MCF10A-cellelinjen: Å avdekke brystkreftbiologien i ikke-tumorogene sammenhenger
MCF10A-cellelinjen er et sentralt verktøy i brystkreftforskningen og representerer en immortalisert, men ikke-tumorigenisk modell av humane brystepitelceller. Denne cellelinjen brukes i stor utstrekning til å utforske kompleksiteten i normal brystcellefunksjon, transformasjonsprosesser og de underliggende mekanismene i brystbiologien, inkludert celleatferd, signalveier og genuttrykkmønstre. Videre fungerer MCF10A-celler som en avgjørende ressurs for å utforske utviklingen av brysttumorer, forstå progresjonen og evaluere potensielle behandlingsstrategier.
Opprinnelse og generelle egenskaper ved MCF10A-celler
Når man går i dybden på MCF10A-cellelinjen, prioriterer forskere å forstå dens opprinnelse og særtrekk, noe som kaster lys over dens anvendelse og nytteverdi i forskning. MCF10A-cellelinjen, som stammer fra brystkjertelen til en 36 år gammel kaukasisk kvinne med fibrocystisk brystsykdom i 1984, er kjent for sin ikke-tumorogene profil, noe som gjør den til en eksemplarisk modell for å studere normalt humant brystvev in vitro.
Viktige kjennetegn ved MCF10A-cellelinjen inkluderer:
- Epitelial morfologi: MCF10A-celler vokser vanligvis i monolag, men kan også danne kuppelformede strukturer i konfluente kulturer, noe som understreker deres dynamiske vekstmønstre.
- Cellestørrelse: Størrelsen på MCF10A-celler varierer mellom 14,5 μm og 26,2 μm, noe som gir rom for en rekke eksperimentelle oppsett.
- Karyotype: MCF10A-celler har en karyotype med 47 kromosomer, noe som gir innsikt i genetiske studier og kromosomforskning i brystepitelceller.
MCF10AT1: Et premalignt derivat
MCF10AT1-cellelinjen, utviklet ved transfeksjon av MCF10A-celler med HRAS-genet, representerer et premalignt stadium som er i stand til å danne duktale strukturer og lesjoner som ligner på atypisk duktal hyperplasi (ADH) og duktalt karsinom in situ (DCIS) når den innføres i immunsvekkede mus. Denne transformasjonen understreker cellelinjens nytteverdi i modellering av utviklingen av brystkreft i tidlige stadier og i studiet av overgangen fra godartede til ondartede tilstander.
MCF10A-celler: Informasjon om cellekultur
MCF10A, en mye brukt cellelinje i brystkreftforskning, krever nøyaktig håndtering og vedlikehold for å sikre levedyktighet og anvendelighet i eksperimentelle sammenhenger. Denne veiledningen beskriver de viktigste hensynene for effektiv dyrking av MCF10A-celler, og tar for seg deres doblingstid, anbefalte medier, utsåingstetthet og vedheftsegenskaper.
Viktige punkter for dyrking av MCF10A-celler
Fordoblingstid for populasjonen: MCF10A-cellelinjen har vanligvis en fordoblingstid på rundt 20 timer, noe som indikerer en robust vekstrate under optimale forhold.
Adhesjonsegenskaper: Disse cellene viser et adhesivt vekstmønster, noe som krever et fast substrat for feste og proliferasjon.
Praksis for subkultivering: For subkultivering anbefales et delingsforhold på 1:2 til 1:4. Protokollen innebærer å vaske cellene med PBS, løsne dem med Accutase og deretter overføre dem til en ny kolbe etter sentrifugering og resuspensjon i ferskt medium. Det anbefales å skifte dyrkingsmediet to til tre ganger per uke for å fremme sunn vekst.
Vekstmedium: MCF10A-celler trives i MEGM, et spesialisert medium som bør berikes med 100 ng/ml koleratoksin for å optimalisere cellevekst og -funksjon.
Optimale vekstforhold: Kulturene bør oppbevares i en fuktet inkubator innstilt på 37 °C med en atmosfære på 5 % CO₂ for å gjenskape fysiologiske forhold så nøyaktig som mulig.
Retningslinjer for oppbevaring: Ved langtidsoppbevaring bør cellene oppbevares i dampfasen av flytende nitrogen eller ved temperaturer under -150 °C i en fryser med ultralav temperatur.
Fryse- og tineprosedyrer: Det anbefalte frysemediet for MCF10A-celler er enten CM-1 eller CM-ACF. Bruk en langsom fryseteknikk for å minimere termisk sjokk. Tining bør skje forsiktig i et vannbad ved 37 °C til det gjenstår en liten isklump. Deretter bør cellene blandes med ferskt dyrkningsmedium, sentrifugeres, og cellepelleten resuspenderes i nytt medium før overføring til en dyrkningskolbe.
