P19 šūnas — pētījumi par embrionālo karcinomu, izmantojot P19 šūnas
P19 ir peles embrionālās karcinomas šūnu līnija. To plaši izmanto biomedicīniskajos pētījumos, galvenokārt attīstības bioloģijas, cilmes šūnu bioloģijas, šūnu diferenciācijas un zāļu skrīninga izpētē. Tā kā P19 šūnām piemīt diferenciācijas spēja, tās var būt noderīgas sarežģītu bioloģisko procesu, piemēram, audu veidošanās un agrīnās embrionālās attīstības, izpētē. Šajā rakstā mēs apspriedīsim no pelēm iegūto P19 šūnu pamatus.
- Augšanas barotne
- DMEM/Ham's F12 barotne, kas satur 5 % liellopu embriju serumu, 3,1 g/l glikozes, 1,6 mM L-glutamīna, 1,0 mM nātrija piruvāta, 15 mM HEPES un 1,2 g/l NaHCO₃, ko izmanto P19 šūnu kultivēšanai.
- Dubultošanās laiks
- P19 šūnu līnijas reizināšanās laiks ir aptuveni 2 līdz 3 dienas.
- Augšanas veids
- P19 embrionālās karcinomas šūnu līnija ir adhezīva.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt P19
- P19 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par P19 šūnu kultivēšanu
- P19 šūnu līnija: priekšrocības un trūkumi
- P19 šūnu izmantošana pētniecībā
- Iegādājieties P19 šūnu līniju jau šodien
- P19 šūnas: pētniecības publikācijas
- Resursi par P19 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- P19 šūnu līnijas izpēte: bieži uzdotie jautājumi
- Atsauces
- Bieži uzdotie jautājumi
P19 šūnu vispārējās īpašības un izcelsme
Pirms sākt darbu ar šūnu līniju, ir svarīgi iepazīties ar tās vispārīgajām īpašībām un izcelsmi. Šajā sadaļā tiks aplūkoti šādi jautājumi: Kas ir P19 šūnu līnija? Kāds ir P19 šūnas izmērs? Kāda ir P19 šūnu izcelsme?
- P19 ir pluripotento embrionālo karcinomu šūnu veids, kas sākotnēji iegūts no teratokarcinomas, kas attīstījās C3H/He pelē. Šo šūnu līniju pirmo reizi izveidoja 1982. gadā McBurney un Rogers.
- P19 šūnas var nepārtraukti augt kultūras vidē, kas papildināta ar serumu. Tās var diferencēties citos šūnu tipos, ja tiek pakļautas netoksisku zāļu, piemēram, retinoīnskābes un dimetilsulfoksīda (DMSO), iedarbībai [1].
- Šīm peles karcinomas šūnām ir epitēlija tipa morfoloģija.
- P19 šūnu līnijai ir euploīds vīriešu kariotips (n=40; XY).
Informācija par P19 šūnu kultivēšanu
P19 šūnu līnija tiek plaši kultivēta pētniecības laboratorijās tās unikālo īpašību dēļ. Tās kultivēšana ir vienkārša un pārvaldāma. Šajā sadaļā ir minēta visa svarīgākā informācija, kas nepieciešama, lai uzturētu un audzētu P19 šūnu kultūru. Mēs uzzināsim: kāds ir P19 šūnu dubultošanās laiks? Kā kultivēt P19 šūnu līniju? Vai P19 ir adhezīva šūnu līnija?
Galvenie punkti par P19 šūnu kultivēšanu
Dubultošanās laiks:
P19 šūnu līnijas dubultošanās laiks ir aptuveni 2–3 dienas.
Adherenta vai suspensijā:
P19 embrionālās karcinomas šūnu līnija ir adhezīva.
Subkultivēšanas attiecība:
P19 šūnas jāpārkultivē ik pēc 48 stundām, un šīm šūnām jāuztur sadalīšanas attiecība 1:10. Adherentās šūnas mazgā ar 1X fosfāta buferšķīdumu un inkubē ar Accutase, līdz šūnas atdalās. Šūnām pievieno kultūras barotni un tās ievāc ar centrifugēšanu. Savāktās šūnas uzmanīgi atkārtoti suspendē un sadala jaunās kolbās.
Augšanas barotne:
DMEM/Ham’s F12 barotne, kas satur 5 % liellopu augļa serumu, 3,1 g/l glikozes, 1,6 mM L-glutamīna, 1,0 mM nātrija piruvāta, 15 mM HEPES un 1,2 g/l NaHCO₃, ko izmanto P19 šūnu kultivēšanai.
