Ramos Cells - B-rakkude lümfoomi uuringud: Ramos'i rakkude tähtsus
Ramos'i rakud on B-lümfotsüütide rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt biomeditsiinilistes uuringutes. Eelkõige leiavad nad esmatähtsat rakendust immunoloogia ja vähiuuringute puhul. Teadlased kasutavad neid rakke tsütotoksiliste ravimite hindamiseks ning B-rakkude pinnaantigeenide, mutatsioonide ja apoptootiliste mehhanismide uurimiseks.
Ramos'i rakkude päritolu ja üldised omadused s
Rakuliini päritolu ja oluliste omaduste mõistmine mängib olulist rolli selle sobivuse otsustamisel teie teadusuuringuteks. Seetõttu on soovitatav seda teavet enne tööga alustamist põhjalikult hinnata. Selles jaotises käsitletakse järgmisi sageli esitatavaid küsimusi: Mis on Ramos'i vähirakuliin? Mis on Ramos'i rakuliin CD19? Mis on Ramos'i rakuliin CD20? Mis on Ramos'i rakkude päritolu? Millised on Ramos'i rakuliini markerid? Mis on Ramos'i rakuliini suurus? Milline on Ramos'i rakuliini morfoloogia?
- Ramos'i rakuliin loodi 1972. aastal. Need rakud saadi 3-aastase, Ameerika tüüpi Burkitt'i lümfoomi põdeva kaukaasia poisi astsiitilisest vedelikust [1].
- Nad ekspresseerivad peamisi B-rakkude markereid, sealhulgas immunoglobuliin M (IgM), CD19, CD20 ja CD22.
- Ramos'i rakud on Epstein-baari viiruse negatiivsed rakud. Siiski võivad nad püsivalt nihkuda Epstein-Barri viiruse positiivseteks rakkudeks.
- Need B-lümfoblastirakud omavad ümmarguse kujuga morfoloogiat.
Ramos'i sinised rakud vs. Ramos'i B-rakud
Ramos'i sinised rakud ja Ramos'i B-rakud on mõlemad inimese Burkitt'i lümfoomi rakud. Mõlemad on Epsteini baariviiruse suhtes negatiivsed. Nende rakkude erinevus seisneb selles, et Ramos'i sinised rakud ekspresseerivad NF-κB/AP-1-indutseeritavat reportergeeni nimega SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), samas kui Ramos'i valged rakud seda ei tee.
Ramos'i rakkude kasvatamine
See osa artiklist on pühendatud sellele, et aidata teil saada teavet Ramos'i rakukultuuride kasvatamise kohta. Siin saate teada: Mis on rakuliinide kahekordistumisaeg? Milline on soovitatav keskkond? Kuidas Ramos'i rakke kasvatada?
Ramos'i rakkude kultiveerimise põhipunktid
|
Kordistumisaeg: |
Ramos'i rakkude kahekordistumisaeg on ligikaudu 20,4 ± 1,5 tundi. See võib siiski erineda sõltuvalt etteantud rakukultuuri tingimustest. |
|
Adherentne või suspensioonis: |
Ramos'i rakud kasvavad suspensioonis. |
|
Rakkude tihedus: |
Ramos'i rakuliini optimaalne rakutihedus on 3 x105 rakku/ml . Subkultuurimiseks kogutakse suspensioonirakud tsentrifuugimise teel. Rakkudele lisatakse uus keskkond ja need resuspendeeritakse ettevaatlikult. Seejärel valatakse rakud uude kolbi tihedusega 3 kuni 9 x105 rakku/ml . |
|
Kasvukeskkond: |
Ramos'i rakkude kasvatamiseks kasutatakse RPMI 1640, mida on täiendatud 10% veiste loote seerumi, 2,1 mM stabiilse glutamiini ja 2,0 g/L NaHCO3-ga. keskkonda tuleb vahetada 2 korda nädalas. |
|
Kasvutingimused: |
Inimese Burkitt'i lümfoomi rakuliini (Ramos) hoitakse niisutatud inkubaatoris 5% CO2 ja 37°C temperatuuril. |