Hensyn til biosikkerhet: MCF10A-cellekulturer kan håndteres trygt i laboratoriemiljøer på biosikkerhetsnivå 1, noe som sikrer enkel vedlikehold og overholdelse av sikkerhetsstandarder.
Å følge disse retningslinjene vil legge til rette for vellykket dyrking av MCF10A-celler, slik at de kan fortsette å bidra til fremskritt innen brystkreftforskningen.
Publisert: 2023 | Sist oppdatert: mai 2026
- Fordeler og begrensninger ved MCF10A-cellelinjen
- Forskningsanvendelser av MCF10A-cellelinjen
- MCF10A-celler: Informasjon om cellekultur
- Opprinnelse og generelle egenskaper ved MCF10A-celler
- Utnytt potensialet i forskningen din med våre MCF10A-celler
- MCF10A-celler: Forskningspublikasjoner
- Ressurser for MCF10A-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
- Utforsk MCF10A-celler: En omfattende FAQ om deres rolle i brystkreftforskning og cellebiologi
- Ofte stilte spørsmål
Fordeler og begrensninger ved MCF10A-cellelinjen
Å utforske MCF10A-cellelinjen gir en nyansert forståelse av både dens fordelaktige egenskaper og iboende begrensninger, noe som er avgjørende for effektiv anvendelse i brystkreftforskning.
Fordeler
Ikke-tumorigenisk natur: Et kjennetegn ved MCF10A-celler er deres ikke-tumorigeniske egenskaper, noe som gjør det mulig for forskere å studere normal brystcelleatferd og -biologi uten komplikasjoner knyttet til tumordannelse hos immunsvake mus.
Dannelse av 3D-strukturer: MCF10A-celler har den unike evnen til å danne tredimensjonale acinære strukturer som ligner normalt brystepitel når de dyrkes i spesifikke medier, for eksempel kollagen. Denne evnen er avgjørende for å studere brystcellers organisering og atferd i en 3D-kontekst, og gir innsikt som ligger nærmere in vivo-forholdene.
Begrensninger
- Fenotypisk plastisitet: Til tross for fordelene viser MCF10A-celler variasjon i fenotype og atferd under ulike dyrkingsforhold, noe som potensielt kan påvirke konsistensen og reproduserbarheten av eksperimentelle resultater.
Forskningsanvendelser av MCF10A-cellelinjen
MCF10A-cellelinjen er en hjørnestein i mangesidige forskningsparadigmer, særlig innen brystcellebiologi og onkologi. Her beskriver vi dens mangfoldige anvendelser:
Normal brystepitel-funksjon
MCF10A-celler spiller en avgjørende rolle in vitro for å belyse kompleksiteten i normale brystepitelcellers funksjoner, herunder celle-til-celle-adhesjon formidlet av proteiner som E-kadherin, morfogenetiske prosesser og komplekse signalkaskader. Selv om de er uvurderlige, understreker sammenligningen med ondartede motstykker som MCF7-celler av og til at cellelinjen ikke fullt ut kan gjenskape det kreftrelaterte miljøet som observeres in vivo.
Farmakologisk profilering
Som en fremragende modell benyttes MCF10A-celler i farmakologisk profilering for å kartlegge cytotoksisiteten og det terapeutiske potensialet til nye legemidler mot brystkreft. Disse cellene har for eksempel vært avgjørende for å fastslå effekten av bioaktive bestanddeler fra plantebaserte midler som Senna alata, og dermed underbygge deres bidrag til nye terapeutiske strategier.
Forskning på kreftutvikling
Til tross for sin ikke-tumorigeniske opprinnelse utgjør MCF10A-celler en fleksibel modell for å studere brysttumorigenese. Brukt sammen med tumorigeniske cellelinjer eller modifisert ved hjelp av genteknologi, muliggjør de utforskning av den molekylære opprinnelsen og utviklingen av brystkreft. Slike anvendelser illustreres av forskning der man manipulerer gener, inkludert PHLDA1, i MCF10A-celler for å undersøke deres innflytelse på cellemigrasjon og -invasjon, og dermed belyser nye potensielle mål for intervensjon.
Tredimensjonale kulturmodeller
MCF10A-celler trives i tredimensjonale (3D) dyrkingssystemer, for eksempel blandede Matrigel-miljøer, som etterligner in vivo-forholdene og fremmer vår forståelse av den romlige og mekaniske konteksten for celleatferd. Denne 3D-tilnærmingen er avgjørende for å kartlegge signalveiene som styrer differensieringen av brystceller og den morfologiske utviklingen av tidlige neoplastiske lesjoner.