Augšanas apstākļi:
P19 embrionālās karcinomas šūnu līnijas audzēšanai un kultivēšanai ir nepieciešams mitrināts inkubators, kas iestatīts uz 37 °C ar 5 % CO₂ pievadi.
Uzglabāšana:
Sasaldētās P19 šūnu ampulas jāuzglabā temperatūrā zem -150 °C saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē, lai ilgtermiņā saglabātu šūnu dzīvotspēju.
Sasaldēšanas process un barotne:
P19 šūnu sasaldēšanai var izmantot CM-1 vai CM-ACF barotnes, izmantojot lēnas sasaldēšanas metodi, kas pasargā šūnas no jebkāda šoka un saglabā to dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās P19 šūnas var atkausēt 37 °C ūdens vannā, 40–60 sekundes strauji sakratot flakonu. Šūnām pievieno svaigu barotni un centrifugē, lai atbrīvotos no sasaldēšanas barotnes elementiem. Šūnu paleti atkārtoti suspendē un šūnas ielej jaunā kolbā audzēšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
P19 šūnu līnijai ir nepieciešama 1. līmeņa bioloģiskās drošības laboratorija.
P19 šūnu līnija: priekšrocības un trūkumi
Šajā sadaļā tiks apspriestas P19 šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi.
Priekšrocības
- Diferencēšanās potenciāls: P19 šūnas var diferencēties dažādos šūnu tipos, tostarp kardiomiocītos, neironos un mikrogliālajās šūnās. To diferencēšanai nepieciešami netoksiski medikamenti, piemēram, retinoīnskābe un dimetilsulfoksīds (DMSO). Retinoīnskābe veicina neironu, mikroglijas un astroglijas attīstību, savukārt DMSO iniciē sirds muskuļu šūnu un gludo muskuļu šūnu attīstību. Tādējādi P19 šūnas ir noderīgas šūnu diferenciācijas un attīstības procesu izpētē.
- Modeļa sistēma: Pluripotentā embrionālā karcinomas šūnu līnija P19 ir vērtīgs modelis agrīnās embrionālās attīstības pētīšanai. Pētnieki izmanto P19 šūnas, lai noskaidrotu šūnu signālceļus un šajos procesos iesaistītos šūnu un molekulāros mehānismus.
Trūkumi
- Pārņemta no pelēm: P19 ir peles embrionālās karcinomas šūnu līnija. Tādējādi pētījumu rezultāti, kas iegūti, izmantojot šīs šūnas, var nebūt pilnībā attiecināmi uz cilvēka bioloģiju un procesiem.
P19 šūnu izmantošana pētniecībā
P19 šūnām ir vairāki pētnieciskie pielietojumi, pateicoties to diferenciācijas spējai un nozīmei attīstības bioloģijā un cilmes šūnu pētniecībā. Daži no svarīgākajiem P19 embrionālās karcinomas šūnu pētnieciskajiem pielietojumiem ir:
- Šūnu diferenciācijas pētījumi: Kā zināms, P19 šūnas var diferenciēties par neironiem, mikrogliālajām šūnām, gludajām muskuļu šūnām un kardiomiocītiem; tādējādi tās plaši izmanto šūnu diferenciācijas procesu izpētei. Turklāt tās palīdz pētīt neiroloģisko un sirds attīstību, kā arī tās pamatā esošos mehānismus. 2018. gadā veikts pētījums atklāja, ka reaktīvie skābekļa savienojumi (ROS) virza P19 šūnu diferenciāciju konkrētos šūnu tipos un kavē citu šūnu tipu indukciju [3]. Citā pētījumā tika izpētīts retinoīnskābes mediētais neironu diferenciācijas process un konstatēta PI3K/Akt/GSK3β signālceļa iesaistīšanās [4].
- Attīstības bioloģija: P19 šūnas ir nenovērtējams modelis agrīnās embrionālās attīstības pētīšanai. Tās palīdz pētniekiem izprast sarežģītus bioloģiskos procesus, piemēram, audu veidošanos embrija attīstības laikā. Pētījumā tika izmantotas P19 šūnas, lai izpētītu molekulāros faktorus, kas veicina ventrikulārā starpsienas defekta (VSD) veidošanos. Rezultāti liecināja, ka gara nekodējoša RNS SNHG6 veicina VSD, negatīvi regulējot miRNA-101 un aktivizējot Wnt/β-katenīna ceļu [5].
