P19 ląstelės - Embrioninės karcinomos tyrimai naudojant P19 ląsteles
P19 yra pelės embrioninės karcinomos ląstelių linija. Ji plačiai naudojama biomedicininiuose tyrimuose, daugiausia vystymosi biologijai, kamieninių ląstelių biologijai, ląstelių diferenciacijai ir vaistų atrankai tirti. Kadangi P19 ląstelės geba diferencijuotis, jos gali būti naudingos tiriant sudėtingus biologinius procesus, tokius kaip audinių formavimasis ir ankstyvasis embriono vystymasis. Šiame straipsnyje aptarsime pelės P19 ląstelių pagrindus.
Bendrosios P19 ląstelių savybės ir kilmė
Prieš pradedant dirbti su ląstelių linija, būtina žinoti apie jos bendrąsias savybes ir kilmę. Šiame skyriuje bus aptarti šie dalykai: Kas yra P19 ląstelių linija? Kokio dydžio yra P19 ląstelės? Kokia yra P19 ląstelių kilmė?
- P19 yra pluripotentinės embrioninės karcinomos ląstelių tipas, iš pradžių gautas iš teratokarcinomos, išsivysčiusios C3H/He pelėms. Pirmą kartą ląstelių liniją 1982 m. sukūrė McBurney ir Rogersas.
- P19 ląstelės gali nuolat augti serumu papildytoje terpėje. Veikiant netoksiškais vaistais, tokiais kaip retinoinė rūgštis ir dimetilsulfoksidas (DMSO), jos gali diferencijuotis į kitų tipų ląsteles [1].
- Šios pelių karcinomos ląstelės pasižymi į epitelį panašia morfologija.
- P19 ląstelių linija turi euploidinį vyrišką kariotipą (n=40; XY).
Informacija apie P19 ląstelių kultivavimą
P19 ląstelių linija dėl savo unikalių savybių plačiai kultivuojama mokslinių tyrimų laboratorijose. Ją auginti lengva ir lengva. Šiame skyriuje paminėta visa svarbiausia informacija, kurios reikia norint palaikyti ir auginti P19 ląstelių kultūrą. Sužinosime: Koks yra P19 ląstelių padvigubėjimo laikas? Kaip auginti P19 ląstelių liniją? Ar P19 yra adherentinė ląstelių linija?
Pagrindiniai P19 ląstelių kultivavimo aspektai
|
Padvigubėjimo laikas: |
P19 ląstelių linijos padvigubėjimo laikas yra maždaug 2-3 dienos. |
|
Prigludusios ar suspenduotos: |
P19 embrioninės karcinomos ląstelių linija yra adherentinė. |
|
Subkultūrinimo santykis: |
P19 ląstelės turėtų būti subkultūruojamos kas 48 valandas, o šių ląstelių padalijimo santykis turėtų būti 1:10. Adheravusios ląstelės plaunamos 1 X fosfatinio buferinio tirpalo tirpalu ir inkubuojamos su "Accutase", kol ląstelės disocijuoja. Ląstelės užpilamos auginimo terpe ir surenkamos centrifuguojant. Surinktos ląstelės atsargiai resuspenduojamos ir išpilstomos į naujas kolbas. |
|
Auginimo terpė: |
P19 ląstelėms auginti naudojama DMEM/Ham's F12 terpė, kurioje yra 5 % galvijų fetalinio serumo, 3,1 g/l gliukozės, 1,6 mM L-glutamino, 1,0 mM natrio piruvato, 15 mM HEPES ir 1,2 g/l NaHCO3. |
|
Augimo sąlygos: |
P19 embrioninės karcinomos ląstelių linijai auginti ir kultivuoti būtinas 37 °C temperatūros drėkinamasis inkubatorius su 5 % CO2. |
|
Laikymas: |
Kad ląstelės išliktų gyvybingos ilgesnį laiką, užšaldyti P19 ląstelių buteliukai turėtų būti laikomi žemesnėje nei -150 °C temperatūroje šaldiklyje arba skysto azoto garų fazėje. |
|
Šaldymo procesas ir terpė: |
P19 ląstelėms užšaldyti galima naudoti CM-1 arba CM-ACF terpę, taikant lėto užšaldymo metodą, kuris apsaugo ląsteles nuo šoko ir išsaugo jų gyvybingumą. |
|
Atšildymo procesas: |
Užšaldytas P19 ląsteles galima atšildyti 37 °C temperatūros vandens vonelėje, greitai maišant buteliuką 40-60 sekundžių. Ląstelės užpilamos šviežia terpe ir centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės elementai. Ląstelių paletė vėl resuspenduojama ir ląstelės supilamos į naują kolbą auginimui. |
|
Biologinės saugos lygis: |
P19 ląstelių linijai reikia 1 biologinės saugos lygio laboratorinių sąlygų. |
P19 ląstelių linija: Privalumai ir trūkumai
Šiame skyriuje aptariami P19 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.
