LNCaP ląstelių linija: Raktas į prostatos vėžio proveržį
LnCaP ląstelių linija yra kertinis akmuo vėžio tyrimuose, ypač tiriant prostatos vėžį. Jos platus taikymas šioje srityje siejamas su jos naudingumu siekiant suprasti biologinius prostatos vėžio pagrindus ir įvertinti galimų terapinių intervencijų veiksmingumą. Šio straipsnio tikslas - pateikti pagrindines žinias apie LNCaP (prostatos limfmazgių karcinoma) ląstelių liniją, suteikti mokslininkams svarbiausios informacijos, reikalingos pradedant darbą su šia ląstelių linija.
LNCaP ląstelių savybės ir kilmė
LNCaP ląstelių linija, pripažinta dėl savo svarbos prostatos vėžio tyrimams, pasižymi unikaliomis savybėmis ir kilme, kurias tyrėjai turi suprasti:
Kilmė: LNCaP ląstelės pirmą kartą buvo išskirtos 1977 m. iš prostatos vėžiu sergančio 50 metų kaukaziečio vyro metastazavusio limfmazgio, konkrečiai iš kairiosios viršraktikaulinės srities.
Jautrumas androgenams: Šių ląstelių jautrumas androgenams - ši savybė padėjo iš originalių LNCaP ląstelių sukurti dvi svarbias sublinijas: LNCaP-G4, pasižyminti dideliu jautrumu androgenams, ir LNCaP-E9, pasižyminti mažu jautrumu androgenams. Šios sublinijos yra universalus įrankis prostatos vėžio niuansams tirti.
Morfologija: LNCaP ląstelės yra panašios į epitelines ir gali augti kaip agregatai arba pavienės ląstelės, todėl yra universalus modelis ląstelių sąveikai ir vėžio ląstelių morfologijai tirti.
Dydis: LNCaP prostatos vėžio ląstelių vidutinis skersmuo yra maždaug 18 µm.
Chromosominė sudėtis: Ląstelių linija yra aneuploidinė, jos chromosomų skaičius svyruoja nuo 76 iki 91, o tai atspindi genetinį nestabilumą, dažnai pastebimą vėžio ląstelėse.
Navikinis potencialas: LNCaP ląstelės, įvestos į afiminių nuogų pelių patinus, 58 % dažniau formuoja poodinius navikus, o tai rodo jų naudingumą prostatos vėžio in vivo modeliuose.
Išsamus LNCaP ląstelių kilmės, savybių ir naudingumo moksliniams tyrimams supratimas suteikia tvirtą pagrindą mokslininkams, pradedantiems prostatos vėžio tyrimus, palengvina pagrįstą eksperimentų planavimą ir rezultatų interpretavimą.
LNCaP ląstelių kultivavimas: Pagrindinės gairės
Norint pradėti tyrimus su LNCaP, garsia prostatos vėžio ląstelių linija, būtina gerai suprasti jos kultivavimo pagrindus. Toliau išdėstyti svarbiausi aspektai, į kuriuos reikia atsižvelgti norint veiksmingai kultivuoti LNCaP ląsteles:
Populiacijos padvigubėjimo laikas: LNCaP ląstelės vidutiniškai padvigubėja per 48-60 valandų, t. y. per tiek laiko ląstelių populiacija padvigubėja optimaliomis sąlygomis.
Šių ląsteliųaugimo ypatybės: šios ląstelės yra adherentiškos, linkusios augti vienaląsčiais sluoksniais, kartu sudarydamos išskirtinius ląstelių telkinius, o tai yra svarbi savybė, leidžianti stebėti ląstelių būklę ir susiliejimą.
Sėjimo tankis: Patartina LNCaP ląsteles sėti 1-2 x 10^4 ląstelių/cm^2 tankumu. Protokolas apima ląstelių plovimą PBS, jų atskyrimą naudojant "Accutase", po to centrifugavimą. Tuomet ląstelės resuspenduojamos ir auginamos naujose kolbose šviežioje augimo terpėje.
