Hep2 rakud ja nende roll kõhunäärmevähi uurimisel
Hep 2 rakud on keskne in vitro mudel, mida kasutatakse laialdaselt biomeditsiiniliste uuringute valdkondades, näiteks reumatoloogias, vähiuuringutes ja immunoloogias. Kuna need inimese rakud pärinevad kõri kartsinoomist, on nad olnud olulised kõri neoplasmade päritolukoe ja spetsiifiliste tunnuste selgitamisel. Nende tähtsus on hästi tunnustatud translatsioonilises vähiuurimises, kus nad on oluliselt kaasa aidanud meie arusaamisele kõriosa olemusest ja vähi päritolust, tähistades olulist kohalolekut kõriosa vähiuuringute publikatsioonides [1].
Hep 2 rakkude päritolu ja üldised omadused
Rakuliini päritolu ja üldised omadused määravad selle rakendatavuse teadusuuringutes. See jaotis aitab teil teada saada Hep 2 rakkude päritolu ja mõningaid olulisi omadusi. Näiteks saate teada: Mis on HEp-2 rakuliin? Mis on Hep 2 rakkude päritolu? Ja milline on Hep 2 morfoloogia?
- Hep 2 on surematu inimese epiteelirakuliin, mida H. W. Toolan kirjeldas esmakordselt 1954. aastal kõri kartsinoomi rakkudena. Viimasel ajal on aga teatatud, et rakuliin Hep 2 koosneb emakakaela adenokartsinoomi rakkudest ja pärineb Hela rakuliini saastumisest [2].
- Hep 2 rakud sisaldavad Hela marker-kromosoomi ja on positiivsed keratiini ja inimese papilloomiviiruse DNA järjestuse suhtes, nagu on kinnitatud vastavalt immunoperoksidaasivärvimise ja PCR abil.
- Hela rakuliini derivaat Hep 2 omab epiteelilaadset morfoloogiat.
- Hep 2 rakuliinil on nii struktuursed kui ka numbrilised kromosoomide hõõrdumised, millel on peaaegu triploidne karüotüüp [3].
Hep 2 rakuliin: Kultiveerimisega seotud teave
Enne rakuliiniga töötamist peame teadma järgmisi põhipunkte selle kultiveerimiseks. See teave võib olla kasulik rakuliini tõhusaks kultiveerimiseks ja hooldamiseks. Te peaksite teadma: Milline on HEp-2 rakkude kahekordistumisaeg? Kas Hep-2 rakud on adherentsed? Milline on Hep 2 rakkude külvitihedus?
|
Populatsiooni kahekordistumisaeg: |
Hep 2 rakkude kahekordistumisaeg on ligikaudu 40 tundi. |
|
Kinni või suspensioonis: |
Hep 2 rakud on kleepuvad ja kasvavad monokihina. |
|
Külvikutihedus: |
Hep 2 rakkude kasvatamiseks on ideaalne külvitihedus 1 x104 rakku/cm2. Külvamiseks loputatakse adherentsed Hep 2 rakud 1 x PBS lahusega, millele järgneb inkubeerimine Accutase dissotsiatsioonilahusega. Pärast 8-10-minutilist inkubatsiooni ümbritseval temperatuuril resuspenseeritakse rakud meediumis ja tsentrifuugitakse. Seejärel doseeritakse kogutud rakud värskesse söötmesse ja valatakse kasvatamiseks uutesse kolvidesse. |
|
Kasvukeskkond: |
Hep 2 rakkude kasvatamiseks kasutatakse EMEMi või Eagle'i minimaalselt vajalikku keskkonda. See keskkond on täiendatud 10% FBS, 1,0 g/l glükoosi, 2,2 g/l NaHCO3, 2,0 mM L-glutamiini, 1% NEAA ja 1 mM naatriumpüruvaadi sisaldusega, et rakkude kasv oleks optimaalne. Keskkonda tuleks uuendada 2-3 korda nädalas. |
|
Kasvutingimused: |
Nagu teisi imetajate rakuliine, kasvatatakse ka Hep 2 rakuliini 37 °C temperatuuril ja pideva 5% CO2-ga niisutatud inkubaatoris. |
|
Säilitamine: |
Hep 2 rakke võib pikaajaliseks säilitamiseks hoida ülimadalal temperatuuril (alla -150 °C) või vedelas lämmastiku aurufaasis. |
|
Külmutamisprotsess ja keskkond: |