Privalumai
- Diferenciacijos potencialas: P19 ląstelės gali diferencijuotis į įvairius ląstelių tipus, įskaitant kardiomiocitus, neuronus ir mikroglijos ląsteles. Joms diferencijuoti reikalingi netoksiški vaistai, pavyzdžiui, retinoinė rūgštis ir dimetilsulfoksidas (DMSO). Retinoinė rūgštis skatina neuronų, mikroglijos ir astroglijos vystymąsi, o DMSO inicijuoja plakančių kardiomiocitų ir lygiųjų raumenų ląstelių vystymąsi. Taigi P19 ląstelės yra naudingos tiriant ląstelių diferenciaciją ir vystymosi procesus
- Modelio sistema: P19 pluripotentinės embrioninės karcinomos ląstelių linija yra vertingas ankstyvojo embriono vystymosi tyrimo modelis. Mokslininkai naudoja P19 ląsteles, kad išsiaiškintų ląstelių signalizacijos kelius ir su šiais procesais susijusius ląstelinius bei molekulinius mechanizmus
Trūkumai
- Kiaulių kilmė: P19 yra pelės embrioninės karcinomos ląstelių linija. Todėl tyrimų, atliktų naudojant šias ląsteles, rezultatai negali būti visiškai pritaikyti žmogaus biologijai ir procesams
P19 ląstelių pritaikymas moksliniams tyrimams
P19 ląstelės dėl savo diferenciacijos gebėjimo ir svarbos vystymosi biologijai bei kamieninių ląstelių tyrimams gali būti naudojamos keliuose moksliniuose tyrimuose. Kai kurie svarbūs P19 embrioninės karcinomos ląstelių panaudojimo moksliniams tyrimams būdai yra šie:
- Ląstelių diferenciacijos tyrimai: Kaip žinome, P19 ląstelės gali diferencijuotis į neuronus, mikroglijos, lygiųjų raumenų ląsteles ir kardiomiocitus, todėl plačiai naudojamos ląstelių diferenciacijos procesams tirti. Be to, jos padeda tirti nervų ir širdies vystymąsi bei jį lemiančius mechanizmus. 2018 m. atliktame tyrime nustatyta, kad reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) nukreipia P19 ląstelių diferenciaciją į tam tikrus ląstelių tipus ir neleidžia indukuoti kitų [3]. Kitame tyrime buvo nagrinėjamas retinoinės rūgšties sukeltas nervų diferenciacijos procesas ir nustatyta, kad jame dalyvauja PI3K/Akt/GSK3β signalinis kelias [4].
- Vystymosi biologija: P19 ląstelės yra neįkainojamas modelis ankstyvajam embriono vystymuisi tirti. Jos padeda mokslininkams suprasti sudėtingus biologinius procesus, pavyzdžiui, audinių formavimąsi embriono vystymosi metu. Tyrime naudotos P19 ląstelės ir tirti skilvelių pertvaros defekto (VSD) formavimąsi lemiantys molekuliniai veiksniai. Rezultatai atskleidė, kad ilga nekoduojanti RNR SNHG6 prisideda prie VSD, neigiamai reguliuodama miRNA-101 ir aktyvuodama Wnt/β-katenino kelią [5].