Vurdering av metastasepotensial
Undersøkelser av mekanismene som ligger til grunn for metastase utnytter MCF10A-celler til å simulere overgangen fra epitel til mesenkym, en avgjørende hendelse i metastatisk spredning. Forskere observerer disse overgangene i ulike cellemodeller ved hjelp av markører som E-kadherin for å få innsikt i celledynamikken under utviklingen av brystkreft.
Dannelse av mammosfærer og studier av stamceller
MCF10A-cellers evne til å danne mammosfærer når de dyrkes under ikke-adherente forhold, gjør dem til en uvurderlig ressurs for å studere brystprogenitorceller og deres rolle i brystkreftbiologien, fra initiering til utvikling av invasive egenskaper.
Den bemerkelsesverdige allsidigheten og likheten mellom MCF10A-celler og humant brystepitel styrker deres status som et uunnværlig verktøy i den pågående jakten på å avdekke brystkreftens kompleksitet, noe som understreker deres vedvarende verdi i banebrytende forskning.
Utnytt potensialet i forskningen din med våre MCF10A-celler
MCF10A-celler: Forskningspublikasjoner
Her fremheves noen av de mest bemerkelsesverdige og hyppigst siterte forskningsstudiene som har benyttet MCF10A-cellelinjen, og som har bidratt betydelig til brystkreftforskningen.
Innsikt i TGF-β-signalveien: En banebrytende studie publisert i International Journal of Oncology (2004) undersøkte TGF-β-signalveien i MCF10A-celler og avslørte at TGF-β-behandling kan indusere migrasjons- og invasjonsfenotyper, noe som understreker kompleksiteten i cellenes responser på TGF-β.
Studie av giftsekkeekstrakt: Forskning presentert i *Toxin Reviews* (2023) utforsket effektene av giftsekkeekstrakt fra Vespa orientalis-hornet på MCF10A-celler, og undersøkte dets cytotoksiske, nekrotiske, apoptotiske og autofagiske egenskaper, og åpnet dermed nye veier for forståelsen av cellers respons på naturlige toksiner.
Leptins rolle i celleinvasjon: En studie i Cells (2019) foreslo at leptin, et velkjent adipokin, fremmer uttrykket av EMT-relaterte transkripsjonsfaktorer og forsterker invasjonen i MCF10A-celler gjennom en signalvei avhengig av Src og FAK, noe som fremhever det intrikate samspillet mellom adipokiner og kreftcellers atferd.
Connexin 32s tumorigeniske egenskaper: Publisert i *Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Molecular Cell Research (2020), antydet denne studien at connexin-32-proteinet kan gi MCF10A-celler tumorfremmende egenskaper, noe som tyder på en potensiell rolle for connexin-32 i de tidlige stadiene av brystkreftutviklingen.
Effekten av Pseudevernia furfuracea-ekstrakt: En artikkel i «Biomolecules» (2021) vurderte virkningen av Pseudevernia furfuracea (L.) Zopf-ekstrakt og dets metabolitt fysodinsyre på moduleringen av tumormikromiljøet i MCF10A-celler, og gir innsikt i de potensielle terapeutiske anvendelsene av naturlige forbindelser ved modulering av interaksjoner mellom tumor og stroma.
Disse publikasjonene understreker allsidigheten og anvendbarheten til MCF10A-cellelinjen når det gjelder å fremme vår forståelse av brystkreftbiologi, fra å utforske cellulære signalveier til å evaluere de potensielle terapeutiske effektene av naturlige og syntetiske forbindelser.
Ressurser for MCF10A-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
Her følger noen nettressurser for MCF10A-celler.
- MCF10A-transfeksjon: Denne lenken gir en detaljert protokoll for transfeksjon av plasmid-DNA inn i MCF10A-celler.
- Protokoller for cellekultur: Denne videoen forklarer den grunnleggende protokollen for passasjering, frysing og tining av vedheftende celler.
Protokollen for MCF10A-cellekultur er oppført her.
- MCF10A-cellekulturprotokoll: Dette dokumentet inneholder en trinnvis protokoll for passering av MCF10A-celler.
- Subkultivering av MCF10A-celler: Denne lenken vil hjelpe deg med å lære protokollen for subkultivering av MCF10A-brystepitelceller.
- MCF10A-cellelinje: Denne nettsiden vil hjelpe deg med å lære alle de grunnleggende protokollene for MCF10A-cellekultur, inkludert protokoller for subkultivering og håndtering av proliferative og kryokonserverte kulturer.
En nærmere titt på MCF10A-celler: En omfattende FAQ om deres rolle i brystkreftforskning og cellebiologi
MCF 10A-cellelinjene er udødeliggjorte, ikke-tumorogene epitelceller som stammer fra humant brystvev. De brukes i stor utstrekning som in vitro-modeller for å studere utviklingen av brystsvulster, fordi de ligner på normalt brystepitel og har evnen til å gjennomgå onkogen transformasjon.
