Neuro-2a ląstelių linija
Neuro-2a - tai pelės sukurta neuroninių ląstelių linija, plačiai naudojama neurobiologiniuose tyrimuose. Šios ląstelės dažniausiai naudojamos nervų vystymuisi, diferenciacijai, neurotoksiškumui, ląstelių signaliniams keliams ir aksonų augimui tirti. Be to, jos naudojamos vaistų kūrimo ir atrankinės patikros tikslais.
Šiame straipsnyje aptariami svarbūs neuroblastomos ląstelių Neuro-2a aspektai, kurie gali būti naudingi prieš pradedant su jomis dirbti. Jame daugiausia aptariama:
- Neuro-2a ląstelių bendrieji požymiai ir kilmė
- Neuro-2a ląstelių linijos kultivavimo informacija
- Neuro-2a ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
- Neuro-2a ląstelių linijos mokslinių tyrimų pritaikymas
- Mokslinių tyrimų publikacijos, kuriose naudojamos Neuro-2a ląstelės
- Neuro-2a ląstelių šaltiniai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt
1. Neuro-2a ląstelių bendrieji požymiai ir kilmė
Šioje straipsnio dalyje bus aptarta Neuro-2a ląstelių linijos kilmė ir pagrindinės savybės, kurias būtina žinoti prieš pradedant su ja dirbti. Čia sužinosite: Kas yra Neuro-2a ląstelių linija? Kokia Neuro-2a ląstelių linijos kilmė? Kas yra Neuro-2a ląstelių diferenciacija? Koks yra Neuro-2a ląstelės dydis? Kokia Neuro-2a ląstelių morfologija?
- Neuro-2a ląstelės yra kilusios iš spontaniškai atsiradusio albinosinės pelės (A padermės) naviko (neuroblastomos). Ląstelių liniją sukūrė R. J. Klebe ir F. H. Ruddle.
- Neuro-2a neuroblastomos ląstelės pasižymi neuronų ir ameboidinių kamieninių ląstelių morfologija.
- Neuro-2a ląstelių dydis yra 12 mikrometrų [1].
- Neuro-2a ląstelių chromosomų skaičius gali svyruoti nuo 59 iki 193, o vidutinis skaičius yra 95. Šių neuroblastomos ląstelių kariotipas yra nestabilus nuo 94 iki 98 chromosomų.
2. Neuro-2a ląstelių linijos kultivavimo informacija
Neuro-2a ląstelės plačiai naudojamos neurobiologijos tyrimų laboratorijose. Prieš pradėdami dirbti su šiomis ląstelėmis, turėtumėte sužinoti toliau nurodytą būtiną ląstelių auginimo informaciją. Tai gali padėti jums lengviau su jomis dirbti. Sužinosite: Kas yra Neuro-2a ląstelių kultūrų terpė? Kaip auginti Neuro-2a ląsteles? Koks yra Neuro-2a ląstelių padvigubėjimo laikas? Koks yra Neuro-2a ląstelių pasėlio tankis? Koks yra Neuro-2a ląstelių auginimo protokolas? Kokia yra Neuro-2a ląstelių terpė?
