Rakukultuuri keskkond
Kultiveeritud rakud vajavad edukaks kasvuks ja säilitamiseks hoolikat keskkonnakontrolli. Terviklik lähenemine hõlmab steriilsuse, toitainete tagamise, pH stabiilsuse ja temperatuuri kontrollimist.
Steriilsed tingimused ja toitainetega varustamine
Saastumise vältimiseks ja rakkude elujõulisuse tagamiseks on oluline steriilne keskkond. See saavutatakse tavaliselt aseptiliste tehnikate ja eriseadmete, näiteks laminaarvoolukapuute abil. Toitained saadakse kultuurkeskkonna kaudu, mis sisaldab segu olulistest koostisosadest, sealhulgas:
- Anorgaanilised soolad: Olulised osmootilise tasakaalu säilitamiseks ja rakutegevuseks vajalike ioonide tagamiseks.
- Süsivesikud: Teenivad energiaallikatena; glükoos on kõige sagedamini kasutatav suhkur.
- Aminohapped: Valkude ehitusplokid; mõned neist on hädavajalikud ja neid ei saa rakud ise sünteesida.
- Vitamiinid: Tegutsevad ensüümireaktsioonide kaasfaktorina; B-vitamiinid on raku ainevahetuse jaoks hädavajalikud.
- Rasvhapped ja lipiidid: Rakumembraanide terviklikkuse ja toimimise olulised komponendid.
- Valgud ja peptiidid: Seerumivabas keskkonnas asendavad need tavaliselt seerumist saadavaid kasvufaktoreid ja seonduvaid valke.
- Seerum: Lisatakse sageli kasvufaktorite allikana, kuigi seerumivabad alternatiivid on muutlikkuse ja saastumisohu vähendamiseks muutumas üha populaarsemaks.
- pH ja temperatuuri stabiilsus: Rakud vajavad optimaalseks kasvuks tavaliselt pH vahemikku 7,2-7,4. Seda reguleeritakse puhversüsteemidega, mis võivad olla kas CO2/bikarbonaadipõhised või keemiliselt saavutatud, kasutades aineid nagu HEPES. Temperatuuri hoitakse füsioloogiliste tingimuste jäljendamiseks umbes 37 °C juures.
Meediumivariandid ja optimeerimine
Aastate jooksul on välja töötatud mitmesuguseid baasmediume, et rahuldada konkreetseid rakutüüpe:
- Tasakaalustatud soolalahused: Moodustavad keerulisemate meediumivormide aluse.
- Basaalmeediumid, näiteks minimaalne oluline keskkond (MEM), kasutatakse primaarkultuuride ja diploidsete rakkude jaoks.
- Komplekssed meediumid: Nagu RPMI 1640, sobivad need laiema hulga imetajarakkude jaoks.
- Seerumivabad meediumid: Spetsiifiliste rakenduste jaoks kohandatud, vähendades loomsetest komponentidest tuleneva saastumise ohtu.
Meediumide valmistamine ja kvaliteedikontroll
Keskkonda võib valmistada ettevõttesiseselt olulistest koostisosadest või osta valmislahustena. Kvaliteedikontroll hõlmab saasteainete puudumise ja koostisosade õige kontsentratsiooni tagamist. Pulbriliste söötmete rekonstrueerimiseks on vaja kõrgekvaliteedilist vett ja ettevalmistatud söötmed tuleb steriliseerida, tavaliselt filtreerimise teel.
Seerumi kasutamine ja ohutusega seotud kaalutlused
Seerumi, eriti veiste loote seerumi (FBS) kasutamine on levinud selle rikkaliku kasvufaktorite sisalduse tõttu. Siiski järgitakse ohutuse tagamiseks ranget testimist ja hankimisprotokolli, kuna ollakse mures selliste haiguste nagu BSE pärast.
Regulatiivsed suunised ja suundumused
Kultuurides kasutatavad loomset päritolu materjalid on reguleeritud eeskirjadega, mis rõhutavad hankimise ja testimise tähtsust. Suundumus selliste materjalide võimalusel kõrvaldamiseks kajastub seerumi- ja loomavaba keskkonna alternatiivide väljatöötamises.
