P19 rakud - embrüonaalse kartsinoomi uuringud P19 rakkude abil
P19 on hiire embrüonaalse kartsinoomi rakuliin. Seda kasutatakse laialdaselt biomeditsiinilistes uuringutes, peamiselt arengubioloogia, tüvirakkude bioloogia, rakkude diferentseerumise ja ravimite sõelumise uurimiseks. Kuna P19 rakud on diferentseerumisvõimelised, on need kasulikud keeruliste bioloogiliste protsesside, näiteks kudede moodustumise ja varase embrüonaalse arengu uurimisel. Käesolevas artiklis arutame hiirtest saadud P19 rakkude põhialuseid.
P19 rakkude üldised omadused ja päritolu
Enne rakuliiniga töötamist on oluline teada rakuliini üldisi omadusi ja päritolu. Selles jaotises käsitletakse järgmist: Mis on P19 rakuliin? Milline on P19 rakuliini suurus? Mis on P19 rakkude päritolu?
- P19 on pluripotentsete embrüonaalsete kartsinoomrakkude tüüp, mis on algselt saadud C3H/He-hiirel arenenud teratokartsinoomist. Rakuliin loodi esmakordselt 1982. aastal McBurney ja Rogersi poolt.
- P19 rakud suudavad pidevalt kasvada seerumiga täiendatud kasvukeskkonnas. Nad võivad diferentseeruda teisteks rakutüüpideks, kui nad puutuvad kokku mittetoksiliste ravimitega, nagu retinoiinhape ja dimetüülsulfoksiid (DMSO) [1].
- Need hiire kartsinoomi rakud omavad epiteelilaadset morfoloogiat.
- P19 rakuliinil on euploidne meessoost karüotüüp (n=40; XY).
P19 rakkude kasvatamise teave
P19 rakuliini kasvatatakse teaduslaboratooriumides laialdaselt selle ainulaadsete omaduste tõttu. Selle kultiveerimine on lihtne ja juhitav. Selles jaotises on mainitud kogu põhiteave, mida vajate P19 rakukultuuri hooldamiseks ja kasvatamiseks. Me teame: Milline on P19 rakkude kahekordistumisaeg? Kuidas kasvatada P19 rakuliini? Kas P19 on adherentne rakuliin?
P19 rakkude kultiveerimise põhipunktid
|
Kordistumisaeg: |
P19 rakuliini puhul on teatatud kahekordistumisaeg ligikaudu 2-3 päeva. |
|
Adherentselt või suspensioonis: |
P19 embrüokartsinoomi rakuliin on adherentne. |
|
Subkultuuride suhe: |
P19 rakke tuleks subkultiveerida iga 48 tunni järel ja nende rakkude puhul tuleks säilitada jagunemissuhe 1:10. Adherentsed rakud pestakse 1 X fosfaatpuhvrisoolalahusega ja inkubeeritakse Accutase'iga, kuni rakud dissotsieeruvad. Rakkudele lisatakse kultuurkeskkonda ja need korjatakse tsentrifuugimise teel. Kogutud rakud resuspendeeritakse ettevaatlikult ja doseeritakse uutesse kolvidesse. |
|
Kasvukeskkond: |
P19 rakkude kasvatamiseks kasutatakse DMEM/Ham's F12 keskkonda, mis sisaldab 5% veiste loote seerumit, 3,1 g/L glükoosi, 1,6 mM L-glutamiini, 1,0 mM naatriumpüruvaati, 15 mM HEPES ja 1,2 g/L NaHCO3. |
|
Kasvutingimused: |
P19 embrüonaalse kartsinoomi rakuliini kasvatamiseks ja kultiveerimiseks on oluline 37 °C juures asuv niisutatud inkubaator, mis on varustatud 5% CO2-ga. |
|
Säilitamine: |
Külmutatud P19 rakkude viaalid tuleb säilitada alla -150°C temperatuuril sügavkülmikus või vedela lämmastiku aurufaasis, et säilitada rakkude elujõulisus pikema aja jooksul. |
|
Külmutamisprotsess ja keskkond: |
P19 rakkude külmutamiseks võib kasutada CM-1 või CM-ACF keskkonda, kasutades aeglast külmutamismeetodit, mis kaitseb rakke igasuguse šoki eest ja säilitab nende elujõulisuse. |
|
Sulatamisprotsess: |
Külmutatud P19 rakke saab sulatada 37 °C veevannis, segades viaali kiiresti 40-60 sekundit. Rakkudele lisatakse värsket keskkonda ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonna elemendid. Rakupallett suspenseeritakse uuesti ja rakud valatakse kasvamiseks uude kolbi. |
|
Bioturvalisuse tase: |
P19 rakuliini puhul on nõutavad 1. bioloogilise ohutuse taseme laboratoorsed seaded. |
P19 rakuliin: P19: Eelised ja puudused
Selles jaotises käsitletakse P19 rakuliini eeliseid ja puudusi.