Pagrindiniai Neuro-2a ląstelių kultivavimo aspektai
|
Padvigubėjimo laikas: |
Neuro-2a ląstelių padvigubėjimo laikas yra maždaug 70 valandų. |
|
Prigludusios arba suspenduotos: |
Neuro-2a yra adherentinė ląstelių linija. |
|
Sėjimo tankis: |
Optimalus Neuro-2a ląstelių linijos ląstelių sėjimo tankis yra 1 x104 ląstelės/cm2. Sėjant ląstelės plaunamos fosfatiniu buferiniu fiziologiniu tirpalu be magnio ir kalcio (1x). Vėliau įpilama pasėlio tirpalo (Accutase) ir ląstelės inkubuojamos 8-10 min. aplinkos temperatūroje. Po ląstelių disociacijos įpilama šviežios terpės ir ląstelės centrifuguojamos. Surinktos ląstelių granulės atsargiai resuspenduojamos ir ląstelės supilamos į auginimo indą. |
|
Auginimo terpė: |
Neuro-2a ląstelėms auginti naudojama EMEM. Jos sudėtyje yra 10 % FBS, 2 mM L-glutamino, 1,5 g/l NaHCO3, EBSS, 1 mM natrio piruvato ir NEAA, kad ląstelės augtų idealiai. Medžiaga turėtų būti keičiama 1-2 kartus per savaitę. |
|
Augimo sąlygos: |
Neuro-2a kultūros palaikomos 37 °C temperatūros drėkinamame inkubatoriuje, prijungtame prie 5 % CO2 šaltinio. |
|
Laikymas: |
Ląstelės turėtų būti laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje itin žemos temperatūros elektriniame šaldiklyje arba skysto azoto garų fazėje. |
|
Šaldymo procesas ir terpė: |
Neuro-2a ląstelėms užšaldyti naudojama CM-1 arba CM-ACF terpė. Ląstelės užšaldomos taikant lėtą šaldymo procesą, kai per minutę temperatūra sumažėja tik 1 °C. Taip ląstelės apsaugomos nuo šoko ir išsaugomas jų gyvybingumas. |
|
Atšildymo procesas: |
Norint atšildyti užšaldytas kultūras, buteliukas dedamas į 37 °C temperatūros vandens vonelę 40-60 sekundžių, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Tada įpilama terpės ir ląstelės centrifuguojamos. Šis veiksmas padeda pašalinti užšaldymo terpės komponentus. Tuomet ląstelių granulės resuspenduojamos ir ląstelės perkeliamos į naują kolbą, pripildytą auginimo terpės. Po to ląstelės dedamos į 37 °C temperatūros inkubatorių mažiausiai 24 valandoms. |
|
Biologinės saugos lygis: |
Neuro-2a kultūroms tvarkyti ir prižiūrėti privaloma 1 biologinės saugos lygio laboratorinė aplinka. |
3. Neuro-2a ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
Neuro-2a ląstelės turi tam tikrų privalumų ir trūkumų, kurie jas skiria nuo kitų neuronų ląstelių linijų. Čia išvardyti kai kurie svarbūs šių ląstelių privalumai ir trūkumai.
Privalumai
Neuro-2a pelės neuroblastomos ląstelių linijos privalumai yra šie:
-
Lengva palaikyti
Neuro-2a ląstelių linija nesusijusi su sudėtingomis ar komplikuotomis ląstelių auginimo procedūromis. Jas lengva auginti ir prižiūrėti mokslinių tyrimų laboratorijose.
-
In vitro neuroninių ląstelių modelis
Neuro-2a yra patogus neuroninių ląstelių modelis, kurį mokslininkai plačiai naudoja neuronų vystymosi ir diferenciacijos tyrimams.
Trūkumai
Neuro-2a ląstelių trūkumai:
-
Kiaulių kilmė
Neuro-2a yra pelių kilmės, todėl mokslininkai turėtų būti atsargūs ekstrapoliuodami pelių tyrimų rezultatus žmogaus sveikatai ir ligoms, nes pelių ir žmonių biologija gali labai skirtis.
4. Neuro-2a ląstelių linijos pritaikymas moksliniams tyrimams
Neuro-2a ląstelės gali būti plačiai naudojamos neuromokslų tyrimų srityje. Čia aptariami keli perspektyvūs šios ląstelių linijos panaudojimo būdai:
- Neuronų vystymasis: Neuro-2a yra in vitro neuronų ląstelių modelis, plačiai naudojamas neuronų vystymuisi ir susijusiems procesams, tokiems kaip diferenciacija, aksonų augimas ir sinapsių formavimasis, tirti. 2020 m. atliktame tyrime Neuro-2a ląstelės panaudotos tiriant mikroRNA-124 vaidmenį retinoinės rūgšties sukeltoje neuronų ląstelių diferenciacijoje [2]. Kitame tyrime buvo tiriama Neuro 2a retinoinės rūgšties receptoriaus gama (RARG) ir miRNA-124 raiška neuroblastomos ląstelių linijoje (N2A). Šiame tyrime pasiūlyta, kad RARG yra miR-124 taikinys ir slopina neuritų augimą [3].
- Neurotoksiškumas: Neuro-2a taip pat naudojamas vaistų, cheminių medžiagų ar aplinkos veiksnių toksiniam poveikiui nervinėms ląstelėms įvertinti. Pavyzdžiui, Zhihong Yin ir kolegų atliktame tyrime, naudojant Neuro-2a ląsteles, buvo tiriamas aplinkos cheminės medžiagos bisfenolio A (BPA) neurotoksiškumas. Jie pastebėjo, kad BPA slopina neuroninių ląstelių diferenciaciją ir proliferaciją, pažeisdamas jų ląstelių ir sinapsių vientisumą [4].