Kokkuvõtteks võib öelda, et rakukultuuride söötmetel on oluline roll rakkude kasvamisel ja säilitamisel in vitro. Iga komponent on hoolikalt valitud ja optimeeritud, et jäljendada in vivo keskkonda, tagades rakkude kasvu, ellujäämise ja funktsionaalsuse tingimused.
DMEM-i eristab teistest söötmetest selle ainulaadne koostis. See sisaldab muljetavaldavalt neljakordselt suuremat aminohapete ja vitamiinide kontsentratsiooni võrreldes algse Eagle's Minimal Essential Mediumiga. Algselt töötati välja madala glükoosi (1 g/l) ja naatriumpüruvaadi sisaldusega, kuid DMEMi kasutatakse sageli kõrgema glükoosisisaldusega, kas koos naatriumpüruvaadiga või ilma selleta. Eelkõige ei sisalda DMEM valke, lipiide ega kasvufaktoreid, mistõttu on vaja seda täiendada. Optimaalse kasvu saavutamiseks on levinud lähenemisviis, et DMEMi täiendatakse 10% veise loote seerumiga (FBS). Lisaks kasutab DMEM naatriumbikarbonaatpuhvrisüsteemi, mis nõuab 5-10% CO2 keskkonda, et säilitada füsioloogiline pH.
Dulbecco modifitseeritud Eagle's Medium (DMEM) on raku
- ja koekultuuride jaoks ettenähtud keskkondade hulgas kõrgelt hinnatud, kuna see vastab erinevate kleepuvate rakkude fenotüüpide kasvuvajadustele. See ületab 1950ndatel aastatel kanarakkude kasvatamiseks välja töötatud algset Eagle's Mediumi täiustatud täiendava koostisega, mida tuntakse Dulbecco modifikatsioonina. See modifikatsioon tõstab valitud aminohapete ja vitamiinide sisaldust võrreldes originaalsöötmega kuni neljakordselt.
Rakukultuuride valdkonnas on DMEMil oluline roll erinevate rakutüüpide, sealhulgas primaarsete rakkude, tüvirakkude ja transformeeritud rakkude kasvukeskkonnana. Teadlased kasutavad DMEMi modifitseeritud versiooni ka mitmesuguste teaduslike rakenduste jaoks, näiteks ravimite avastamiseks, koetehnoloogia ja rakkude signaaliradade uurimiseks.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
Glütsiin
30.00
L-arginiini HCl
84.00
L-tsütsiin 2 HCl
62.57
L-Glutamiin
584.00
L-Histidiin HClH2O
42.00
L-isoleutsiin
105.00
L-leutsiin
105.00
L-Lüsiin HCl
146.00
L-metioniin
30.00
L-Fenüülalaniin
66.00
L-Seriin
42.00
L-treoniin
95.00
L-trüptofaan
16.00
L-Türosiin 2 Na 2H2O
103.79
L-Valiin
94.00
Vitamiinid
Koliinkloriid
4.00
D-kaltsium-pantotenaat
4.00
Foolhape
4.00
myo-Inositool
7.20
Nikotiinamiid
4.00
Püridoksaal-HCl
4.00
Riboflaviin
0.40
Tiamiini HCl
4.00
Anorgaanilised soolad
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Muud komponendid
D-glükoos
4500.00
Fenoolpunane naatriumsool
15.90
Naatriumpüruvaat
110.00
Mida EMEM sisaldab?
EMEM on Eagle'i minimaalselt vajaliku söötme modifitseeritud versioon, mis sisaldab Earle'i tasakaalustatud soolalahust, mitteolulisi aminohappeid, L-glutamiini, naatriumpüruvaati ja naatriumbikarbonaati. Oluline on märkida, et see naatriumbikarbonaadi tase on mõeldud kasutamiseks 5% CO2 sisaldusega õhus. Selle tõhususe säilitamiseks on soovitatav säilitada keskkonda 2 °C kuni 8 °C juures pimedas, kui seda ei kasutata.