MCF 10A-cellelinjen uttrykker E-cadherin, et viktig protein for celle-celle-adhesjon og opprettholdelse av epitelets integritet. Endringer i uttrykket av E-cadherin i MCF 10A-celler gjør det mulig for forskere å studere dets rolle i brystkreftsvulster, særlig hvordan nedregulering av E-cadherin kan føre til overgang fra epitel til mesenkym, som er et viktig trinn i metastasering.
MCF 10A-celler er i stand til å danne mammosfærer i suspensjonskultur, noe som er en indikasjon på at det finnes progenitorceller fra brystcellene. Mammosfærekultur er en teknikk som brukes til å anrike disse stamcellene og studere deres rolle i brystcellenes biologi og kreft.
Blandede Matrigel-matriser gir et tredimensjonalt stillas som ligner den ekstracellulære matrisen in vivo, og som fremmer vekst og differensiering av MCF 10A-celler til mammosfærer. Dette 3D-miljøet er avgjørende for å studere cellenes fenotype i 3D-kultur og deres oppførsel under tumorigenese.
Immunfluorescensfarging av MCF 10A-celler kan avsløre uttrykk og lokalisering av spesifikke proteiner, noe som gir innsikt i de molekylære mekanismene som ligger til grunn for overgangen fra en normal til en invasiv brystkarsinomfenotype. Slike studier kan også belyse hvilken rolle genomisk signalering spiller i denne prosessen.
MCF 10A-modellen er et effektivt in vitro-system for å studere EMT ved at forskerne kan indusere EMT-markører og observere de fenotypiske endringene som oppstår. Dette bidrar til å forstå utviklingen fra en ikke-invasiv til en invasiv fenotype i kreft.
EGF er en viktig komponent i dyrkingsmediet for MCF 10A-celler, spesielt i 3D-kulturmodeller. Det fungerer som et mitogen og er avgjørende for cellenes proliferasjon og overlevelse. Fravær eller tilstedeværelse av EGF kan påvirke cellenes fenotype og atferd i betydelig grad.
MCF10A-sublinjer, som har spesifikke genetiske modifikasjoner, og trypsininhibitor fra soyabønner, en komponent som brukes til å hemme trypsinaktivitet under cellepassasje, er verktøy som brukes av brystkreftforskere til å utforske ulike aspekter ved kreftbiologi, inkludert resistensmekanismer og behandlingsrespons.
Immunhistokjemi og immunfluorescensfarging er viktige teknikker for å karakterisere fenotypen til MCF 10A-celler i mammosfærer. De gjør det mulig å visualisere spesifikke proteiner og fordelingen av disse, noe som gjør det lettere å studere celledifferensiering og identifisere stamcellelignende celler i mammosfærene.
Uttrykket av EMGFP-merket E-cadherin i MCF 10A-celler gjør det mulig å visualisere E-cadherin-mediert cellesignalering i sanntid. Dette øker forståelsen av hvordan E-cadherin bidrar til celleadhesjon, signalveier som er involvert i cellevekst, og dysregulering av disse prosessene i kreftutvikling.
Referanser
- Qu, Y., et al., Evaluering av MCF10A som en pålitelig modell for normale humane brystepitelceller. PLoS One, 2015. 10(7): s. e0131285.
- Marella, N.V., et al., Cytogenetisk analyse og cDNA-mikroarray-ekspresjonsanalyse av MCF10-cellelinjer for progresjon av humant brystkreft. Cancer Res, 2009. 69(14): s. 5946-53.
- So, J.Y., m.fl., Differensialuttrykk av sentrale signalproteiner i MCF10-cellelinjer, en modell for progresjon av humant brystkreft. Mol Cell Pharmacol, 2012. 4(1): s. 31–40.
- Goh, J.J.H., et al., Transkriptomikk indikerer at kjernedeling og celleadhesjon ikke gjenspeiles i MCF7 og MCF10A sammenlignet med luminal A-brysttumorer. Sci Rep, 2022. 12(1): s. 20902.
- Modarresi Chahardehi, A., m.fl., Lav cytotoksisitet og antiproliferativ aktivitet mot kreftceller hos planten Senna alata (Fabaceae). Revista de Biología Tropical, 2021. 69.
- Bonatto, N., et al., Nedregulering av PHLDA1 (pleckstrin-homologi-lignende domene, familie A, medlem 1) fremmer migrasjon og invasjon av MCF10A-brystepitelceller. Cell Adh Migr, 2018. 12(1): s. 37–46.