalt forhold på 1:3 til 1:6. For utsåing vaskes vedheftende celler med 1x PBS og inkuberes med Accutase-passasjeløsning i 8 til 10 minutter ved romtemperatur. Løsrevne celler tilsettes ferskt dyrkningsmedium og sentrifugeres. Cellepelleten resuspenderes deretter, og cellene helles over i nye kolber som inneholder vekstmedium.

Vekstmedium:

RPM1 1640 er et ideelt dyrkingsmedium for NCI-H1299-celler. Det tilsettes 10 % føtalt bovint serum, 4500 mg/L glukose, 2,0 mM L-glutamin, 1 mM natriumpyruvat, 1500 mg/L NaHCO3 og 10 mM HEPES. Mediet bør skiftes ut 2–3 ganger i uken.

Vekstbetingelser:

NCI-H1299-lungekreftcellekulturer holdes i en fuktet inkubator ved 37 °C med 5 % CO₂-tilførsel.

Oppbevaring:

NCI-H1299-cellelinjen kan lagres på lang sikt i dampfasen av flytende nitrogen eller i frysere med ultralav temperatur på under -150 °C.

Fryseprosess og medium:

CM-1 eller CM-ACF er frysemedier for NCI-H1299-celler. Cellene fryses ved hjelp av en langsom fryseprosess som tillater kun en temperaturreduksjon på 1 grad per minutt for å beskytte cellenes levedyktighet.

Tineprosess:

Frosne NCI-H1299-celler ristes raskt i et forvarmet vannbad ved 37 grader Celsius i 40 til 60 sekunder, til det kun gjenstår en liten isklump. Tinte celler tilsettes ferskt medium og kan dyrkes direkte i nye kolber eller sentrifugeres. I det første tilfellet bør mediet skiftes ut etter 24 timers inkubasjon. Sentrifugering bidrar til å fjerne rester av frysemediet. Deretter resuspenderes de høstede cellene i ferskt medium og overføres til en ny kolbe for dyrking.

Biosikkerhetsnivå:

Det kreves et laboratorium med biosikkerhetsnivå 1 for håndtering av NCI-H1299-cellekultur.

Kjøp NCI-H1299-cellelinjen: Forskningsverktøy av høy kvalitet for å undersøke biologien bak lungekreft

Fordeler og ulemper ved NCI-H1299-celler

I likhet med andre humane kreftcellelinjer har også NCI-H1299 noen særpreg som er forbundet med spesifikke fordeler og ulemper. Her har vi oppsummert noen av de viktigste.

Fordeler

De viktigste fordelene ved NCI-H1299-cellelinjen for ikke-småcellet lungekreft er:

• In vitro-modell for lungekreft

  NCI-H1299-cellelinjer er utviklet fra lymfeknute-metastaser fra lungekreft og har derfor relativt like egenskaper. Derfor kan disse cellene fungere som en in vitro-modell for å undersøke lungekreftbiologi, celle- og molekylære mekanismer samt for å screene og teste potensielle behandlingsmetoder.

• Enkel å dyrke

  NCI-H1299-celler er enkle å dyrke og vedlikeholde i et forskningslaboratorium. Det er ingen krevende krav eller prosedyrer for cellekulturen.

• NCI-H1299 P53 og NCI-H1299 KRAS-mutasjon

  NCI-H1299-celler mangler p53-genuttrykk, noe som gjør at cellene kan formere seg kraftig. Videre har de en KRAS-mutasjon som bidrar til cellevekst, proliferasjon, invasjon og migrasjon. Med tanke på dette bruker forskere H1299-celler til å undersøke molekylære mekanismer knyttet til KRAS- og P53-mutasjoner.

Ulemper

Ulempene ved NCI-H1299-celler er:

• Vevsspesifisitet

  NCI-H1299 stammer fra lungevev. Derfor er anvendbarheten hovedsakelig begrenset til forskning på lungekreft. Den representerer kanskje ikke fullt ut heterogeniteten og de generelle egenskapene til andre krefttyper.

Forskningsanvendelser av NCI-H1299-celler

NCI-H1299-cellelinjen brukes i stor utstrekning i lungekreftforskning. Her nevnes noen lovende anvendelser av denne cellelinjen.

• Kreftbiologi: NCI-H1299-celler fungerer som et utmerket forskningsverktøy for å undersøke kreftutvikling, progresjon og relaterte celle- og molekylære mekanismer. Disse cellene bærer visse mutasjoner, noe som gjør det mulig for forskere å utforske relaterte kreftcelleatferd, signalveier og genuttrykkprofiler. Flere studier har benyttet NCI-H1299-cellelinjen for ikke-småcellet lungekreft til å studere lungekreftbiologi. For eksempel undersøkte en studie gjennomført i 2018 signalveien involvert i apoptose hos lungekreftceller ved bruk av NCI-H1299-celler. Forskerne fant at PI3K/AKT-signalveien bidrar til celleproliferasjon, og at hemming av denne kan føre til kreftcelledød [1]. På samme måte undersøkte en annen studie mekanismene involvert i epitel-til-mesenkymal overgang (EMT) hos NCI-H1299. Denne studien antydet at et ekstracellulært protein, SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), bidrar til EMT og migrasjon i NCI-H1299-celler og dermed fremmer tumorigenese – SPARC-proteinet fungerer som en mediator for TGF-β1-signalering [2]. 

• Legemiddelutvikling og screening: NCI-H1299, en human lungekreftcellelinje, brukes i stor utstrekning til å vurdere toksisiteten og effekten av potensielle legemidler. I tillegg benyttes den av forskere for å undersøke virkningsmekanismen til antitumorlegemidler. Studier har også benyttet disse cellene til å identifisere mulige legemiddelmål og resistensmekanismer. For eksempel undersøkte forskning utført av Xiao-Yun Shen og kolleger kreftbekjempende potensialet til det naturlige stoffet brucein D (BD). Funnene viste at BD i betydelig grad hemmer proliferasjon, invasjon og migrasjon av NCI-H1299-celler. Derfor kan det betraktes som en potensiell adjuvant terapi for behandling av ikke-småcellet lungekreft [3]. Tilsvarende vurderte en studie de cytotoksiske effektene av xanthohumol alene og i kombinasjon med kjemoterapimedikamentet cisplatin på NCI-H1299-lungekreftceller [4].

Ofte stilte spørsmål om NCI-H1299-cellelinjen

Referanser

1. Gu, J., et al., Studie av EGCG-indusert apoptose i lungekreftceller ved å hemme PI3K/Akt-signalveien. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557–4563.
2. Sun, W., et al., SPARC fungerer som en mediator for TGF-β1 ved å fremme epitel-til-mesenkymal overgang i A549- og H1299-lungekreftceller. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453–464.
3. Shen, X.-Y., m.fl., En studie av virkningsmekanismen til brucein D ved behandling av ikke-småcellede lungekreftceller av typen H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
4. Long, B., et al., Cytotoksiske effekter av xanthohumol og kombinasjonen med cisplatin på humane metastatiske lungekreftceller av typen H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1–15.