|
Säilitamine: |
Külmutatud Ramos'i rakke hoitakse alla -150 °C temperatuuril või vedela lämmastiku aurufaasis, et kaitsta rakkude elujõulisust pikema aja jooksul. |
|
Külmutamisprotsess ja keskkond: |
Ramos'i rakkude külmutamiseks soovitatakse CM-1 või CM-ACF külmutuskeskkonda. Kasutatakse aeglast külmutamisprotsessi, mis võimaldab temperatuuri järkjärgulist langust 1 kraadi Celsiuse järgi minutis. Selline aeglane külmutamine kaitseb rakke igasuguse šoki eest ja suurendab nende elujõulisust. |
|
Sulatamisprotsess: |
Sulatamiseks hoitakse külmutatud rakkeeelnevalt soojendatud veevannis 37 °C juures 40-60 sekundit, kuni alles jääb väike jääklomp. Seejärel lisatakse värske keskkond ja rakud tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonna elemendid. Pellet resuspendeeritakse uuesti ja rakud doseeritakse uude kolbi, mis sisaldab kasvukeskkonda. |
|
Bioturvalisuse tase: |
Epstein-Barri viiruse negatiivsete Ramos'i rakukultuuride säilitamiseks on vajalik 1. bioloogilise ohutuse taseme laboratoorium. Bioturvalisuse tase nihkub siiski tasemele 2, kui Ramos'i rakud muutuvad püsivalt Epstein-Barri viiruse positiivseks. |
Ramos: Ramos: Eelised ja piirangud
Nagu teistel rakuliinidel, on ka Ramose rakkudel erinevad eelised ja piirangud. Selles osas uuritakse mõningaid märkimisväärseid omadusi, mis võivad nende kasutamist teadusuuringutes oluliselt mõjutada.
Eelised
- Burkitt'i lümfoomi rakumudel: Ramos'i rakud töötati välja Burkitt'i lümfoomi patsiendilt, mis teeb neist asjakohase rakumudeli lümfoidsete pahaloomuliste haiguste uurimiseks
- Lihtne kasvatamine: Ramos'i rakke on lihtne kasvatada ja säilitada laboris. Nende rakukultuuri nõuded ja tingimused on lihtsad
Piirangud
- In vitro mudel: Ramos'i rakud ei pruugi täielikult esindada patsientide kasvajate geneetilist keerukust, mis piirab nende rakendatavust. Lisaks sellele ei pruugi Ramos'i rakuliini abil tehtud katsete tulemused täielikult peegeldada in vivo tingimusi, mis võib põhjustada probleeme seoses translatsiooniga
ramos'i rakkude rakendused teadusuuringutes
Ramos pakub paljulubavaid rakendusi biomeditsiini valdkonnas. Mõned Ramos'i rakkude hädavajalikud kasutusalad teadusuuringutes on järgmised:
- Lümfoomi bioloogia: Ramos'i rakke kasutatakse laialdaselt lümfoomi bioloogia uurimiseks. Neid kasutatakse lümfoidsete pahaloomuliste haiguste aluseks olevate geneetiliste ja molekulaarsete tegurite uurimiseks. Lisaks sellele saavad teadlased nende Burkitt'i lümfoomi rakkude abil ülevaate haiguse algusest, kulgemisest ja heterogeensusest. Samuti uuritakse geneetilisi mutatsioone ja signaaliradu, mis võivad viia täpsemate diagnostiliste ja terapeutiliste lähenemisviiside väljatöötamiseni. 2019. aastal läbiviidud uuringus leiti, et GCN5 (General control non-depressible 5) histoonatsetüültransferaasi inhibeerimine vähendab inimese Burkitt'i lümfoomirakkude (Ramos) kasvajalisust BCR-signalisatsiooni häirimise kaudu. Seetõttu on GCN5 pakutud teostatavaks sihtmärgiks lümfoomi ravimravi arendamiseks [2].
