NCI-H1299 rakud: NCI-H1299 kopsuvähirakkude uurimine ja kliinilised tagajärjed
NCI-H1299 on immortaliseeritud inimese mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt immuunonkoloogias, vähi ja ravimite uurimisel. Lisaks on teadlased kasutanud neid rakke ravimite tundlikkuse, aluseks olevate signaaliradade ja kopsuvähiga seotud molekulaarmehhanismide uurimiseks. Lisaks kasutatakse neid rakke viirusinfektsioonide, näiteks SARS-CoV-2, uurimiseks.
NCI-H1299 rakkude üldised omadused ja päritolu
Esimene asi, mida rakuliini kohta teada tuleb, on selle päritolu ja üldised omadused, sest need aitavad teil kavandada selle kasutamist teie teadusuuringutes. See artikli osa aitab teil õppida mõningaid olulisi andmeid NCI-H1299 päritolu ja omaduste kohta. Näiteks, mis on NCI-H1299 kopsuvähirakud? Mis tüüpi rakk on NCI-H1299? Milline on NCI-H1299 rakkude suurus? Mis vahe on A549 ja NCI-H1299 vahel?
- NCI-H1299 rakuliin pärineb 43-aastase valge meespatsiendi kopsu lümfisõlmede metastaasidest.
- Nendel rakkudel on homosügootne p53 geeni osaline deletsioon; seega ei ekspresseeri nad p53 valku. NCI-H1299 p53 valgu ekspressiooni puudumine aitab kaasa H1299 kopsuvähirakkude proliferatiivsele kalduvusele.
- Lisaks p53-le on teatatud, et neil immortaliseeritud rakkudel on NCI-H1299 KRAS-mutatsioon, mis vastutab nende kasvu, proliferatsiooni, migratsiooni ja invasiivsete omaduste eest.
- NCI-H1299 karyotüüp on peaaegu diploidne.
- NCI-H1299 rakkudel on epiteelirakkude sarnane morfoloogia.
- Need rakud on lamedad ja nende paksus on alla 5 µm.
NCI-H1299 ja A549
NCI-H1299 ja A549 on mitteväikesed kopsuvähi rakuliinid. NCI-H1299 rakud on võrreldes A549-ga agressiivsemad ja tundlikumad. Mõlemal on suhteliselt sarnased mutatsioonid, näiteks KRAS. Erinevalt NCI-H1299 rakkudest ekspresseerivad A549 rakud siiski P53 geeni.
Teabe kasvatamine
Rakuliini kultuuri pidamine ei ole lihtne enne, kui te ei tea selle kohta kõiki olulisi andmeid, sealhulgas: Mis on NCI-H1299 kahekordistumisaeg? Milline on NCI-H1299 külvi tihedus? Mis on NCI-H1299 rakukeskkond? Kuidas kasvatada NCI-H1299 rakuliini? See jaotis aitab teil saada vastused kõigile neile küsimustele NCI-H1299 rakuliinide kultiveerimise kohta.
NCI-H1299 rakkude kultiveerimise põhipunktid
|
Kordistumisaeg: |
NCI-H1299 kahekordistumisaeg jääb vahemikku 22-30 tundi. |
|
Kinnine või suspensioonis: |
NCI-H1299 on adherentne rakuliin. |
|
Subkultiveerimise suhe: |
NCI-H1299 rakke subkultiveeritakse soovituslikus vahekorras 1:3 kuni 1:6. Külvamiseks pestakse adherentsed rakud 1x PBS-ga ja inkubeeritakse Accutase passageerimislahusega 8-10 minutit ümbritseva õhu temperatuuril. Eemaldunud rakud lisatakse värskele kasvukeskkonnale ja tsentrifuugitakse. Seejärel resuspendeeritakse rakupellet ja rakud valatakse uutesse kasvukeskkonda sisaldavatesse kolvidesse. |
|
Kasvukeskkond: |
RPM1 1640 on ideaalne NCI-H1299 rakkude kasvukeskkond. Seda on täiendatud 10% veise loote seerumi, 4500 mg/l glükoosi, 2,0 mM L-glutamiini, 1 mM naatriumpüruvaadi, 1500 mg/l NaHCO3 ja 10 mM HEPESiga. Keskkonda tuleks uuendada iga 2 kuni 3 korda nädalas. |
|
Kasvutingimused: |
NCI-H1299 kopsuvähi rakukultuure hoitakse niisutatud inkubaatoris temperatuuril 37 °C ja 5% CO2-ga. |
|
Säilitamine: |
NCI-H1299 rakuliini võib pikaajaliselt säilitada vedela lämmastiku aurufaasis või ülimadala temperatuuriga sügavkülmikutes temperatuuril alla -150°C. |
|
Külmutamisprotsess ja keskkond: |