- Vaistų tyrimas: P19 pelės embrioninės karcinomos ląstelių linija taip pat naudojama potencialiems kandidatams į vaistus tikrinti. Tyrime naudoti diferencijuoti P19 ląstelių neuronai ir tirtas neuroprotekcinis sintetinio L-Dopa ir Mucuna pruriens sėklų vandeninio ekstrakto acetilcholinesterazės slopinamasis poveikis. Rezultatai parodė, kad augalinis ekstraktas, palyginti su L-Dopa, pasižymėjo perspektyviais rezultatais [6].
Įsigykite P19 ląstelių liniją šiandien
P19 ląstelės: Mokslinės publikacijos
Šiame straipsnių skyriuje bus aprašytos kelios įdomios mokslinių tyrimų publikacijos apie P19 ląsteles.
Šis straipsnis buvo paskelbtas 2017 m. žurnale "Oncology Reports". Tyrime siūloma, kad hipofizės lytiniai hormonai lemia teratokarcinomos ląstelių linijų, įskaitant P19 ląsteles, adheziją, proliferaciją ir migraciją.
Ilgosios nekoduojančios RNR uc. 4 daro įtaką ląstelių diferenciacijai per TGF-beta signalinį kelią
Šioje publikacijoje žurnale Experimental & Molecular Medicine (2018 m.) naudotos P19 ląstelės ir tirta ilgos nekoduojančios RNR uc.4 funkcija. Rezultatai atskleidė, kad uc.4 veikia ląstelių diferenciaciją moduliuodama TGF beta signalinį kelią.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2018 m. žurnale "Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine". Tyrimo metu nustatyta, kad natūralus smegenų audinio ekstraktas ir trimatė ląstelių kultūra gali pagreitinti P19 embrioninės karcinomos ląstelių diferenciaciją į nervines ląsteles.
Šis tyrimas paskelbtas žurnale "Journal of Ethnopharmacology" 2020 m. Tyrime pasiūlyta, kad Cichorium intybus L. lapų ekstraktas gali indukuoti P19 embrioninių karcinomų ląstelių diferenciaciją į insuliną gaminančias kasos β ląsteles.
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale Molecules (2022). Šiame tyrime nagrinėtas Mucuna pruriens sėklų ekstrakto neuroprotekcinis ir acetilcholinesterazę slopinantis poveikis P19 ląstelių neuronams.
P19 ląstelių linijos šaltiniai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt
Toliau pateikiami keli šaltiniai apie P19 ląsteles.
- P19 ląstelių neuronų diferenciacijos protokolas: Šiame straipsnyje pateikiamas P19 ląstelių neuronų diferenciacijos protokolas ir kita naudinga informacija apie P19 ląstelių diferenciaciją.
- P19 ląstelių transfekcija: Ši nuoroda padės jums sužinoti P19 ląstelių transfekcijos protokolą.
Šioje nuorodoje pateikiamas P19 ląstelių auginimo protokolas.
- P19 ląstelės: Šioje svetainėje pateikiama visa naudinga informacija apie P19 ląstelių liniją, įskaitant jos auginimo sąlygas, P19 ląstelių terpę, ląstelių skaidymą ir daug daugiau.
P19 ląstelių linijos tyrimas: Dažniausiai užduodami klausimai
Nuorodos
- McBurney, M.W., P19 embrioninės karcinomos ląstelės. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 embrioninės karcinomos ląstelių linija: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey, and G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F. ir kiti, All-trans-retinoidinė rūgštis skatina P19 ląstelių diferenciaciją į neuronus, dalyvaujančius PI3K/Akt/GSK3β signaliniame kelyje. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al. ilgoji nekoduojanti RNR SNHG6 prisideda prie skilvelinės pertvaros defekto formavimosi per neigiamą miR-101 reguliavimą ir Wnt/β-katenino kelio aktyvinimą. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al, Mucuna pruriens seed aqueous extract improved neuroprotective and acetylcholinesterase inhibitory effects compared with synthetic L-dopa. Molekulės, 2022. 27(10): p. 3131.