HL-60 rakud: ägeda müeloidse leukeemia uurimise põhialused
HL-60 on surematu inimese leukeemiarakkude liin. Seda kasutatakse laialdaselt vähibioloogia uurimiseks ja vähivastaste ravimite tõhususe uurimiseks. Lisaks saab seda kasutada ka leukeemiarakkude proliferatsiooni ja diferentseerumisega seotud erinevate raku- ja molekulaarsete mehhanismide mõistmiseks.
- Kasvukeskkond
- Vaata toote lehekülge
- Kahekordistumisaeg
- Vaata toote lehekülge
- Kasvutüüp
- Adherent
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli HL-60
- HL-60 rakuliin: päritolu ja üldine teave
- HL-60 rakukultuuri teave
- HL-60 rakud: eelised ja puudused
- HL-60 rakuliini rakendused teadustöös: vähist immunoloogiani ja veelgi kaugemale
- HL-60 rakuliin teie teadustööks
- HL-60 rakud: teaduslikud publikatsioonid
- HL-60 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
- HL-60 rakuliin: olulised KKK-d teadlastele
- Viited
- Korduma kippuvad küsimused
HL-60 rakuliin: päritolu ja üldine teave
HL-60 rakuliin on hematoloogilises uurimistöös oluline mudel, mis pakub põhjalikke teadmisi ägeda promüelotsütaarse leukeemia olemuse ja ravi kohta. Käesolevas blogipostituses käsitletakse HL-60 rakuliini päritolu ja eripärasid, valgustades selle olulist rolli meditsiinilises uurimistöös ja ravi arendamisel.
HL-60 loodi esmakordselt 36-aastase valge naise leukeemiarakkudest, kellel oli diagnoositud äge promüelotsütaarne leukeemia. Seda teedrajavat tööd tegi S.J. Collins koos oma meeskonnaga, mis tähistas olulist läbimurret, kuna HL-60 oli esimene müeloidse leukeemia rakuliin, mida õnnestus edukalt isoleerida ja suspensioonis kasvatada. See saavutus on avanud arvukad uurimisvõimalused leukeemia ja teiste sellega seotud haiguste uurimisel. Füüsiliste omaduste poolest on HL-60 rakkudel lümfoblastiline morfoloogia ja need kasvavad suspensioonis, olles kuju poolest ümmargused. Nende rakkude suurus varieerub, läbimõõduga 9–25 μm, mis peegeldab nende heterogeensust. Geenitasandil on HL-60 rakuliin valdavalt pseudodiploidne, modaalse kromosoomide arvuga 43. Huvitaval kombel näitab väike osa (6,2%) rakkudest 2S-komponenti, mis lisab nende geneetilisele koosseisule veel ühe keerukuse taseme [1].
HL-60 rakkude nende põhiliste aspektide mõistmine mitte ainult ei täienda meie teadmisi leukeemiast raku tasandil, vaid toetab ka käimasolevaid teadusuuringuid uute ravimeetodite avastamiseks. Järgmistes jaotistes uurime, kuidas HL-60 rakuliini unikaalsed omadused on aidanud kaasa olulistele edusammudele meditsiinilistes uuringutes.
Teave HL-60 rakuliini kohta
HL-60 rakkude kasvatamine on lihtne ja kerge. Käesolevas osas tutvustatakse põhitõdesid, nagu näiteks: milline on HL-60 rakuliini kahekordistumisaeg? Kas HL-60 on adhesiivne või suspensioonikultuur? Milline on HL-60 rakuliini külvitihedus? Millist keskkonda kasutatakse HL-60 kasvatamiseks?
Kahekordistumisaeg:
HL-60 rakkude kahekordistumisaeg on umbes 36–48 tundi.
Adherentne või suspensioon:
HL-60 rakud kasvavad suspensioonikultuuridena.