Optimali augimo terpė: Tinkamiausia terpė LNCaP auginti yra EMEM, praturtinta 2,5 mM L-glutaminu ir 10 % galvijų fetalinio serumo (FBS). Norint palaikyti optimalias augimo sąlygas, rekomenduojama terpę atnaujinti kas trečią dieną.
Kultivavimo aplinka: LNCaP ląstelės auga drėkinamame inkubatoriuje, kurio temperatūra 37 °C ir 5 % CO2, t. y. tokiomis sąlygomis, kurios labai primena in vivo aplinką.
Ląstelių laikymas: Ilgalaikiam saugojimui LNCaP ląstelės turėtų būti laikomos skysto azoto garų fazėje, taip užtikrinant jų gyvybingumą būsimiems eksperimentams.
Šaldymo ir atšildymo metodai: Naudojant CM-1 arba CM-ACF šaldymo terpę, LNCaP ląstelės turėtų būti užšaldomos palaipsniui, kad patirtų kuo mažesnį terminį šoką. Atšildžius (geriausia tai daryti 37 °C temperatūros vandens vonioje, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis), ląsteles reikia nedelsiant resuspenduoti į augimo terpę, centrifuguoti, kad būtų pašalinta užšaldymo terpė, ir perkelti į kultūrų kolbas.
Biologinio saugumo aspektai: Kultivuojant LNCaP ląsteles reikia laikytis 1 biologinės saugos lygio protokolų, užtikrinančių saugų ir veiksmingą elgesį su ląstelėmis.
Šios rekomendacijos yra LNCaP ląstelių kultūrų kūrimo ir palaikymo pagrindas, padedantis gauti patikimus ir atkuriamus prostatos vėžio tyrimų rezultatus.
LNCaP ląstelių linijos naudojimo privalumai ir trūkumai
LNCaP ląstelių linija - kertinis prostatos vėžio tyrimų akmuo - pasižymi unikaliomis savybėmis, kurios suteikia ir privalumų, ir sunkumų ją taikant. Šiame skirsnyje nurodomi svarbiausi LNCaP ląstelių linijos privalumai ir galimi trūkumai.
Privalumai
Lengvas auginimas: LNCaP ląstelės yra ypač patogios auginti ir prižiūrėti laboratorijoje. Dėl šio patogumo jos pasirinktos įvairioms reikmėms, įskaitant vaistų atranką ir farmakologinius tyrimus.
Jautrumas androgenams: LNCaP ląstelės pasižymi priklausomybe nuo androgenų, kurią apibūdina androgenų receptorių (AR) raiška. Dėl šios savybės jos yra neįkainojamas in vitro modelis nuo androgenų priklausomo prostatos vėžio dinamikai tirti, suteikiantis žinių apie ligos progresavimą ir galimus terapinius taikinius.
Trūkumai
Augimo greitis: Vienas iš LNCaP ląstelių trūkumų yra palyginti lėtas jų dauginimosi greitis. Ši savybė gali kelti sunkumų eksperimentų projektuose, kuriuose reikalingas greitas ląstelių augimas arba didelis našumas per ribotą laiką.
Ląstelių susitelkimas: LNCaP ląstelės yra linkusios formuoti agregatus arba klasterius, o tai gali sukelti kintamumą ir apsunkinti tam tikrų ląstelinių tyrimų duomenų aiškinimą, ypač tų, kurie grindžiami tolygiu ląstelių pasiskirstymu arba vienos ląstelės analize.
Šių LNCaP ląstelių linijos savybių supratimas yra labai svarbus, kad mokslininkai galėtų pasinaudoti jos privalumais ir sumažinti jos trūkumų poveikį, taip optimizuojant ląstelių linijos potencialą prostatos vėžio tyrimams.
