NIH-3T3 ląstelės: NIH-3T3 ląstelių tyrimai ir pritaikymas
NIH-3T3 ląstelių linija, kurią 1962 m. Niujorko universiteto Medicinos mokykloje Hovardas Grinas ir Džordžas Todaro sukūrė iš 17 dienų Šveicarijos albinosų pelės embriono audinio, tapo pagrindiniu biomedicininių tyrimų šaltiniu. NIH-3T3 ląstelės, pripažintos labai imliomis leukemijos virusui ir sarkomos viruso židiniui formuotis, yra labai svarbus įrankis atliekant daugybę mokslinių tyrimų, įskaitant virusinės onkologijos tyrimus, genų raiškos analizę ir ląstelių augimo dinamikos tyrimus. "3T3" nomenklatūra atspindi ląstelių auginimo metodą, reiškiantį "3 dienų perkėlimo" intervalą su pradiniu 3 × 10^5 ląstelių pasėlio tankiu, pabrėžiant standartizuotas sąlygas, kuriomis šios ląstelės pirmą kartą buvo auginamos ir plečiamos.
NIH-3T3 ląstelių morfologijos įvairovė ir pritaikymas
Viena iš išskirtinių NIH-3T3 ląstelių savybių yra jų morfologinis pritaikomumas, kuris labai kinta priklausomai nuo kultūros susilpnėjimo. Esant mažesniam tankumui, šie fibroblastai pasižymi verpstės formos, pavienių ląstelių struktūra, kuri, populiacijai pasiekus susiliejimą, virsta tankiais, sūkuriniais modeliais. NIH-3T3 ląstelės, kurių vidutinis skersmuo yra apie 18 μm, yra universalus modelis išsamiems ląstelės biologijos tyrimams, pradedant audinių atstatymo mechanizmais ir baigiant sudėtingais ląstelės ciklo reguliavimo keliais.
Kultivavimo informacija
Pagrindinės kultivavimo detalės:
Populiacijos padvigubėjimo laikas: Apytiksliai 20 valandų.
Augimo tipas: Adherentinės kultūros.
Sėjimo tankis: Rekomenduojamas: rekomenduojama: 3-4 x 10^4 ląstelių/cm^2.
Auginimo terpė: DMEM arba Ham's F12, papildyta 5 % FBS ir 2,5 mM L-glutamino.
Augimo sąlygos: Laikyti 37 °C temperatūroje, drėkinamame inkubatoriuje su 5 % CO2.
Laikyti: Laikyti žemesnėje nei -195 °C temperatūroje skysto azoto garų fazėje.
Šaldymo metodas: Naudokite CM-1 arba CM-ACF terpę; naudokite lėto užšaldymo metodą (1 °C temperatūros kritimas).
Atšildymo protokolas: greitas pašildymas 37 °C vandens vonioje, po to centrifugavimas, kad būtų pašalinta užšaldymo terpė, ir pakartotinis ištirpinimas augimo terpėje.
Biologinės saugos lygis: Kultivuojant reikia nustatyti 1 biologinės saugos lygį.
Šveicarijos Albino pelės laboratorijoje.
NIH 3T3 ląstelių naudojimo privalumai ir trūkumai
Privalumai
Transfekcijos efektyvumas: NIH 3T3 ląstelės, žinomos dėl didelio transfekcijos greičio, puikiai tinka tiek trumpalaikiams, tiek stabiliems genų raiškos tyrimams, joms tinka įvairūs transfekcijos metodai.
Maitinamojo sluoksnio naudingumas: Šios ląstelės dažnai naudojamos kaip pagalbinis maitinamasis sluoksnis bendroms kultūroms su tokiomis ląstelėmis kaip keratinocitai ir kamieninės ląstelės, nes jos išskiria augimo veiksnius, skatinančius bendrų kultūrų ląstelių augimą.
Kamieninių ląstelių tyrimai: NIH-3T3 ląstelės yra mėgstamas pasirinkimas kamieninių ląstelių tyrimuose, nes jos indukuoja pluripotentiškumą be genetinės modifikacijos ir sukuria palankią aplinką kamieninių ląstelių diferenciacijai.
Kultūrų stabilumas: NIH-3T3 ląstelės pasižymi stabilumu ir mažu savaiminės transformacijos dažnumu. Tačiau tam tikromis sąlygomis arba veikiant tam tikriems onkogenams ar mutagenams, NIH-3T3 ląstelės gali spontaniškai transformuotis. Ši transformacija gali lemti vėžinių savybių, tokių kaip nekontroliuojamas augimas, kontaktinio slopinimo praradimas ir gebėjimas formuoti navikus, kai jos įšvirkščiamos į jautrius šeimininkus, įgijimą.
Trūkumai
Nenuoseklus ląstelių dydis: NIH-3T3 ląstelių pailga, verpstės formos morfologija gali būti skirtinga, o tai apsunkina vaizdų analizę atliekant tyrimus.
Imlumas infekcijai: Šios ląstelės yra linkusios užsikrėsti bakterinėmis ir mikoplazminėmis infekcijomis, jei nėra laikomos griežtomis aseptinėmis sąlygomis, o tai gali turėti įtakos eksperimentų vientisumui.
NIH-3T3 ląstelių pritaikymas moksliniams tyrimams
DNR transfekcijos tyrimai: NIH-3T3 ląstelės yra tvirtos, todėl puikiai tinka įvairių genų įvedimui ir jų funkcijos tyrimams, kurie atliekami tiriant tokius baltymus kaip NAB2-STAT6 ir jų vaidmenį ląsteliniuose procesuose.
Ląstelių tyrimai: Jų patikimumas apima įvairius tyrimus, įskaitant gyvybingumo, apoptozės ir židinių formavimosi tyrimus, leidžiančius įžvelgti ląstelių reakcijas įvairiomis eksperimentinėmis sąlygomis.