Hep 2 rakkude külmutamiseks on soovitatav kasutada CM-1 või CM-ACF. Rakke tuleks külmutada aeglase külmutamisprotsessi abil, mis võimaldab temperatuuri järkjärgulist langust 1 °C võrra ja kaitseb rakkude elujõulisust. |
|
Sulatamisprotsess: |
Külmutatud rakkude viaali sulatatakse kiiresti37 °C juuresvesivannis segades, kuni alles jääb väike jääklomp. Seejärel lisatakse rakud värskesse keskkonda ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonna komponendid. Hiljem resuspenseeritakse rakupellet meediumis ja rakud doseeritakse kultuurkolvidesse. Rakud peavad adhesiivsuseks puhkama peaaegu 24 tundi. |
|
Bioturvalisuse tase |
Hep 2 rakukultuuride käitlemiseks ja hooldamiseks soovitatakse 1. bioloogilise ohutuse taseme laboratooriumi. |
Hep 2 rakkude eelised ja piirangud
Peaaegu kõikidel rakuliinidel on unikaalne kombinatsioon eeliseid ja piiranguid, mis aitavad kaasa nende kasutamisele teadusuuringute valdkonnas. Käesolevas jaotises kirjeldatakse mõningaid peamisi Hep 2 rakuliiniga seotud eeliseid ja puudusi.
Eelised
Hep 2 rakuliini peamised eelised on järgmised:
- Inimese päritolu: Hep 2 on saadud inimese epiteelirakkudest, mis teeb sellest väärtusliku in vitro mudeli inimese haiguste ja viirusinfektsioonide uurimiseks
- ANA tuvastamine: Hep 2 rakuliinil on natiivne valgumassiiv, mis sisaldab arvukaid antigeene, mistõttu on see suurepärane substraat antituumaarsete antikehade (ANA) avastamiseks. See omadus võimaldab spetsiifilist ja väga tundlikku ANA skriiningut seerumis, mis teeb sellest olulise diagnostilise vahendi sidekoe haiguste tuvastamiseks
Piirangud
- Kromosoomi kõrvalekalded: Hep 2 rakkudel esineb mitmeid numbrilisi ja struktuurilisi kromosoomianomaaliaid. Need kõrvalekalded võivad mõjutada rakkude käitumist ja piirata nende rakendatavust teatavates laboratoorsetes katsetes
- Tumorigeensus: Hep 2, mis on inimese epiteelirakuliin, võib omada geneetilisi kõrvalekaldeid, mis epiteelirakkudel tavaliselt puuduvad. Sellest tulenevalt võib Hep 2 rakkude kasutamine olla piiratud konkreetsetes uuringutes, mis keskenduvad rakkude normaalsele füsioloogiale.
Hep 2 rakuliini laiendamine biomeditsiinilistes uuringutes
Hep 2 rakuliin paistab silma kui eeskujulik mudel paljude rakenduste jaoks biomeditsiinilistes uuringutes. Need rakud on tuntud oma mitmekülgsuse poolest ja täidavad kriitilisi rolle in vitro katsetes, alates retseptorite analüüsist kuni keeruliste haiguste uurimiseni.
Kasvajate tekkemehhanismide ja terapeutiliste sihtmärkide uurimine Hep 2 rakkude abil
Hep 2 rakud, mis on tuumorigeensed, on vähibioloogia keerukuse uurimisel keskse tähtsusega. Nad annavad ülevaate vähi signaaliradadest, mehhanistilistest uuringutest ja on peamine tugisammas vähivastaste ravimite sõelumisel ja hindamisel. Näiteks kasutati Hep 2 põhjalikus uuringus miRNA-33a mõju piiritlemiseks vähirakkude proliferatsioonile. Tulemused valgustasid miRNA-33a antiproliferatiivset mõju selle koostoime kaudu tuntud onkogeeni PIM1-ga, mis viitab uuele terapeutilisele sihtmärgile [4]. Teisel juhul kasutati Hep 2 Marsdenia tenacissima tsinkoksiidi nanoosakeste terapeutilise potentsiaali hindamisel, tuues esile nende antiproliferatiivse ja apoptootilise toime [5].