Androgenams jautrių LNCaP ląstelių mokslinių tyrimų taikymas
LNCaP ląstelės, gautos iš žmogaus prostatos vėžio, yra labai svarbi priemonė įvairiose mokslinių tyrimų srityse. Jų naudingumą lemia tai, kad jos priklauso nuo androgenų ir gali modeliuoti specifinius prostatos vėžio biologijos aspektus. Pagrindiniai panaudojimo būdai:
Prostatos vėžio tyrimai
Androgenų receptorių tyrimai
LNCaP ląstelės, kaip ir daugelis prostatos naviko ląstelių, yra jautrios androgenams, kurie lemia prostatos vėžio augimą. Šis jautrumas išnaudojamas terapiškai, taikant androgenų deprivacijos strategijas, tokias kaip androgenų abliacija arba antiandrogenų, pavyzdžiui, flutamido, naudojimas. Šių terapijų veiksmingumas dažnai stebimas slopinant specifinius antigenus ir slopinant ląstelių proliferaciją. Tačiau atsparių prostatos vėžio formų atsiradimas yra didelis iššūkis, dažnai po antiandrogenų vartojimo nutraukimo, kuris gali sukelti metastazinę ligą.
Mutacijos atlieka pagrindinį vaidmenį LNCaP ląstelių prisitaikymo ir atsparumo mechanizmuose. Taškinės mutacijos, ypač androgenų receptoriaus geno viduje, buvo nustatytos ir ištirtos naudojant tokius metodus, kaip polimerazės grandininė reakcija (PGR) ir transkriptominė analizė. Šios mutacijos gali turėti įtakos ląstelių atsakui į androgenų deprivacijos ir antiandrogenų terapiją, todėl pažengusio prostatos vėžio gydymas tampa dar sudėtingesnis.
Vaistų atradimas
Terapinė atranka
Moksliniai tyrimai, kuriuose naudojamos LNCaP ląstelės, neapsiriboja vien tradiciniais hormonų terapijos metodais, bet apima ir naujus gydymo būdus. Domėtasi viduląsteliniu vaistų pristatymu, kuriuo siekiama paveikti konkrečius šių ląstelių kelius, tokių junginių kaip riplis citotoksiškumu ir tokių medžiagų kaip amigdalinas ir klorgylinas poveikiu. Šiais tyrimais siekiama atrasti naujų metodų, kaip sustabdyti metastazavimo procesą, kontroliuoti ląstelių ciklo progresavimą ir sukelti ląstelių ciklo sustojimą prostatos vėžio ląstelėse, suteikiant vilties, kad bus galima veiksmingiau gydyti pažengusias ir atsparias ligos formas.
Klinikinė reikšmė
LNCaP ląstelių metastazavimo potencialas, ypač jų gebėjimas imituoti metastazavimo procesą tokiose vietose kaip viršraktikaulinis limfmazgis, daro jas neįkainojamas tiriant prostatos vėžio plitimą. Šių ląstelių genomo ir transkriptominio kraštovaizdžio supratimas, įskaitant žmogaus genominės DNR vaidmenį jų elgsenai, yra labai svarbus kuriant metastazuojančio prostatos vėžio prevencijos ar gydymo strategijas.
Pagerinkite savo tyrimus naudodami mūsųLnCaP ląstelių liniją ir jos darinįLnCaP kloną FGC
Ištekliai ir mokslinių tyrimų įžvalgos apie LNCaP ląsteles
Mokslininkams labai svarbu gauti prieigą prie aukštos kokybės LNCaP ląstelių linijų ir išsamių genetinių bei fenotipinių duomenų. Daugybė biologinių saugyklų ir mokslo institucijų siūlo šiuos gyvybiškai svarbius išteklius, suteikiančius mokslininkams galimybę atlikti išsamius ir reikšmingus prostatos vėžio ir susijusių sričių tyrimus.