- Zāļu testēšana: P19 peles embrionālās karcinomas šūnu līniju izmanto arī potenciālo zāļu kandidātu skrīningam. Vienā pētījumā tika izmantoti diferencēti P19 šūnu neironi, lai izpētītu sintētiskā L-Dopa un Mucuna pruriens sēklu ūdens ekstrakta neiroprotektīvo acetilholīnesterāzes inhibējošo iedarbību. Rezultāti liecināja, ka augu ekstrakts salīdzinājumā ar L-Dopa uzrādīja daudzsološus rezultātus [6].
Iegādājieties P19 šūnu līniju jau šodien
P19 šūnas: Pētniecības publikācijas
Šajā raksta sadaļā tiks apskatītas dažas interesantas pētniecības publikācijas, kurās aprakstītas P19 šūnas.
Šis raksts tika publicēts žurnālā „Oncology Reports” 2017. gadā. Pētījumā tika izvirzīta hipotēze, ka hipofīzes dzimumhormoni veicina teratokarcinomas šūnu līniju, tostarp P19 šūnu, adheziju, proliferāciju un migrāciju.
Garais nekodējošais RNS uc.4 ietekmē šūnu diferenciāciju caur TGF-beta signālceļu
Šajā publikācijā žurnālā „Experimental & Molecular Medicine“ (2018) tika izmantotas P19 šūnas un pētīta garās nekodējošās RNS uc.4 funkcija. Rezultāti liecināja, ka uc.4 ietekmē šūnu diferenciāciju, modulējot TGF-beta signālceļu.
Šis pētījuma raksts tika publicēts 2018. gadā žurnālā „Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine”. Pētījumā tika konstatēts, ka dabiskais smadzeņu audu ekstrakts un trīsdimensiju šūnu kultūra var paātrināt P19 embrionālās karcinomas šūnu diferenciāciju neironālās šūnās.
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Journal of Ethnopharmacology” 2020. gadā. Pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka Cichorium intybus L. lapu ekstrakts var inducēt P19 embrionālās karcinomas šūnu diferenciāciju par insulīnu ražojošām aizkuņģa dziedzera β šūnām.
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Molecules“ (2022. gadā). Šajā pētījumā tika izpētīta Mucuna pruriens sēklu ekstrakta neiroprotektīvā un acetilholīnesterāzes inhibējošā iedarbība uz P19 šūnu neironiem.
Resursi par P19 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir sniegti daži resursi par P19 šūnām.
- P19 šūnu neironu diferenciācijas protokols: Šajā rakstā ir iekļauts P19 šūnu neironu diferenciācijas protokols un cita noderīga informācija par P19 šūnu diferenciāciju.
- P19 šūnu transfekcija: Šī saite palīdzēs jums iepazīties ar P19 šūnu transfekcijas protokolu.
Šajā saitē ir atrodams P19 šūnu kultivēšanas protokols.
- P19 šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir apkopota visa noderīgā informācija par P19 šūnu līniju, tostarp tās kultivēšanas apstākļi, P19 šūnu barotnes, šūnu sadalīšana un daudz kas cits.
P19 šūnu līnijas izpēte: Biežāk uzdotie jautājumi
Atsauces
- McBurney, M.W., P19 embrionālās karcinomas šūnas. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): 135.–40. lpp.
- Bressler, J., et al., P19 embrionālās karcinomas šūnu līnija: modelis gēnu un vides mijiedarbības pētīšanai. Cell Culture Techniques, 2011: 223.–240. lpp.
- Pashkovskaia, N., U. Gey un G. Rödel, Mitohondriālie ROS virza peles pluripotento P19 šūnu diferenciāciju. Stem Cell Research, 2018. 30: 180.–191. lpp.
- Fu, F. u.c., All-trans-retinoīnskābe inducē P19 šūnu diferenciāciju neironos, kas iesaistīti PI3K/Akt/GSK3β signālceļā. „Journal of Cellular Biochemistry”, 2020. 121(11): 4386.–4396. lpp.
- Jiang, Y., et al., Garā nekodējošā RNS SNHG6 veicina ventrikulārā starpsienas defekta veidošanos, negatīvi regulējot miR-101 un aktivizējot Wnt/β-katenīna ceļu. „Die Pharmazie — Starptautiskais farmācijas zinātņu žurnāls”, 2019. 74(1): 23.–28. lpp.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens sēklu ūdens ekstrakts uzlaboja neiroprotektīvo un acetilholīnesterāzes inhibējošo iedarbību salīdzinājumā ar sintētisko L-dopu. Molecules, 2022. 27(10): 3131. lpp.