- Vaistų atranka: Neuro-2a ląstelės taip pat naudojamos kelių vaistų, junginių ir natūralių produktų gydomajam poveikiui įvertinti. Pavyzdžiui, viename tyrime, naudojant Neuro-2a ląsteles, buvo tiriamas Gingko biloba augalo ekstrakto antioksidacinis potencialas. Be to, tyrimo metu pasiūlyta, kad jis sukelia Aβ agregacijos mažėjimą ir gali būti potencialus Alzheimerio ligos gydymo būdas [5].
5. Mokslinių tyrimų publikacijos su Neuro-2a ląstelėmis
Pateikiame keletą įdomių mokslinių straipsnių, kuriuose naudojama Neuro-2a ląstelių linija.
Šiame 2018 m. žurnale "Journal of Natural Medicines" publikuotame tyrime buvo tiriamas iš baltųjų pipirų (P. nigrum) išskirtų alkamidų terapinis poveikis Neuro-2a neuronų ląstelėms.
Nkx2. 1 redukcija susijusi su smegenų anomalijomis, kurias sukelia retinoinės rūgšties perteklius
Šiame 2020 m. žurnale "Acta Biochimica et Biophysica Sinica" paskelbtame tyrime pasiūlyta, kad Nkx2.1 genas atlieka svarbų vaidmenį pelių smegenų vystymuisi, reguliuodamas Shh signalinę kaskadą.
Šiame straipsnyje, paskelbtame žurnale "Toxicology and Industrial Health" (2023), siūloma, kad aplinkos cheminė medžiaga bisfenolis A sukelia neurotoksiškumą neuro-2a ląstelėse ir sutrikdo jų sinapsinę bei citoskeleto disfunkciją.
Šiame žurnale "Pharmaceuticals" (2021) paskelbtame straipsnyje siūloma, kad vaistas heksarelinas moduliuoja PI3K/AKT ir MAPK kaskadą neuroblastomos ląstelėse (Neuro-2a) ir slopina vandenilio peroksido sukeltą neuro-2a ląstelių apoptozę.
Šiame moksliniame straipsnyje, išspausdintame žurnale "Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine" (2021), siūloma, kad Emblica officinalis vaisių ekstraktas slopina neurouždegimą Neuro-2a ląstelėse, todėl gali būti naudingas sergant neurouždegiminėmis ligomis.
6. Šaltiniai, skirti Neuro-2a ląstelėms: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt
Toliau pateikiami internetiniai ištekliai apie Neuro-2a ląsteles. Juose pateikiami Neuro-2a ląstelių auginimo ir transfekcijos protokolai.
- Neuro-2a transfekcijos protokolas: Neuro-2a yra tinkamas transfekcijos šeimininkas. Ši nuoroda padės jums susipažinti su ląstelių linijos transfekcijos protokolu. Neuro 2a transfekcijos efektyvumas skiriasi priklausomai nuo reagento.
Šioje nuorodoje pateikiamas Neuro-2a ląstelių auginimo protokolas.
- Neuro-2a ląstelių auginimo protokolas: Ši nuoroda padės jums sužinoti neuro 2a ląstelių subkultūrinimo protokolą.
- Neuro-2a ląstelės: Šioje svetainėje pateikiama išsamių žinių apie Neuro-2a ląstelių terpę, sėjimo tankį ir subkultūrinimo bei kriokonservuotų ir proliferacinių kultūrų tvarkymo protokolus.
Nuorodos
- Lulevich, V., et al., Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., MiR-124 vaidmuo reguliuojant retinoinės rūgšties sukeltą Neuro-2A ląstelių diferenciaciją. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., Retinoic acid receptor gamma is targeted by microRNA-124 and inhibits neurite outgrowth. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisfenolio-A poveikis sukėlė neurotoksiškumą ir yra susijęs su sinapsėmis ir citoskeletu Neuro-2a ląstelėse. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Gingko biloba ekstraktas (EGb) slopina oksidacinį stresą neuro 2A ląstelėse, per daug išreiškiančiose APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.