BEWO šūnu līnija
BeWo ir cilvēka horionkarcinomas atvasināta šūnu līnija, ko plaši izmanto biomedicīniskajos pētījumos. Tā kalpo kā vērtīgs in vitro modelis, lai pētītu sarežģīto placentas attīstības procesu un cilvēka trofoblastu sincitizāciju. Pētnieki izmanto šīs šūnas arī trofoblastu šūnu uzvedības, hormonu ražošanas un vielu transporta pāri placentai izpētei. Turklāt BeWo šūnas ir piemērotas arī toksikoloģijas, infekciju un slimību pārnešanas pētījumiem.
Šis raksts ietver pamatinformāciju par BeWo šūnām, kas var palīdzēt jums strādāt ar tām savos pētījumos. Tajā tiks aplūkots:
- BeWo šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- BeWo šūnu līnija: informācija par kultivēšanu
- BeWo šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
- BeWo šūnu izmantošana pētniecībā
- Pētniecības publikācijas par BeWo šūnām
- Resursi par BeWo šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
BeWo šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Iepriekšējas zināšanas par šūnu līnijas izcelsmi un vispārīgajām īpašībām ir ļoti svarīgas, lai to varētu izmantot pētniecībā. Šajā raksta daļā tiek izskatīta BeWo šūnu līnijas izcelsme, raksturīgās iezīmes un daudz kas cits. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir BeWo horionkarcinomas šūnu līnija? Kas ir BeWo sincitializācija? No kurienes nāk BeWo šūnas? Kāda ir BeWo šūnu morfoloģija? Kāda ir BeWo ploidija?
- Placentas šūnu līnija BeWo cēlusies no ļaundabīgas gestācijas horionkarcinomas vīrieša augļa placentā 1968. gadā [1]. Tādējādi tā kalpo kā nenovērtējams modelis placentas pētījumiem.
- BeWo šūnas izrāda epitēlija tipa morfoloģiju.
- BeWo šūnas ir salīdzinoši mazas, to izmērs ir no 20 līdz 30 µM [2].
- BeWo šūnām ir stabils kariotips. To cilmes līnijas skaits ir hipotetraploīds. BeWo šūnu modālais hromosomu skaits ir 86. Tas var svārstīties no 71 līdz 178.
- BeWo šūnas ražo vairākus hormonus, t.i., cilvēka horionisko somatomamotropīnu, cilvēka horionisko gonadotropīnu (hCG) un steroīdu hormonus.
- BeWo šūnas ekspresē molekulāros marķierus, tostarp CK 7, E-kadherīnu un VE-kadherīnu.
B30 apakšlīnija
B30 ir BeWo šūnu sublīnija. To izmanto, lai pētītu uzturvielu uzsūkšanos un transportu. Tas saistīts ar to spēcīgo augšanu uz porainām membrānām.
BeWo un JEG-3
BeWo JEG-3 šūnu līnijas ir iegūtas no horionkarcinomām un tiek izmantotas placentas pētījumos. BeWo šūnas ražo mazākus hormonu daudzumus nekā JEG-3, piemēram, cilvēka horiongonadotropīnu (hCG) un estradiolu.
BeWo šūnu līnija: informācija par kultivēšanu
Šūnu kultūras uzturēšana var būt sarežģīta, ja nezināt galvenos sīkumus. Piemēram: kāds ir BeWo šūnu dubultošanās laiks? Kas ir BeWo šūnu barotne? Kā kultivēt BeWo šūnu līniju? Un kā sasaldēt BeWo šūnas?
Galvenie punkti BeWo šūnu kultivēšanai
Dubultošanās laiks:
BeWo šūnu populācijas dubultošanās laiks ir aptuveni 30 stundas.
Adherenta vai suspensijā:
BeWo ir adhezīva šūnu līnija.
Šūnu sēšanas blīvums:
BeWo šūnām ieteicamais sēšanas blīvums ir 1 x 10⁴ šūnas/cm². Pirms sēšanas no šūnām tiek noņemts vecais barotnes šķīdums, un šūnas tiek skalotas ar 1x PBS. Pēc tam pievieno Accutase (pārsēšanas šķīdumu) un šūnas inkubē 8–10 minūtes istabas temperatūrā. Tad atdalītās šūnas pievieno kultūras barotnei un centrifugē. Savāktās šūnas pēc tam atkārtoti suspendē un ielej jaunā kolbā.