Viroloogiauuringute edendamine Hep 2 rakkude abil
Hep 2 rakkude tundlikkus erinevate inimviiruste suhtes muudab need hindamatuks ressursiks viroloogilistes uuringutes. Neid on tõhusalt kasutatud SARS-CoV-2 viiruse geenide ekspressioonis, et avada keerulist vastastikust mõju viiruse ja peremeesraku mehhanismide vahel [6]. See rakendus on eriti oluline praegusel ajastul, kus viirusinfektsioonide, nagu COVID-19, mõistmine ja nende vastu võitlemine on ülemaailmne prioriteet.
Raku funktsioonide dešifreerimine: Geenimanipulatsioon Hep 2 rakkudes
Hep 2 rakuliini kohanemisvõime geneetilise manipulatsiooni suhtes rõhutab selle kasulikkust mehhanistilistes uuringutes. Teadlased kasutavad seda omadust geeniekspressiooni muutmiseks ja konkreetsete geenide rolli selgitamiseks rakufunktsioonides. Üks märkimisväärne uuring hõlmas RNA-siduva valgu RBM6 üleekspressiooni Hep 2 rakkudes, mis hõlbustas selle kasvajasupressori potentsiaali uurimist, andes väärtuslikke teadmisi vähi molekulaarsete aluste kohta [7].
Haiguste diagnoosimise parandamine Hep 2 rakuliini rakenduste kaudu
Lisaks nendele uurimisvaldkondadele on Hep 2 rakud tuntud oma diagnostiliste võimete poolest, eriti ANA-de avastamisel, mis on kriitilise tähtsusega autoimmuunhaiguste, näiteks süsteemse erütematoosse luupuse diagnoosimisel. Täpsus, millega Hep 2 rakud suudavad ANAsid esitada, toetab diagnoosimist ja sihipärase ravi väljatöötamist, suurendades meie arusaamist autoimmuunhaigustest ja parandades patsientide ravi.
Nende mitmekesiste rakenduste kaudu on Hep 2 rakud oluliselt kaasa aidanud edusammudele translatsioonilistes vähiuuringutes, viirusinfektsioonide uurimisel ja rakumehhanismide uurimisel. Nende panus kliiniliselt oluliste andmete kogumisse on hindamatu, mis kinnitab nende asendamatut rolli nii laboris kui ka kliinikus. Teadusuuringute jätkuvas arengus jääb Hep 2 rakuliin kindlasti esirinda, aidates kaasa uute ravimeetodite avastamisele ja laiendades meie teadmisi inimese tervise ja haiguste kohta.
Kindlustage oma HEp-2 rakuliin täna
Hep 2 rakud: Hepa Hepa: Teadusuuringute publikatsioonid
Järgnevalt on esitatud mõned huvitavad ja enim tsiteeritud teadusartiklid Hep 2 rakkude kohta.
