Ramoso ląstelės - B ląstelių limfomos tyrimai: Ramoso ląstelių svarba
Ramoso ląstelės - tai B limfocitų ląstelių linija, plačiai naudojama biomedicininiuose tyrimuose. Ypač plačiai jos naudojamos imunologijoje ir vėžio tyrimuose. Mokslininkai šias ląsteles naudoja citotoksiniams vaistams vertinti ir B ląstelių paviršiaus antigenams, mutacijoms bei apoptozės mechanizmams tirti.
Ramoso ląstelių kilmė ir bendrieji požymiai s
Ląstelių linijos kilmės ir pagrindinių savybių supratimas yra labai svarbus sprendžiant dėl jos tinkamumo jūsų tyrimams. Todėl patartina kruopščiai įvertinti šią informaciją prieš pradedant bet kokį darbą su ja. Šiame skyriuje aptariami šie dažniausiai užduodami klausimai: Kas yra Ramos vėžio ląstelių linija? Kas yra "Ramos" ląstelių linija CD19? Kas yra "Ramos" ląstelių linija CD20? Kokia yra Ramoso ląstelių kilmė? Kokie yra "Ramos" ląstelių linijos žymenys? Koks yra Ramoso ląstelių dydis? Kokia yra Ramoso ląstelių linijos morfologija?
- Ramoso ląstelių linija buvo sukurta 1972 m. Šios ląstelės buvo gautos iš 3 metų kaukazietiškos kilmės berniuko, sergančio amerikietiško tipo Burkito limfoma, ascitinio skysčio [1].
- Jos išreiškia pagrindinius B ląstelių žymenis, įskaitant imunoglobuliną M (IgM), CD19, CD20 ir CD22.
- Ramoso ląstelės yra Epšteino Baro virusui neigiamos ląstelės. Tačiau jos gali būti visam laikui pakeistos į Epšteino Baro viruso teigiamas ląsteles.
- Šios B limfoblasto ląstelės pasižymi apvalios formos morfologija.
Ramoso mėlynosios ląstelės ir Ramoso B ląstelės
Ramoso mėlynosios ląstelės ir Ramoso B ląstelės yra žmogaus Burkito limfomos ląstelės. Abi yra neigiamos Epšteino Baro virusui. Šios ląstelės skiriasi tuo, kad Ramoso mėlynosios ląstelės išreiškia NF-κB/AP-1 indukuojamą reporterio geną, vadinamą SEAP (išskiriamas embrioninis šarminis fosfatas), o baltosios Ramoso ląstelės - ne.
Ramoso ląstelių kultivavimas
Ši straipsnio dalis skirta padėti sužinoti būtiną informaciją apie Ramoso ląstelių auginimą. Čia sužinosite: Koks yra ląstelių linijų padvigubėjimo laikas? Kokia yra rekomenduojama terpė? Kaip auginti Ramoso ląsteles?
Pagrindiniai Ramoso ląstelių kultivavimo aspektai
|
Padvigubėjimo laikas: |
Ramoso ląstelių padvigubėjimo laikas yra maždaug 20,4 ± 1,5 valandos. Tačiau jis gali skirtis priklausomai nuo pateiktų ląstelių auginimo sąlygų. |
|
Prigludusios arba suspenduotos: |
Ramoso ląstelės auga suspensijoje. |
|
Ląstelių tankis: |
Ramos ląstelių linijos optimalus ląstelių tankis yra 3 x105 ląstelės/ml. Subkultūrinimui suspenduotos ląstelės surenkamos centrifuguojant. Ląstelės užpilamos šviežia terpe ir atsargiai resuspenduojamos. Po to ląstelės supilamos į naują kolbą 3-9 x105 ląstelių/ml tankio. |
|
Augimo terpė: |
Ramoso ląstelėms auginti naudojama RPMI 1640, papildyta 10 % galvijų fetaliniu serumu, 2,1 mM stabiliuoju glutaminu ir 2,0 g/l NaHCO3. |
|
Augimo sąlygos: |
Žmogaus Burkito limfomos ląstelių linija (Ramos) laikoma drėkinamame inkubatoriuje, esant 5 % CO2 ir 37 °C temperatūrai. |
|