CM-1 või CM-ACF on NCI-H1299 rakkude külmutuskeskkonnad. Rakkude külmutamisel kasutatakse aeglast külmutamisprotsessi, mis võimaldab rakkude elujõulisuse kaitsmiseks temperatuuri langust vaid 1 kraadi võrra minutis. |
|
Sulatamisprotsess: |
Külmutatud NCI-H1299 rakke liigutatakse kiiresti 37-kraadises eelsoojendatud vesivannis 40-60 sekundit, kuni jääst jääb väike tükike. Sulatatud rakud lisatakse värskele meediumile ja neid võib otse kasvatada uutes kolbides või tsentrifuugida. Esimesel juhul tuleb keskkond asendada 24-tunnise inkubatsiooni järel. Tsentrifuugimine aitab eemaldada külmunud meediumielemente. Seejärel resuspenseeritakse koristatud rakud värskes söötmes ja doseeritakse uude kolbi kasvatamiseks. |
|
Bioturvalisuse tase: |
NCI-H1299 rakukultuuride käitlemiseks on vaja 1. bioohutuse taseme laboratooriumi. |
NCI-H1299 rakuliini ostmine: Kvaliteetsed uurimisvahendid kopsuvähi bioloogia uurimiseks
NCI-H1299 rakkude eelised ja puudused
Nagu teistelgi inimese vähirakuliinidel, on ka NCI-H1299-l mõned eristatavad omadused, mis on seotud konkreetsete plusside ja miinustega. Siinkohal oleme kokku võtnud mõned olulised neist.
Eelised
Mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliini NCI-H1299 peamised eelised on järgmised:
-
In vitro kopsuvähi mudel
NCI-H1299 rakuliinid on välja töötatud kopsukartsinoomi lümfisõlmede metastaasidest ja seega omavad suhteliselt sarnaseid omadusi. Seetõttu võivad need rakud olla in vitro mudeliks kopsuvähi bioloogia, raku- ja molekulaarmehhanismide uurimiseks ning võimalike ravimeetodite sõelumiseks ja testimiseks.
-
Lihtne kasvatada
NCI-H1299 rakke on lihtne kasvatada ja hoida teaduslaboris. Puuduvad keerulised rakukultuurinõuded ja -protseduurid.
-
NCI-H1299 P53 ja NCI-H1299 KRAS mutatsiooniga NCI-H1299
NCI-H1299 rakkudel puudub p53 geeni ekspressioon, mis võimaldab rakkudel jõuliselt paljuneda. Lisaks sellele on neil KRAS-mutatsioon, mis aitab kaasa rakkude kasvule, proliferatsioonile, invasiivsusele ja migratsioonile. Neid asjaolusid arvestades kasutavad teadlased H1299 rakke KRAS- ja P53-mutatsioonidega seotud molekulaarmehhanismide uurimiseks.
Puudused
NCI-H1299 rakkude puudused on järgmised:
-
Koespetsiifilisus
NCI-H1299 pärineb kopsukoes. Seetõttu on selle kohaldatavus enamasti piiratud kopsukartsinoomi uuringutega. See ei pruugi täielikult esindada teiste vähitüüpide heterogeensust ja üldisi omadusi.
NCI-H1299 rakkude uurimisrakendused
NCI-H1299 rakuliini kasutatakse laialdaselt kopsuvähi uurimisel. Siinkohal on mainitud mõned selle rakuliini paljulubavad rakendused.
- Vähi bioloogia: NCI-H1299 rakud on suurepärane uurimisvahend vähi arengu, progresseerumise ning sellega seotud raku- ja molekulaarmehhanismide uurimiseks. Need rakud on varustatud teatavate mutatsioonidega, mis võimaldab teadlastel uurida sellega seotud vähirakkude käitumist, signaaliradu ja geeniekspressiooniprofiile. Mitmetes uuringutes on kopsuvähi bioloogia uurimiseks kasutatud mitteväikerakk-kopsukartsinoomi rakuliini NCI-H1299. Näiteks 2018. aastal läbi viidud uuringus uuriti NCI-H1299 rakkude abil kopsuvähirakkude apoptoosiga seotud signaaliradu. Teadlased leidsid, et PI3K/AKT rada aitab kaasa rakkude proliferatsioonile ja selle inhibeerimine võib põhjustada vähirakkude surma [1]. Samuti uuriti teises uuringus NCI-H1299 epiteliaal-mesenhümaalse ülemineku (EMT) mehhanisme. Selles uuringus pakuti välja, et rakuväline valk SPARC (eritunud happeline ja tsüsteiinirikas valk) aitab kaasa NCI-H1299 EMT-le ja migratsioonile, seega soodustab rakkude kasvajate teket - SPARC-valk toimib TGF-β1-signalisatsiooni vahendajana [2].