Istutustihedus:
Neid rakke külvatakse subkultuuri puhul tihedusega 1 x 106 rakku/ml ja uue kultuuri alustamisel tihedusega 2 x 105 rakku/ml.
Kasvukeskkond:
HL-60 rakkude kasvatamiseks kasutatakse RPMI 1640 kasvukeskkonda, millele on lisatud 10 % FBS ja 2,5 mM L-glutamiini. Keskkonda tuleks uuendada 2–3 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
HL-60 rakke kasvatatakse niisutatud inkubaatoris temperatuuril 37 °C ja 5 % CO2 sisaldusega.
Säilitamine:
HL-60 rakke säilitatakse temperatuuril alla -150 °C või vedela lämmastiku aurufaasis, et säilitada maksimaalne arv eluvõimelisi rakke.
Külmutuskeskkond ja protsess:
HL-60 rakkude külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF külmutuskeskkonda. HL-60 rakkude külmutamiseks eelistatakse aeglast külmutusmeetodit.
Sulatusprotsess:
Külmutatud HL-60 rakkude viaali segatakse kiiresti 37 °C temperatuurile seatud veevannis. Seejärel tsentrifuugitakse rakke, et eemaldada külmutuskeskkond. Lisatakse uus kasvukeskkond ja rakud suspendeeritakse uuesti, et need kasvamiseks kolbi jaotada.
Bioloogilise ohutuse tase:
HL-60 kultuuride käitlemiseks soovitatakse bioloogilise ohutuse taset 1.
HL-60 rakud: eelised ja puudused
Enne mis tahes rakuliiniga töötama hakkamist võiksite tutvuda selle eeliste ja puudustega. Käesolevas artikli osas käsitletakse mõningaid HL-60 rakkude kasutamise plusse ja miinuseid.
Eelised
HL-60 rakuliini mõned olulisemad eelised on järgmised:
- Mitmekülgsus: HL-60 rakud suudavad sobivates kasvutingimustes diferentseeruda mitmesugusteks rakutüüpideks, sealhulgas monotsüütideks, makrofaagideks ja granülotsüütideks. See teeb need kasulikuks rakkude diferentseerumise ja muude rakuprotsesside uurimisel.
- Lihtne kasvatada: HL-60 rakke on lihtne kasvatada ja hoida suspensioonikultuurides, mis teeb neist mugava vahendi mitmete rakuprotsesside uurimiseks.
- Leukemia in vitro mudel: need rakud on saadud ägeda müeloidse leukeemiaga patsiendilt ja seetõttu on neil haigusega sarnased geneetilised ja molekulaarsed omadused.
Puudused
HL-60 rakuliini puudused on järgmised:
- Piiratud diferentseerumisvõime: HL-60 võib stimuleerimisel diferentseeruda mõningateks müeloidseks liinideks, kuid nende diferentseerumisvõime on piiratud võrreldes primaarrakkudega.
HL-60 rakuliini rakendused teadustöös: vähist immunoloogiani ja veelgi kaugemale
Ägeda promüelotsütaarse leukeemiaga patsiendilt saadud HL-60 rakuliin on oma mitmekülgsuse ja lihtsa kasvatamise tõttu muutunud meditsiinilise teadustöö nurgakiviks. Need hooldusvaesed kultuurid on olulised mitmesugustes teadusuuringutes ning meie eesmärk on uurida mõningaid olulisemaid neist, kasutades laia valikut uurimisalaseid märksõnu, et anda terviklik ülevaade.
Vähktõve uurimine
Onkoloogia valdkonnas on HL-60 rakuliin olnud oluline vahend vähirakkude signaalimise keerukuste lahtimõtestamisel, edendades meie arusaama onkogeenide ekspressioonist ja soodustades uute ravisihte avastamist. See rakuliin moodustab osa leukeemia rakuliinide paneelist, mida kasutatakse uute kemoteraapiapreparaatide sõelumiseks. Üks silmapaistev näide on HL-60 rakkude kasutamine mereorganismidest ekstraheeritud ühendite antileukemiliste omaduste kindlakstegemiseks, mis on näidanud nii antiproliferatiivseid kui ka proapoptootilisi toimeid [2]. Lisaks on see rakuliin hõlbustanud selliste oluliste signaaliteede nagu JAK/STAT uurimist ja nende mõju leukemiarakkude proliferatsioonile, samuti selliste bioaktiivsete ühendite nagu timokinooni terapeutilise potentsiaali hindamist [3].