Vertos dėmesio mokslinių tyrimų publikacijos, susijusios su LNCaP ląstelėmis
LNCaP ląstelių linija buvo pagrindinė daugelio prostatos vėžio tyrimų srityje. Toliau pateikiamos kelios svarbios publikacijos, kuriose LNCaP ląstelės buvo naudojamos kaip pagrindinis tyrimų modelis:
CRISPR/Cas9 taikinys į androgenų receptorių slopina LNCaP žmogaus prostatos vėžio ląstelių augimą: Šiame tyrime, 2018 m. paskelbtame žurnale "Molecular Medicine Reports", išryškėja CRISPR/Cas9, kaip terapinės priemonės, potencialas slopinti LNCaP ląstelių augimą, nukreipiant į androgenų receptorių.
Daphne pontica L. stiebų fitocheminė analizė ir jų proapoptozinės savybės prieš DU-145 ir LNCaP prostatos vėžio ląsteles: Šiame DARU Journal of Pharmaceutical Sciences leidinyje teigiama, kad Daphne pontica L. pasižymi priešvėžinėmis savybėmis prieš LNCaP ir DU-145 ląsteles.
Gliukagono tipo peptido-1 receptoriaus agonisto liraglutido sinerginis priešvėžinis poveikis kartu su docetakseliu LNCaP prostatos vėžio ląstelių linijai: Šiame tyrime, pristatytame 2020 m. žurnale "European Journal of Pharmacology", nagrinėjamas stiprus priešvėžinis liraglutido ir docetakselio sinerginis poveikis LNCaP ląstelėms.
Galimo Coriandrum sativum priešvėžinio poveikio nustatymas PC-3 ir LNCaP prostatos vėžio ląstelių linijose: Remiantis 2018 m. žurnalo "Journal of Cellular Biochemistry" publikacija, Coriandrum sativum ekstraktas pasižymi perspektyviu priešvėžiniu poveikiu LNCaP ląstelėms, moduliuodamas pagrindinius ląstelių ciklo genus.
STEAP1 nukabinimas slopina ląstelių augimą ir sukelia apoptozę LNCaP prostatos vėžio ląstelėse, neutralizuodamas androgenų poveikį: Šiame 2018 m. žurnalo "Molecular Oncology Journal" straipsnyje aptariama, kaip LNCaP ląstelėse nuslopinus per daug išreikštą STEAP1 geną galima sutrukdyti prostatos vėžio ląstelių augimą ir sukelti apoptozę.
LNCaP ląstelės: CKPCaNCaLP: protokolai, vadovėliai ir dar daugiau
LNCaP - plačiai naudojama prostatos vėžio ląstelių linija - turi gausybę išteklių, įskaitant išsamius kultivavimo ir transfekcijos protokolus:
- LNCaP ląstelių linijos transfekcija: Šiame dokumente pateikiamas išsamus LNCaP ląstelių pasavimo ir transfekcijos protokolų vadovas
DUK apie LNCaP ląsteles
Nuorodos
- Castanares, M.A. ir kt., Naujos metastazinio prostatos vėžio ląstelių linijos LNCaP charakterizavimas. The Prostate, 2016. 76(2): p. 215-225.
- Iguchi, K., et al., Isolation and characterization of LNCaP sublines differing in hormone sensitivity (LNCaP sublinijų, besiskiriančių jautrumu hormonams, išskyrimas ir apibūdinimas ). Journal of andrology, 2007. 28(5): p. 670-678.
- Wei, C., et al., CRISPR/Cas9 nukreipimas į androgenų receptorių slopina žmogaus prostatos vėžio ląstelių LNCaP augimą. Molekulinės medicinos ataskaitos, 2018. 17(2): p. 2901-2906.
- Gomes, I.M., et al., Knockdown of STEAP1 inhibits cell growth and induces apoptosis in LNCaP prostate cancer cells counteracting the effect of androgenens. Medicininė onkologija, 2018. 35: p. 1-10.
- Tousi, M.S., et al., Evaluation of apoptotic effects of mPEG-b-PLGA coated iron oxide nanoparticles as a eupatorin carrier on DU-145 and LNCaP human prostate cancer cell lines. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021. 11(1): p. 108-121.