Laikymas: |
Ramos ląstelės laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje arba skysto azoto garų fazėje, kad ląstelės ilgiau išliktų gyvybingos. |
|
Šaldymo procesas ir terpė: |
CM-1 arba CM-ACF šaldymo terpė rekomenduojama Ramoso ląstelėms. Naudojamas lėtas šaldymo procesas, leidžiantis palaipsniui sumažinti temperatūrą 1 laipsniu Celsijaus per minutę. Toks lėtas užšaldymas apsaugo ląsteles nuo šoko ir padidina jų gyvybingumą. |
|
Atšildymo procesas: |
Atšildant užšaldytos ląstelės40-60 sekundžių laikomos iš anksto pašildytoje 37 °C temperatūros vandens vonelėje, kol lieka nedidelis ledo gabalėlis. Po to įpilama šviežios terpės ir ląstelės centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės elementai. Granulės vėl resuspenduojamos ir ląstelės išpilstomos į naują kolbą su auginimo terpe. |
|
Biologinės saugos lygis: |
Epšteino-Barro virusui neigiamų Ramoso ląstelių kultūrų palaikymui būtina 1 biologinės saugos lygio laboratorija. Tačiau biologinės saugos lygis perkeliamas į 2 lygį, kai Ramoso ląstelės visam laikui virsta teigiamomis Epšteino-Barro viruso atžvilgiu. |
Ramosas: Privalumai ir apribojimai
Kaip ir kitos ląstelių linijos, "Ramos" ląstelės taip pat turi savitų privalumų ir apribojimų. Šiame skirsnyje bus išnagrinėti kai kurie svarbiausi iš jų, kurie gali turėti didelės įtakos jų naudojimui moksliniuose tyrimuose.
Privalumai
- Burkito limfomos ląstelių modelis: Ramoso ląstelės buvo sukurtos iš Burkito limfoma sergančio paciento, todėl jos yra tinkamas ląstelių modelis limfoidiniams piktybiniams navikams tirti
- Lengvas kultivavimas: Ramoso ląsteles lengva auginti ir išlaikyti laboratorijoje. Joms taikomi nesudėtingi ląstelių auginimo reikalavimai ir sąlygos
Apribojimai
- In vitro modelis: Ramoso ląstelės gali nevisiškai atspindėti pacientų navikų genetinį sudėtingumą, todėl jų pritaikomumas yra ribotas. Be to, eksperimentų, atliktų naudojant Ramoso ląstelių liniją, rezultatai gali nevisiškai atspindėti in vivo sąlygas, todėl gali kilti praktinių problemų
ramoso ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
Ramoso ląstelės turi perspektyvių pritaikymo galimybių biomedicinos srityje. Kai kurie iš būtiniausių Ramoso ląstelių panaudojimo moksliniuose tyrimuose būdų yra šie:
- Limfomos biologija: Ramoso ląstelės plačiai naudojamos limfomos biologijai tirti. Jos naudojamos tiriant genetinius ir molekulinius veiksnius, lemiančius limfoidinių piktybinių navikų atsiradimą. Be to, naudodami šias Burkito limfomos ląsteles mokslininkai įžvelgia ligos pradžią, progresavimą ir heterogeniškumą. Taip pat tiriamos genetinės mutacijos ir signaliniai keliai, o tai gali padėti sukurti tikslesnius diagnostikos ir gydymo metodus. 2019 m. atlikto tyrimo metu nustatyta, kad GCN5 (General control non-depressible 5) histono acetiltransferazės slopinimas mažina žmogaus Burkito limfomos ląstelių (Ramos) tumorigeniškumą sutrikdant BCR signalizaciją. Todėl GCN5 siūloma laikyti tinkamu taikiniu kuriant limfomos vaistų terapiją [2].