- Ravimite avastamine ja skriining: NCI-H1299 on inimese kopsuvähi rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt potentsiaalsete ravimite toksilisuse ja tõhususe hindamiseks. Lisaks kasutavad teadlased seda kasvajavastaste ravimite toimemehhanismi uurimiseks. Uuringutes on neid rakke kasutatud ka võimalike ravimite sihtmärkide ja resistentsusmehhanismide tuvastamiseks. Näiteks Xiao-Yun Sheni ja kolleegide poolt läbi viidud uuringus uuriti loodusliku ühendi bruceine D (BD) vähivastast potentsiaali. Tulemustest selgus, et BD takistab märkimisväärselt NCI-H1299 rakkude proliferatsiooni, invasiivsust ja migratsiooni. Seetõttu võib seda pidada potentsiaalseks adjuvantraviks mitteväikerakk-kopsukartsinoomi raviks [3]. Samamoodi hinnati uuringus ksantohumooli tsütotoksilist toimet üksi ja kombinatsioonis tsisplatiini keemiaravimiga NCI-H1299 kopsuvähirakkudele [4].
NCI-H1299 rakke sisaldav teaduspublikatsioon
Mõned olulised ja enim tsiteeritud teaduspublikatsioonid NCI-H1299 kopsukartsinoomi rakuliini kohta on siin.
See artikkel on avaldatud ajakirjas Human and Experimental Toxicology (2021). Uuringus pakuti välja, et indool-3-karbinool indutseerib H1299 rakkudes apoptoosi reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) taseme tõstmise kaudu.
See uuring avaldati 2018. aastal ajakirjas Cellular Physiology and Biochemistry. Uurimistulemused näitasid, et kofeiinhappe ja paklitakseeli kombinatsioon avaldab mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliinis NCI-H1299 sünergistlikku vähivastast toimet.
See teadusartikkel on avaldatud ajakirjas Molecular Medicine Reports (2018). Uuringus hinnati triterpenoidse saponiini tubeimosiid-1 kasvajavastast toimet ja selle aluseks olevaid mehhanisme NCI-H1299 rakuliinis.
Pristimeriin indutseerib apoptoosi ja pärsib proliferatsiooni, migratsiooni H1299 kopsuvähirakkudes
Selles ajakirjas Journal of Cancer (2020) avaldatud artiklis pakuti välja, et looduslik ühend Pristimerin pärsib NCI-H1299 rakkude proliferatsiooni ja migratsiooni.
Inimese kopsu adenokartsinoomi H1299 rakkude VIPR1 geeni regulatsiooni mehhanism
See uuring ajakirjas Medical Oncology (2019) uuris VIPR1 geeni üleekspressiooni võimalikku mõju NCI-H1299 adenokartsinoomi rakuliinile.
NCI-H1299 rakuliini ressursid: H12129 H129: protokollid, videod ja muud
Siin on mõned NCI-H1299 rakuliiniga seotud veebiressursid.
- NCI-H1299 transfektsioon: See video selgitab NCI-H1299 rakuliini transientse transfektsiooni protokolli.
- Adherentse rakuliini subkultuurimine: See video aitab teil õppida adherentsete rakuliinide üldist subkultiveerimisprotseduuri.
Järgmine link sisaldab teavet rakukultuuri kohta NCI-H1299 rakkude puhul.
- NCI-H1299 rakuliin: See link aitab teil tutvuda NCI-H1299 rakkude passiveerimise ja transfektsiooni protokolliga.
Korduma kippuvad küsimused NCI-H1299 rakuliini kohta
Viited
- Gu, J., et al., Uuring EGCG indutseeritud apoptoosi kohta kopsuvähirakkudes PI3K/Akt signaalitee inhibeerimise teel. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC toimib TGF-β1 vahendajana epiteliaalse-mesenhüümilise ülemineku edendamisel A549 ja H1299 kopsuvähirakkudes. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., Uurimus brutsiin D mehhanismi kohta mitteväikerakk-kopsuvähi H1299 rakkude ravis. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Xanthohumoli ja selle kombinatsiooni tsisplatiiniga tsütotoksiline toime inimese metastaatilise kopsuvähi H1299 rakkudele. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.