- Tsinkoksiidi nanoosakeste süntees Marsdenia tenacissima'st pärsib rakkude proliferatsiooni ja indutseerib apoptoosi kõhunäärmevähirakkudes (Hep-2)
Selles ajakirjas Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology (2019) avaldatud artiklis uuriti biosünteesitud Marsdenia tenacissima tsinkoksiidi nanoosakeste vähivastast potentsiaali rakuliinis Hep 2. - Bioformuleeritud hesperidiiniga koormatud PLGA nanoosakesed toimivad vähirakkude mitokondriaalse vahendatud intrinsilise apoptootilise raja vastu
See artikkel avaldati ajakirjas Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials 2021. aastal. Selles uuringus uuriti biovormitud hesperidiiniga koormatud polü(piim-ko-glükoolhappe) (PLGA) nanoosakeste vähivastaseid omadusi Hep 2 rakkudes. - Lophatherum gracile'i etanooliekstrakti viirusevastane aktiivsus respiratoorse süntsütsiaalviiruse infektsiooni vastu
Selles ajakirjas Journal of Ethnopharmacology 2019 avaldatud väljaandes kasutati Hep 2 rakke, et uurida hingamisteede süntsütsiaalviiruse infektsiooni ja skriinida selle vastu viirusevastaseid ravimeid. Uuringus teatati ravimtaime, st Lophatherum gracile etanooliekstrakti paljutõotavast viirusevastasest potentsiaalist hingamisteede süntsütsiaalviiruse infektsiooni vastu. - Neljast aromaatsest taimest saadud vee ekstraktide hindamine nende aktiivsuse suhtes Candida albicans'i adhesiivsuse suhtes inimese HEp-2 epiteelirakkudele
See uurimus on avaldatud ajakirjas Gene Reports (2020). Selles uuringus uuriti nelja aromaatse taime veeekstrakti inhibeerivat potentsiaali Candida albicans'i adhesiooni vastu inimese Hep-2 epiteelirakkudele. - Wnt1-indutseeritav signaalvalk 1 reguleerib kõhukelmekartsinoomi glükolüüsi ja kemoresistentsust YAP1/TEAD1/GLUT1 raja kaudu
See uuring avaldati ajakirjas Journal of Cellular Physiology 2019. aastal. Uuringus teatatakse, et Wnt1-indutseeritav signaalvalk 1 (WISP1) interakteerub YAP1/TEAD1/GLUT1 rajaga ja reguleerib glükoosi metabolismi ja kemoresistentsust Hep 2 rakuliinis.
Hep2 rakuliini ressursid: Protokollid, videod ja muud
Hep 2 on tuntud rakuliin. Hep 2 rakuliini kohta on mitmeid kättesaadavaid ressursse.
- Hep2 rakuliini subkultiveerimine: See video on samm-sammuline juhend Hep 2 rakkude subkultiveerimiseks.
- Hep 2 rakkude ANA sõelumine: See video selgitab tuumavastaste antikehade (ANA) sõelumist Hep 2 rakuliini abil.
- Hep 2 kultiveerimine: See link sisaldab põhilist teavet rakukultuuri kohta Hep 2 rakkude kohta. See hõlmab rakkude jagamist, rakkude külmutamist ja sulatamist.
Korduma kippuvad küsimused HEp-2 rakkude kohta biomeditsiinilistes uuringutes
Viited
- Fusi, M. ja S. Dotti, HEp-2 rakuliini kohandamine täiesti loomavaba kultuurisüsteemiga ja rakkude kasvu reaalajas analüüs. Biotechniques, 2021. 70(6): p. 319-326.
- Gorphe, P., Põhjalik ülevaade Hep-2 rakuliinist kõhunäärmevähi translatiivsetes uuringutes. Am J Cancer Res, 2019. 9(4): p. 644-649.
- Wang, M., et al., Vähiga seotud fibroblastid inimese HEp-2 kehtestatud kõri ksenotransplantaadi kasvajas ei ole saadud vähirakkudest epiteliaalse-mesenhüümilise ülemineku kaudu, fenotüübiliselt aktiveeritud, kuid karyotüübiliselt normaalsed. PLoS One, 2015. 10(2): p. e0117405.
- Karatas, O.F., miR-33a antiproliferatiivne potentsiaal kõhunäärmevähi Hep-2 rakkudes PIM1 sihtmärgi kaudu. Head Neck, 2018. 40(11): p. 2455-2461.
- Wang, Y., et al., Tsinkoksiidi nanoosakeste süntees Marsdenia tenacissima'st pärsib rakkude proliferatsiooni ja indutseerib apoptoosi kõhunäärmevähi rakkudes (Hep-2). Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 2019. 201: p. 111624.
- Zhang, J., et al., SARS-CoV-2 valkude subtsellulaarse lokaliseerimise süsteemne ja molekulaarne uuring. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): p. 269.
- Wang, Q., et al., RNA-siduva valgu RBM6 kui kasvajasupressorgeen pärsib kasvu ja progresseerumist larüngokartsinoomil. Gene, 2019. 697: p. 26-34.