Eelised
- Diferentseerumispotentsiaal: P19 rakud võivad diferentseeruda erinevateks rakutüüpideks, sealhulgas kardiomüotsüütideks, neuroniteks ja mikrogliarakkudeks. Nad vajavad diferentseerimiseks mittetoksilisi ravimeid, nagu retinoiinhape ja dimetüülsulfoksiid (DMSO). Retinoiinhape kutsub esile neuronite, mikroglia ja astroglia arengut, samas kui DMSO algatab löövatele kardiomüotsüütidele ja silelihasrakkudele arengu. Seega on P19 rakud kasulikud rakkude diferentseerumise ja arenguprotsesside uurimiseks
- Mudelisüsteem: Pluripotentne embrüokartsinoomi rakuliin P19 on väärtuslik mudel varase embrüonaalse arengu uurimiseks. Teadlased kasutavad P19 rakke, et selgitada rakkude signaaliradu ning neis protsessides osalevaid rakulisi ja molekulaarseid mehhanisme
Puudused
- Hiirte päritolu: P19 on hiire embrüonaalne kartsinoomi rakuliin. Sellest tulenevalt ei pruugi nende rakkudega tehtud uuringute tulemused olla täielikult ülekantavad inimese bioloogiale ja protsessidele
P19 rakkude uurimisrakendused
P19 rakkudel on tänu nende diferentseerimisvõimele ja tähtsusele arengubioloogia ja tüvirakkude uurimisel mitmeid uurimisrakke. Mõned olulised P19 embrüokartsinoomi rakkude uurimisrakendused on järgmised:
- Rakkude diferentseerumise uuringud: Nagu me teame, suudavad P19 rakud diferentseeruda neuroniteks, mikrogliarakkudeks, silelihasrakkudeks ja kardiomüotsüütideks; seega kasutatakse neid laialdaselt rakkude diferentseerumisprotsesside uurimiseks. Lisaks aitab see uurida neuronaalset ja kardiaalset arengut ja selle aluseks olevaid mehhanisme. 2018. aastal läbi viidud uuringus leiti, et reaktiivsed hapnikuliigid (ROS) suunavad P19 rakkude diferentseerumist konkreetseteks rakutüüpideks ja takistavad teiste indutseerimist [3]. Teises uuringus uuriti retinoiinhappega vahendatud neuraalse diferentseerumise protsessi ja leiti PI3K/Akt/GSK3β signaalitee osalemine [4].
- Arengubioloogia: P19 rakud on hindamatu mudel varase embrüonaalse arengu uurimiseks. Nad aitavad teadlastel mõista keerulisi bioloogilisi protsesse, näiteks kudede moodustumist embrüo arengu ajal. Uuringus kasutati P19 rakke ja uuriti ventrikulaarsete sektaaldefektide (VSD) moodustumisele kaasa aitavaid molekulaarseid tegureid. Tulemustest selgus, et pikk mittekodeeriv RNA SNHG6 aitab kaasa VSD tekkimisele, reguleerides negatiivselt miRNA-101 ja aktiveerides Wnt/β-kateniini rada [5].
