公開日：2023年 | 最終更新日：2026年5月

「継代数」の理解

「パッセージ番号」という概念は細胞培養において極めて重要であり、細胞株が凍結保存からの初期復元後、あるいは標準細胞バンクからの受領後に、新たな培養液へ継代または移植された回数を指します。この指標は、細胞培養の系統と履歴を追跡する上で極めて重要です。

プロセスの概要

日常的な細胞培養の実務において、細胞が一定の密度に達すると、増殖を維持し、過密状態を防ぐために新しい培地に移されます。このような移し替えのたびに、1パッセージとして記録されます。
従来、例えば寄託者からパッセージ60の細胞株を受け取った場合、このパッセージ番号から継続し、継代ごとに番号を増加させていました。この慣行は歴史的な連続性を維持する一方で、当初からパッセージ数が多くなる原因となることがよくありました。 1951年に樹立されたHeLa細胞株のように、特定の細胞株が長期間にわたり、時には数十年にわたって使用されてきたことを考慮すると、その細胞株の樹立以来の総継代数を特定することは現実的ではありません。
当社の細胞培養プロセスの明確性と品質を向上させるため、2023年初頭にこのアプローチを見直しました。現在、新しいバイアルから培養を開始する際、寄贈者からの継代数にかかわらず、製造バッチごとに継代数をリセットし、継代1から新たにカウントを開始しています。

理由

継代は、研究用細胞培養の健全性と有用性を確保するために不可欠な手順です。細胞が増殖しすぎると、接触阻害が生じ、増殖率が低下し、実験結果に悪影響を及ぼす可能性があります。これらの問題を軽減するため、Cytionでは継代を行う際の細胞密度に対して厳格な管理を実施しており、それによって自社細胞株の製造過程において継代回数を低く抑えています。この予防措置により、形態異常、増殖速度の変化、遺伝的ドリフトなど、過度な継代による悪影響を防ぎ、細胞が元の状態から著しく変化することを防ぎます。また、長期にわたる継代は、微生物汚染のリスクを高める可能性もあります。

当社の約束

当社は、研究者に提供する細胞が、元の遺伝的構成および表現型特性に可能な限り近いものであることを保証し、実験データの信頼性を高めます。さらに、各継代を綿密に記録することで、Cytionは研究のトレーサビリティと再現性に貢献しており、この取り組みは細胞培養における高い実践基準を反映したものです。研究者の方々には、細胞培養の健全性と履歴を確認するための参考資料として、培養容器上および実験ノートに、正確な継代回数の記録を残すことをお勧めします。

ヒントとよくあるミス

正しいプロトコルに従うことは不可欠ですが、よくある落とし穴を理解することも同様に重要です。細胞培養の手順は、技術、タイミング、試薬の品質におけるわずかな逸脱にも敏感です。以下のヒントは、Cytionの科学チームが豊富な細胞培養経験に基づいて推奨するベストプラクティスを反映したものです。

細胞への熱ショックを最小限に抑えるため、試薬は使用前に必ず 37°C に予熱してください。
迅速かつ慎重に作業を行い、細胞がインキュベーターの外に置かれる時間を最小限に抑えてください。
実験結果を損なう可能性のある汚染を防ぐため、認証済みでマイコプラズマ検査済みの試薬を使用してください。
継代回数、日付、細胞形態の観察結果など、すべての工程を記録してください。
高価な試薬の無駄を避けるため、スケールアップする前に小規模なパイロット実験でプロトコルの妥当性を確認してください。

推奨されるCytion試薬

Cytionでは、本プロトコルをサポートするために特別に設計された、検証済みの細胞培養試薬を幅広く提供しています。すべての試薬は、一般的に使用される細胞株を用いて性能試験が行われており、完全なドキュメントと共に提供されます。製品ラインナップの全容については、cytion.com/Media-Reagents をご覧ください。