Ląstelių ciklo tyrimai: Ląstelių linijos paprastas ląstelės ciklo reguliavimas per serumo kiekį leidžia ją naudoti kaip veiksmingą modelį ląstelių ciklo reguliavimui ir jo pakitimams ligų kontekste tirti.
Pagerinkite savo tyrimus naudodami NIH-3T3 ląsteles
Svarbiausių tyrimų, susijusių su fibroblastų ląstelių linija NIH 3T3, akcentavimas
NIH-3T3 ląstelių linija buvo labai svarbi daugelyje mokslinių tyrimų projektų, apimančių įvairius ląstelių biologijos aspektus. Toliau pateikiama keletas svarbių tyrimų, kuriuose naudotos šios ląstelės:
- NAB2-STAT6 sintezės baltymo tyrimas: Šiame tyrime, paskelbtame žurnale "Biochemical and Biophysical Research Communications", nagrinėjama, kaip NAB2-STAT6 sintezės baltymas veikia NIH-3T3 ląsteles, ypač jo vaidmuo didinant ląstelių augimą ir migraciją per EGR-1 reguliavimą
- APOBEC3 ir kiaulių leukemijos viruso tyrimai: Šiame žurnale "Virology" publikuotame tyrime nagrinėjama AKV pelių leukemijos viruso hipermutacija NIH-3T3 ląstelėse, kuriose ekspresuojamas pelės APOBEC3 genas
- Epigenetinių vaistų antimetastazinio potencialo vertinimas: Šiame tyrime vertinamas hidralazino ir valproinės rūgšties antimetastazinis poveikis RAS transformuotoms NIH-3T3 ląstelėms
- Baicaleino poveikis NIH-3T3 proliferacijai ir kolageno sintezei: Šiame tyrime naudojamos NIH-3T3 ląstelės, kad būtų ištirta, kaip Baicaleinas veikia ląstelių proliferaciją ir kolageno gamybą per miR-9 ir į insuliną panašaus augimo faktoriaus-1 ašies moduliaciją
- Riboflavino išeikvojimo ir navikų genezės tyrimas: Šiame tyrime pateikiami duomenys apie tai, kaip riboflavino trūkumas NIH-3T3 ląstelėse prisideda prie navikinių procesų, skatindamas ląstelių dauginimąsi ir sutrikdydamas ląstelių ciklo genų reguliavimą
Pagrindiniai NIH-3T3 ląstelių tyrimų šaltiniai
Mokslininkai, norintys dirbti su NIH-3T3 ląstelėmis, gali naudotis įvairiais ištekliais, kuriais galima naudotis kultivavimo ir eksperimentų protokoluose:
- Sferoidų formavimas NIH-3T3 ląstelėse: Šiame vaizdo įraše pateikiama išsami informacija apie sferoidų formavimą - 3D ląstelių kultūros metodą, kuriuo NIH-3T3 ląstelės susitelkia į klasterius, o tai yra fiziologiškai tinkamesnis tyrimų modelis
- NIH-3T3 ląstelių augimo stebėjimas: Šiame vaizdo įraše, naudojant "JuLI Br" gyvų ląstelių vaizdavimo sistemą, užfiksuota 65 valandų NIH-3T3 ląstelių augimo dinamika, rodanti ląstelių dauginimąsi realiuoju laiku
Šiais ištekliais siekiama paremti jūsų mokslinių tyrimų su NIH-3T3 ląstelėmis pastangas, suteikti pagrindą sėkmingiems eksperimentams ir atradimams.
Dažniausiai užduodami klausimai apie NIH-3T3 ląsteles
Nuorodos
- Rahimi, A.M., M. Cai ir S. Hoyer-Fender, NIH3T3 fibroblastų ląstelių linijos heterogeniškumas. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., et al, Pirmasis molekulinis citogenetinis NIH 3T3 ląstelių linijos didelės skiriamosios gebos apibūdinimas taikant daugiaspalvį juostinį skenavimą. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al., Comparative analysis of different feeder layers with 3T3 fibroblasts for culturing rabbbits limbal stem cells (Skirtingų maitinamųjų sluoksnių su 3T3 fibroblastais palyginamoji analizė triušių limbalinėms kamieninėms ląstelėms kultivuoti ). International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Neuroninių ląstelių diferenciacija iš NIH/3T3 fibroblastų apibrėžtomis sąlygomis. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al., NAB2-STAT6 fuzinis baltymas tarpininkauja ląstelių proliferacijai ir onkogeniniam progresavimui per EGR-1 reguliavimą. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., Sloppymerase™ raiška NIH/3T3 ląstelėse: Sloppererazė: į klaidas linkusios sintezės polimerazės įvairiapusiškumo tyrimas. 2021.
- Sahinturk, V., et al., Acrylamide exerts its citotoxicity in NIH/3T3 fibroblast cells by apoptosis. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E. A. ir F. Caicci, Discovery of the First Human Retro-Giant Virus (Pirmojo žmogaus retro-gyvūninio viruso atradimas): Jo morfologijos, retrovirusinės kinazės ir gebėjimo sukelti navikus pelėms aprašymas. bioRxiv, 2019: p. 851063.
- Endo, M., et al, E2F1-Ror2signalai tarpininkauja koordinuotam transkripcijos reguliavimui skatinant G1/S fazės perėjimą bFGFstimuliuojamuoseNIH/3T3 fibroblastuose. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L. ir kt. riboflavino trūkumas skatina HEK293T ir NIH3T3 ląstelių navikėjimą, palaikydamas ląstelių proliferaciją ir reguliuodamas su ląstelių ciklu susijusių genų transkripciją. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.