- Ravimi testimine: Potentsiaalsete ravimikandidaatide sõelumiseks kasutatakse ka hiire embrüokartsinoomi rakuliini P19. Uuringus kasutati diferentseeritud P19 raku neuroneid ja uuriti sünteetilise L-Dopa ja Mucuna pruriens 'i seemnete veeekstrakti neuroprotektiivset atsetüülkoliinesteraasi inhibeerivat toimet. Tulemused näitasid, et taimeekstrakt näitas paljulubavaid tulemusi võrreldes L-Dopaga [6].
Ostke oma P19 rakuliin täna
P19 rakud: P1919: teaduspublikatsioonid
Selles artikli osas käsitletakse mõningaid huvitavaid teaduspublikatsioone, milles käsitletakse P19 rakke.
See artikkel avaldati ajakirjas Oncology Reports 2017. aastal. Uuringus pakuti välja, et hüpofüüsi suguhormoonid juhivad teratokartsinoomi rakuliinide, sealhulgas P19 rakkude adhesiivsust, proliferatsiooni ja migratsiooni.
Pikk mittekodeeriv RNA uc. 4 mõjutab rakkude diferentseerumist TGF-beeta signaalitee kaudu
Selles ajakirjas Experimental & Molecular Medicine (2018) avaldatud publikatsioonis kasutati P19 rakke ja uuriti pika mittekodeeriva RNA uc.4 funktsiooni. Tulemustest selgus, et uc.4 mõjutab rakkude diferentseerumist TGF-beeta signaalitee moduleerimise kaudu.
See teadusartikkel avaldati 2018. aastal ajakirjas Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Uuringus leiti, et looduslik ajukoeekstrakt ja 3D-rakukultuur võivad kiirendada P19 embrüokartsinoomi rakkude diferentseerumist neuronaalseks rakuks.
See uuring avaldati ajakirjas Journal of Ethnopharmacology 2020. Uuringus pakuti välja, et Cichorium intybus L. leheekstrakt võib indutseerida P19 embrüonaalsete kartsinoomi tüvirakkude diferentseerumist insuliini tootvateks kõhunäärme β-rakkudeks.
See uuring on avaldatud ajakirjas Molecules (2022). Selles uuringus uuriti Mucuna pruriens'i seemneekstrakti neuroprotektiivset ja atsetüülkoliinesteraasi inhibeerivat toimet P19 raku neuronitele.
Ressursid P19 rakuliini jaoks: Protokollid, videod ja muud
Järgnevalt on esitatud mõned ressursid P19 rakkude kohta.
- P19 rakkude neuronaalse diferentseerimise protokoll: See artikkel sisaldab P19 rakkude neuronaalse diferentseerimise protokolli ja muud kasulikku teavet P19 rakkude diferentseerimise kohta.
- P19 rakkude transfektsioon: See link aitab teil õppida P19 rakkude transfektsiooni protokolli.
Järgmine link sisaldab P19 rakkude kasvatamise protokolli.
- P19 rakud: See veebisait sisaldab kogu kasulikku teavet P19 rakuliini kohta, sealhulgas selle kasvatustingimusi, P19 rakkude keskkonda, rakkude jagamist ja palju muud.
P19 rakuliini uurimine: P19: Korduma kippuvad küsimused
Viited
- McBurney, M.W., P19 embrüonaalse kartsinoomi rakud. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 embrüokartsinoomi rakuliin: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey, and G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinoidhape indutseerib P19 rakkude diferentseerumist neuroniteks, mis on seotud PI3K/Akt/GSK3β signaaliteega. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Pikk mittekodeeriv RNA SNHG6 aitab kaasa ventrikulaarse septumi defekti moodustumisele miR-101 negatiivse regulatsiooni ja Wnt/β-kateniini raja aktiveerimise kaudu. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens'i seemne veeekstrakt parandas neuroprotektiivset ja atsetüülkoliinesteraasi inhibeerivat toimet võrreldes sünteetilise L-dopaga. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.