Immunoloogia
HL-60 rakud on tugev in vitro süsteem mitmesuguste immuunvastuste uurimiseks, sealhulgas kemotaksise keerulise protsessi ja peamiste immuunivahendajate ekspressiooni reguleerimise uurimiseks. Need rakud võivad diferentseeruda makrofaagidele ja neutrofiilidele sarnasteks müeloidrakkudeks, toimides mitmekülgse mudelina põletikuliste signaaliteede uurimisel. Näiteks kasutati HL-60-st saadud makrofaagilaadseid rakke, et uurida Brassica perekonna fütokemikaalide põletikuvastast potentsiaali [4]. Teises uuringus võimaldas HL-60 rakkude diferentseerumine neutrofiilidele sarnasteks rakkudeks teadlastel identifitseerida geene, mis on olulised rakkude diferentseerumise ja sellega seotud immuunfunktsioonide jaoks [5].
Ravimite avastamine
HL-60 müeloidse diferentseerumise võimet on kasutatud ka ravimite avastamisel, eriti selliste kandidaatide identifitseerimisel, mis võiksid potentsiaalselt moduleerida diferentseerumisrada, mis on leukemiaravis otsustava tähtsusega. Seda illustreerivad uuringud, kus on kasutatud HL-60 rakuliini looduslike toodete vähivastase potentsiaali hindamiseks [6].
Lisaks kasutatakse HL-60 rakuliini müeloidse rakuliini bioloogia erinevate aspektide uurimiseks, näiteks selleks, et mõista, kuidas ravi selliste ainetega nagu retinoehape võib viia monotsüütide diferentseerumiseni või kuidas need rakud jäljendavad primaarseid neutrofiile ekstratsellulaarsete lõksude tekitamisel. Selle mudeli kasutamine hematoloogiliste pahaloomuliste kasvajate molekulaarsete protsesside selgitamisel on veelgi laienenud tänu selle rakendamisele mutatsioonide rakupaneeli uuringutes, eriti leukeemia p53 hotspot-analüüsi kontekstis.
Neile, kes uurivad rakkude mehaanikat, HL-60 kahekordistumisaega ja nende reaktsiooni elektroporatsioonile mikrofluidikanalites, pakub see rakuliin usaldusväärset uurimisplatvormi.
HL-60 rakuliin teie teadustööks
HL-60 rakud: teadusartiklid
HL-60 rakkude kohta on avaldatud mitmeid teadustöid. Siin on toodud mõned märkimisväärsemad näited:
Selles uurimistöös väidetakse, et ühendil stigmast-5-en-3-ool on kasvajavastane toime HL-60 leukeemiarakkude ja MCF7 rinnavähi rakkude suhtes.
Käesolevas uuringus kirjeldatakse JAK/STAT signaalimise rolli HL-60 rakkude proliferatsioonis. Lisaks uurivad teadlased tümoquinoni ühendi terapeutilist potentsiaali, kasutades selleks kõnealust leukeemiarakuliini. Ühend pärsib rakkude proliferatsiooni ja indutseerib rakkude surma, taastades JAK/STAT kaskaadi negatiivsete regulaatorite ekspressiooni.
Selles uuringus kasutati HL-60 rakke, et tuletada makrofaagilaadne rakumudel Brassica taimeühendite põletikuvastase toime uurimiseks.