- Vaistų atranka ir tyrimai: Ramoso ląstelių linija plačiai naudojama vaistų atrankos ir testavimo tikslais. Mokslininkai vertina potencialių terapinių junginių veiksmingumą slopinant ląstelių dauginimąsi ir augimą bei sukeliant limfomos ląstelių mirtį. Tai padeda nustatyti perspektyvius kandidatus į vaistus ir taip palengvina tikslinio gydymo limfoma sergantiems pacientams kūrimą. Tokie tyrimai parodė, kad Annona vaisių odelės, minkštimo ir sėklų metanolinis ekstraktas vidutiniškai, o chloroformo ekstraktas stipriai veikė Ramoso ląstelių proliferaciją. Taigi tyrime pasiūlyta, kad Annona vaisiai gali būti veiksmingi limfomos prevencijai ir gydymui [3].
"Ramos" ląstelės jūsų tyrimams
Publikacijos su Ramoso ląstelėmis
Šioje straipsnio dalyje pateikiamos kelios įdomios mokslinių tyrimų publikacijos apie Ramoso ląstelių liniją:
Šis tyrimas buvo paskelbtas 2018 m. EMBO žurnale. Tyrime nustatyta, kad Ramoso B ląstelėms tinkamumui ir konkurencingam augimui būtina Ramoso ląstelių CD19 ir CD79b (BCR signalizacijos komponentas Igβ) žymenų raiška.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale "Neoplasia" (2021), panaudotos Ramoso ląstelės ir pasiūlyta, kad mišrios linijos kinazės domenas (MLKL) yra epigenetiniu būdu reguliuojamas Burkito limfomos ląstelėse (angl.) Taigi, tai yra perspektyvus prognostinis žymuo, lemiantis su nekroptoze susijusių gydymo metodų sėkmę.
PBK/TOPK Tyr74 fosforilinimas JAK2 skatina Burkito limfomos naviko augimą
Šiame moksliniame straipsnyje, išspausdintame žurnale "Cancer Letters" (2022 m.), teigiama, kad JAK2/TOPK/histono H3 signalinė ašis atlieka lemiamą vaidmenį B limfomos ląstelių linijų proliferacijai in vitro.
Šis straipsnis buvo paskelbtas 2020 m. žurnale "Toxins". Tyrime siūloma, kad gydymas verotoksinu-1 sukelia endoplazminio tinklo (ER) stresą Ramos B ląstelėse. Dėl to limfomos ląstelių linijose prasideda apoptozės arba išgyvenimo signalizacija.
Šiame "Avicenna Journal of Phytomedicine" (2020) paskelbtame tyrime pranešama, kad natūralus junginys, silimarinas, slopina TLR8 (į Toll panašus receptorius 8) raišką ir apoptozę Ramos ląstelių linijoje.
Ramoso ląstelių linijos šaltiniai: Ramos sistemos šaltiniai: protokolai, vaizdo įrašai ir kt
Toliau pateikiami keli internetiniai ištekliai apie Ramoso ląsteles:
- Ramoso ląstelių transfekcija: Šis dokumentas padės jums sužinoti Ramoso ląstelių linijos transfekcijos protokolą.
Šioje nuorodoje pateikiamas "Ramos" ląstelių auginimo protokolas:
- Ramoso ląstelės: Šioje svetainėje pateikiama pagrindinė informacija apie Ramoso ląstelių liniją. Joje taip pat pateikiamas Ramoso ląstelių subkultūrinimo ir proliferuojančių bei kriokonservuotų kultūrų tvarkymo protokolas. Be to, pateikiama informacija apie Ramoso ląstelių terpę, padvigubėjimo laiką ir ląstelių tankį.
Pagrindinės įžvalgos apie Ramoso ląsteles: Dažniausiai užduodami klausimai
Nuorodos
- Kerntke, C.G., Membraninio IgE organizavimo ir signalinio pajėgumo analizė sąveikaujant su CD19 ir CD23 B limfocituose. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., GCN5 HAT slopinimas sumažina žmogaus Burkito limfomos ląstelių išgyvenamumą dėl MYC taikinių genų raiškos mažinimo ir BCR signalinių kelių trukdymo. Oncotarget, 2019 m. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Phytochemical profile and antioxidation activity of annona fruit and its effect on lymphoma cell proliferation (Fitocheminis anonos vaisių profilis ir antioksidacinis aktyvumas bei jų poveikis limfomos ląstelių proliferacijai ). Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.