Augšanas barotne:
BeWo šūnu audzēšanai izmanto Ham’s F12K barotni, kas satur 10 % FBS, 2,0 mM L-glutamīnu, 2,0 mM nātrija piruvātu un 2,5 g/l NaHCO3. BeWo šūnu barotne jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
Audzēšanas apstākļi:
BeWo šūnas tiek uzturētas mitrinātā inkubatorā, kas iestatīts uz 37 grādiem pēc Celsija skalas un kurā tiek pievadīts 5 % CO₂.
Uzglabāšana:
Sasaldētās BeWo šūnas uzglabā temperatūrā zem -150 °C elektriskā ultra-zemas temperatūras saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē.
Sasaldēšanas process un barotne:
BeWo šūnas ieteicams sasaldēt CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas vidē. Šūnas tiek sasaldētas, izmantojot lēnas sasaldēšanas metodi. Šī metode ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 grādu minūtē, tādējādi novēršot šoku šūnām un aizsargājot to dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās šūnas atkausē, iegremdējot tās iepriekš sagatavotā 37 °C ūdens vannā uz 40–60 sekundēm, līdz paliek neliels ledus gabaliņš. Pēc tam pievieno svaigu augšanas vidi un šūnas centrifugē, lai atdalītu sasaldēšanas vides sastāvdaļas. Savākto šūnu nogulsni atkārtoti suspendē un pārnes kultūras kolbā turpmākai audzēšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
BeWo šūnu kultūru apstrādei un uzturēšanai ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
Publicēts: 2023. gads | Pēdējā pārskatīšana: 2026. gada maijs
BeWo šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
BeWo šūnām piemīt unikālas īpašības, kā arī specifiskas priekšrocības un trūkumi. Šajā sadaļā mēs izskatīsim dažas no tām, kas ir vērā ņemamas.
Priekšrocības
BeWo horionkarcinomas šūnu līnijas galvenās priekšrocības ir šādas:
-
In vitro placentas šūnu modelis
BeWo šūnas nodrošina in vitro modeli trofoblastu šūnu uzvedības un placentas sincitializācijas pētīšanai, atkārtojot procesus, kurus in vivo ir grūti novērot.
-
Hormonu ražošana
BeWo šūnas izdalī hormonu, piemēram, hCG un placentas laktogēnu, padarot tās vērtīgas hormonālās regulācijas pētījumiem un reproduktīvās bioloģijas izpētei.
Trūkumi
BeWo trofoblastu šūnu trūkumi ir šādi:
-
Vēža šūnu līnija
BeWo šūnas ir iegūtas no horionkarcinomas, kas ir placentas audzējs. Šī izcelsme var pilnībā neatspoguļot normālu placentas šūnu funkciju.
BeWo šūnu izmantošana pētniecībā
BeWo šūnu līnija tiek plaši izmantota placentas pētījumos. Šeit ir minēti daži konkrēti šīs šūnu līnijas pielietojumi:
- Pētījumi par placentu un grūtniecību: BeWo šūnas ir ļoti svarīgas pētījumos par placentu un grūtniecību. Pētnieki izmanto šīs šūnas, lai pētītu vielu, tostarp zāļu, uzturvielu un toksīnu, transportu caur placentas barjeru. Turklāt viņi pēta arī hormonu, tostarp cilvēka horiongonadotropīna (hCG), placentas laktogēna un steroīdu hormonu, ražošanu un regulēšanu. Tas ir svarīgi, lai izprastu hormonālās izmaiņas grūtniecības laikā. 2018. gadā veiktajā pētījumā tika izpētīta bromēto antipirēnu (BFR) ietekme uz sulfotransferāzes aktivitāti cilvēka trofoblastu šūnu līnijā (BeWo). Šis enzīms ir iesaistīts vairogdziedzera hormona intracelulārā līmeņa regulēšanā [3].
- Infekciju un slimību pētījumi: BeWo šūnas tiek izmantotas arī, lai pētītu mijiedarbību starp patogēniem un placentas šūnām. Šie pētījumi ir vērtīgi, lai izprastu slimības, kas var tikt pārnestas no mātes uz augli, un izstrādātu stratēģijas augļa veselības aizsardzībai. Turklāt šī šūnu līnija palīdz pētniekiem izpētīt grūtniecības laikā radušās komplikācijas, piemēram, preeklampsiju. Piemēram, pētījumā, ko 2023. gadā veica Michalina Bralewska, izmantojot BeWo trofoblastu šūnu modeli, tika konstatēts, ka gan hromogranīnam A (CgA), gan no tā atvasinātais peptīds katestatīns (CST) varētu būt iesaistīti preeklampsijas (PE) patogēnēzes sarežģītajā procesā [4]. Turpinot pētījumus, citā pētījumā tika izpētīts trichosantīna pretvēža potenciāls, izmantojot BeWo horionkarcinomas šūnu līniju. Pētījumā tika veltītas papildu pūles, lai atklātu biomarķierus, veicot salīdzinošo proteomisko analīzi pirms un pēc eksperimenta [5].