- Ravimi skriining ja testimine: Ramos'i rakuliini kasutatakse laialdaselt ravimite sõelumisel ja testimisel. Teadlased hindavad potentsiaalsete terapeutiliste ühendite tõhusust rakkude proliferatsiooni ja kasvu inhibeerimisel ning rakusurma esilekutsumisel lümfoomirakkudes. See aitab tuvastada paljulubavaid ravimikandidaate, hõlbustades seega sihipärase ravi väljatöötamist lümfoomipatsientidele. Sellised uuringud näitasid, et Annona puuviljakoor, viljaliha ja seemnete metanoolne ekstrakt avaldas mõõdukat, samas kui kloroformi ekstrakt avaldas tugevat mõju Ramos'i rakkude proliferatsioonile. Seega pakuti uuringus välja, et Annona viljad võivad osutuda tõhusaks lümfoomi ennetamisel ja ravimisel [3].
Ramos Cells teie teadusuuringuteks
Ramos'i rakke sisaldavad väljaanded
Selles artikli osas on loetletud mõned huvitavad teaduspublikatsioonid, milles käsitletakse Ramos'i rakuliini:
CD 79b ja CD 19 pidev signalisatsioon on vajalik Burkitt'i lümfoomi B-rakkude sobivuse tagamiseks
See uurimus avaldati ajakirjas The EMBO 2018. aastal. Uuringus leiti, et Ramos B-rakud vajavad Ramos rakkude CD19 ja CD79b (BCR-signalisatsiooni komponent Igβ) markerite ekspressiooni oma fitnessi ja konkurentsivõimelise kasvu jaoks.
Selles ajakirjas Neoplasia (2021) avaldatud uuringus kasutati Ramos'i rakke ja pakuti välja, et Burkitt'i lümfoomi rakkudes on segaliini kinaasi domeen (MLKL) epigeneetiliselt reguleeritud. Seega on see paljulubav prognoositav marker nekroptoosiga seotud ravi edukuse jaoks.
PBK/TOPK Tyr74 fosforüülimine JAK2 poolt soodustab Burkitt lümfoomi kasvajate kasvu
See teadusartikkel ajakirjas Cancer Letters (2022) viitas sellele, et JAK2/TOPK/histoon H3-signaaliteljestik mängib olulist rolli B-lümfoomi rakuliinide proliferatsioonis in vitro.
See artikkel avaldati 2020. aastal ajakirjas Toxins. Uuringus pakuti välja, et verotoksiin-1-ravi indutseerib Ramos B-rakkudes endoplasmilise retikulumi (ER) stressi. See toob kaasa apoptootilise või ellujäämise signalisatsiooni käivitumise lümfoomi rakuliinides.
Silümariin inhibeerib Toll-like retseptori 8 geeni ekspressiooni ja apoptoosi Ramos'i vähirakuliinis
Selles Avicenna Journal of Phytomedicine'is (2020) avaldatud uuringus teatati, et looduslik ühend silümariin pärsib TLR8 (Toll-like receptor 8) ekspressiooni ja apoptoosi Ramos'i rakuliinis.
Ramos'i rakuliini ressursid: Protokollid, videod ja muud
Järgnevalt on esitatud mõned veebiressursid Ramos'i rakuliini kohta:
- Ramos'i rakkude transfektsioon: See dokument aitab teil õppida Ramos'i rakuliini transfektsiooni protokolli.
Järgmine link sisaldab Ramos'i rakukultuuri protokolli:
- Ramos'i rakud: See veebisait sisaldab põhiteavet Ramos'i rakuliini kohta. Samuti sisaldab see Ramos'i rakkude subkultiveerimise ning paljunevate ja krüokonserveeritud kultuuride käitlemise protokolli. Lisaks on kättesaadav teave Ramos'i rakkude söötme, kahekordistumisaja ja rakutiheduse kohta.
Ramos Cells'i peamised teadmised: Korduma kippuvad küsimused
Viited
- Kerntke, C.G., Membraani IgE organismi ja signaalimisvõime analüüs selle interaktsiooni ajal CD19 ja CD23-ga B-lümfotsüütides. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., GCN5 HAT inhibeerimine vähendab inimese Burkitt lümfoomi rakkude ellujäämist MYC sihtgeeni ekspressiooni vähendamise ja BCR signaaliradade takistamise kaudu. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Annona vilja fütokemiline profiil ja antioksüdatsiooniline aktiivsus ning selle mõju lümfoomirakkude proliferatsioonile. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.