Ajakirjas International Immunopharmacology avaldatud uuringus arendati HL-60 rakuliinist dimetüülsulfoksiidi abil neutrofiilide imiteerija. Uuringus täheldati, et ERK-geen on seotud nende rakkude diferentseerumisega.
Käesolevas uurimistöös uuritakse taimsetest polüfenoolidest, st gallushappest ja ellagiinhappest koosnevate ühendite vähivastast potentsiaali ravimile tundlike ja ravimresistentsete HL-60 leukeemiarakkude suhtes.
HL-60 rakuliin: protokollid, videod ja muud materjalid
HL-60 rakuliini kohta on saadaval mitmed veebipõhised õppematerjalid. Käesolevas jaotises käsitletakse mõningaid materjale, mis kirjeldavad selle rakuliini kasvatamist ja transfektsiooni.
Rakukultuuri protokollid
HL-60 rakkude kasvatamise meetodeid kirjeldavad allikad on järgmised:
- HL-60 paljundamine: See dokument sisaldab teavet HL-60 rakkude subkultiveerimise kohta.
- HL-60 rakuliin: See veebisait sisaldab põhilist teavet HL-60 rakkude ja protokollide kohta, sealhulgas rakkude kasvatamise, külmutamise ja sulatamise kohta.
Transfektsiooniprotokollid
Siin on mõned allikad, mis kirjeldavad HL-60 rakkude jaoks valitud transfektsioonimeetodeid.
- HL-60 rakkude transfektsioon: See link sisaldab üksikasjalikku transfektsiooniprotseduuri HL-60 leukeemiarakkude jaoks.
- HL-60 rakkude ajutine transfektsioon: See dokument sisaldab kasulikku teavet rakuliini kohta ja annab üksikasjaliku protokolli HL-60 rakkude ajutise transfektsiooni kohta.
HL-60 rakuliiniga seotud videod
HL-60 rakkude kohta on väga vähe videomaterjale.
- HL-60 rakkude passaažimine: Selles videos selgitatakse HL-60 rakkude subkultiveerimise protokolli.
Loodame, et see artikkel annab teile põhiteavet HL-60 rakuliini kasvatamise ja hooldamise kohta. Lisaks võib see täiendada teie teadmisi nende leukeemiarakkude kasutamise eeliste kohta teadustöös. Kui kavatsete seda rakuliini kasutada, tellige see meilt.
HL-60 rakuliin: olulised küsimused ja vastused teadlastele
HL-60 rakuliin on promüelotsütaarse leukeemia rakuliin, mis on saadud ägeda promüelotsütaarse leukeemiaga patsiendilt. Seda rakuliini kasutatakse laialdaselt teadustöös müeloidrakkude diferentseerumise ja onkogeenide ekspressiooni uurimiseks.
Retinoehape indutseerib HL-60 rakuliinis diferentseerumist, sundides rakke küpsema granülotsüütidele sarnasteks rakkudeks. See protsess on äärmiselt oluline müeloidse diferentseerumise aluseks olevate mehhanismide uurimisel.
Seerum on vereloome rakkude kasvukeskkonna oluline komponent, mis varustab HL-60 rakke kultuuris paljunemiseks ja säilitamiseks vajalike oluliste kasvufaktorite ja toitainetega.
Jah, HL-60 rakuliin on võimeline kemotaksiseks, mis tähendab rakkude liikumist keemiliste ärritajate mõjul. Seetõttu sobivad need hästi kemotaksise katsete läbiviimiseks ja rakkude rändamise uurimiseks.
Rakuliin HL60, milles esineb onkogeenide ekspressioon, on mudelisüsteemiks, mille abil uuritakse onkogeenide ekspressiooni regulatsiooni ja nende rolli leukeemogeneesis.
HL-60 rakuliin on rakubioloogia uuringutes hindamatu väärtusega, eriti rakutsükli, rakkude diferentseerumisprotsesside ja leukeemiani viivate molekulaarsete protsesside uurimisel.