5. Zinātniskās publikācijas par BeWo šūnām
Šeit ir daži nozīmīgi pētījumu publikācijas, kurās aprakstītas BeWo trofoblastu šūnas.
AMPK signāls regulē mitofāgiju un mitohondriālo ATP ražošanu cilvēka trofoblastu šūnu līnijā BeWo
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Frontiers in Bioscience-Landmark (2022), tika izvirzīts pieņēmums, ka AMPK signāls aktivizē mitofāgiju BeWo trofoblastu šūnās, izmantojot FUNDC1 un PRKN veicinātos mitofāgijas ceļus. Rezultātā mitofāgija palīdz uzturēt ATP ražošanu un mitohondriālo membrānu potenciālu.
Etilparabēns izraisa apoptozes šūnu nāvi cilvēka placentas BeWo šūnās caur Caspase-3 ceļu
Šis raksts tika publicēts žurnālā „Animal Cells and Systems” (2020). Pētījumā tika izvirzīta hipotēze, ka etilparabēns mediē BeWo šūnu apoptozi, regulējot kaspāzes 3 ceļu.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Drug Metabolism and Disposition” (2023), tika izmantotas placentas šūnu līnijas, tostarp BeWo, JAR, JEG-3 un HTR-8/SVneo, lai pētītu ksenobiotiku un steroīdu nogulsnēšanos šūnās.
Šajā pētniecības rakstā, kas publicēts žurnālā „International Journal of Molecular Medicine” (2020), tika izvirzīta hipotēze, ka apelīns, APJ receptora ligands, veicina BeWo šūnu proliferāciju caur APJ un ERK1/2, stat3 un AMPK signālceļiem. Tādējādi tas varētu būt būtisks adipokīns, kas regulē placentas attīstību.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Epilepsia” (2021), tika pētīta augļa uzturvielu un pretkrampju zāļu ietekme uz holīna transportētājiem cilvēka izcelsmes trofoblastu šūnu līnijā BeWo.
Resursi par BeWo šūnu līniju: protokoli, video un cits
Šeit ir daži tiešsaistes resursi par BeWo šūnām:
- In vitro transfekcija: Šis video palīdzēs jums apgūt in vitro plazmīdu DNS transfekcijas protokolu adhezīvajām šūnām.
Šajā saitē ir informācija par BeWo šūnu kultūru:
- BeWo šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir būtiska informācija par BeWo šūnu līnijas kultivēšanu. Tajā ir informācija par šūnu barotnēm un kultivēšanas apstākļiem. Tajā ir arī protokoli par subkultivēšanu un krioprezervētu un proliferatīvu kultūru apstrādi.
Atsauces
- Weber, M., et al., Sešu cilvēka trofoblastu šūnu līniju citogenomika. Placenta, 2021. 103: 72.–75. lpp.
- Kolokol'tsova, T., et al., Trofoblastu īpašības ilgtermiņa kultūrā. Eksperimentālās bioloģijas un medicīnas biļetens, 2017. 164: 259.–265. lpp.
- Leonetti, C.P., C.M. Butt un H.M. Stapleton, „Bromēto antipirēnu ķīmisko vielu izraisīta vairogdziedzera hormonu sulfotransferāzes aktivitātes traucējumi cilvēka horionkarcinomas placentas šūnu līnijā BeWo”. Chemosphere, 2018. 197: 81.–88. lpp.
- Bralewska, M., T. Pietrucha un A. Sakowicz, CgA atvasinātā CST proteīna līmeņa samazināšanās HTR-8/SVneo un BeWo trofoblastu šūnu līnijās, ko izraisa preeklampsijas vide. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(8): 7124. lpp.
- Hu, Y. u.c., Salīdzinošā proteomikas analīze par zāļu trikosantīna pievienošanu BeWo šūnu līnijai. Molecules, 2022. 27(5): 1603. lpp.