Leukeemiarakkude liinide paneelid võimaldavad läbi viia erinevate leukeemiarakkude liinide võrdlevaid uuringuid, sealhulgas nende geneetilise koostise, mutatsiooniprofiilide, ravimireaktsiooni ning leukeemogeneesis osalevate molekulaarsete signaaliteede, nagu näiteks MAPK-signaalitee, uurimist.
Analüüsi- ja päritolusertifikaate saab tavaliselt alla laadida või tellida HL-60 rakuliini pakkuvalt tarnijalt või andmebaasist, mis tagab, et teadlased saavad oma uuringuteks autentsed ja saasteainetest vabad rakud.
HL-60 rakuliini on võimalik diferentseerida, et saavutada primaarsete neutrofiilidega sarnased omadused, sealhulgas võime moodustada ekstratsellulaarseid lõkse, mis võimaldab teadlastel kasutada neid asendusmudelina neutrofiilide käitumise ja funktsiooni uurimiseks.
HL-60 rakke kasutatakse in vitro mudelina ägeda promüelotsütaarse leukeemia, müeloidse rakuliini bioloogia ning erinevate ühendite mõju diferentseerumisele ja proliferatsioonile uurimiseks. Neid kasutatakse ka katsetes, milles uuritakse rakulisi reaktsioone, nagu kemotaksis, onkogeenide ekspressioon ja mutatsioonide mõju rakulistele protsessidele.
Lühend „HL-60” tähistab „Human Leukemia 60”. See viitab 60. rakuliinile, mis loodi selle väljatöötamise ajal leukeemiapatsientidelt. Lühend „HL” viitab sellele, et tegemist on inimese leukeemiarakkudega.
Optimaalsetes kasvutingimustes on HL-60 rakkude kahekordistumisaeg umbes 36–48 tundi. See võib aga varieeruda sõltuvalt kasvatustingimustest ja rakkude passaaži arvust.
Kui HL-60 rakke töödeldakse forbol-12-miristaat-13-atsetaadiga (PMA), diferentseeruvad need tavaliselt makrofaagidele või monotsüütidele sarnanevaks rakutüübiks. Seda diferentseerumist uuritakse monotsüütide diferentseerumisradade uurimise ja müeloidrakkude diferentseerumise mehhanismide mõistmise raames.
Viited
- Fleck, R., S. Romero-Steiner ja M. Nahm, HL-60 rakuliini kasutamine pneumokokkide antikehade opsoniseerimisvõime mõõtmiseks. Clinical and Vaccine Immunology, 2005. 12(1): lk 19–27.
- Fernando, I.S. jt, Dendronephthya gigantea'st saadud stigmast-5-en-3-ooli apoptootilised ja antiproliferatiivsed mõjud inimese leukeemia HL-60 ja inimese rinnavähi MCF-7 rakkudele. Toxicology in Vitro, 2018. 52: lk 297–305.
- Almajali, B. jt, Timokinoon pärsib HL60 leukeemiarakkude proliferatsiooni ja soodustab nende apoptoosi JAK/STAT negatiivsete regulaatorite taasekspressiooni kaudu. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention: APJCP, 2021. 22(3): lk 879.
- Ruiz-Alcaraz, A.J. jt, Brassica bioaktiivsete ühendite põletikuvastase potentsiaali analüüs HL-60 rakkudest saadud inimese makrofaagilaadses rakumudelis. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2022. 149: lk 112804.
- Wang, D. jt, ERK osaleb dimetüülsulfoksiidiga indutseeritud HL-60 neutrofiililaadsete rakkude diferentseerumises ja funktsioneerimises, mis jäljendavad põletikulisi neutrofiile. International Immunopharmacology, 2020. 84: lk 106510.
- Núñez-Sánchez, M.Á. jt, Brassica-põhiste bioaktiivsete ühendite antileukemiline toime HL-60 müeloidse leukeemia rakkudes. International Journal of Molecular Sciences, 2022. 23(21): lk 13400.