Milleks kasutatakse EMEMi?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) on rakukultuurikeskkond, millega saab säilitada rakke koekultuuris. Keskkond sisaldab suuremaid aminohapete kontsentratsioone, mis võimaldab täpsemalt lähendada kultiveeritud imetajarakkude valkude koostist. EMEMi võib kasutada erinevate rakkude, sealhulgas fibroblastide, inimese maksavähi rakuliini (HepG2) rakkude ja inimese loote aju progenitaatoritest saadud astrotsüütide rakkude (PDA) kasvatamiseks. Seda kasutatakse tavaliselt veise loote seerumi (FBS), vasika
- või hobuse seerumi juuresolekul.
Kuidas erineb EMEM teistest rakukultuurikeskkondadest?
Kuigi EMEM ja Dulbecco modifitseeritud Eagle's medium (DMEM) omavad mõningaid sarnasusi, erinevad nad ka üksteisest. Mõlemas söötmes puudub valk ja see sisaldab aminohappeid, soolasid, glükoosi ja vitamiine, mis on vajalikud raku energiaga varustamiseks ja selle säilitamiseks koekultuuris. Kuid DMEM on modifitseeritud, et sisaldada kuni neli korda rohkem vitamiine ja aminohappeid ning kaks kuni neli korda rohkem glükoosi kui EMEM. Väärib märkimist, et EMEM erineb ka algsest MEM-formulatsioonist.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
L-arginiini HCl
126.00
L-tsütsiin 2 HCl
31.30
L-glutamiin
292.00
L-Histidiin HClH2O
42.00
L-isoleutsiin
52.00
L-leutsiin
52.00
L-Lüsiin HCl
72.50
L-metioniin
15.00
L-Fenüülalaniin
32.00
L-treoniin
48.00
L-trüptofaan
10.00
L-Türosiin 2 Na 2H2O
51.90
L-valiin
46.00
Vitamiinid
Koliinkloriid
1.00
Vitamiinid
D-kaltsium-pantotenaat
1.00
Foolhape
1.00
myo-Inositool
2.00
Nikotiinamiid
1.00
Püridoksaal-HCl
1.00
Riboflaviin
0.10
Tiamiini HCl
1.00
Anorgaanilised soolad
CaCl2 2H2O
265.00
Anorgaanilised soolad
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Muud komponendid
D-glükoos
1000.00
Muud komponendid
Fenoolpunane naatriumsool
11.00
Üks selle märkimisväärseid eeliseid on võime toetada rakkude kasvu ilma seerumi lisamise vajaduseta. See välistab seerumi komponentidest tingitud võimalikud häired, tagades järjepidevad ja usaldusväärsed katsetulemused. Ham's F-12 Medium pakub seerumivaba kultuurikeskkonda pakkudes teadlastele suuremat kontrolli oma uuringute üle.
Ham's F-12 Mediumi teine oluline omadus on selle sobivus üksikute rakkude kasvatamiseks. See muudab selle suurepäraseks valikuks erinevate rakuliinide, sealhulgas CHO-rakkude, kopsurakkude ja hiire L-rakkude jaoks. Keskkonna optimeeritud toitainete koostis hõlbustab üksikute rakkude tõhusat kinnitumist ja kasvu, võimaldades homogeensete rakukultuuride rajamist parema reprodutseeritavusega.
Lisaks sellele on Ham's F-12 keskkond saanud tunnustuse kui eelistatud keskkond kloonilise toksilisuse analüüsi (CTA) jaoks. See test mängib olulist rolli ainete tsütotoksilise mõju hindamisel rakkudele. Kasutades Ham's F-12 keskkonda CTAs, saavad teadlased täpselt hinnata erinevate ühendite või töötlemisviiside mõju üksikutele rakkudele, andes väärtusliku ülevaate toksikoloogilistest profiilidest.
Kvaliteedikontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.
Hooldus
Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37° C vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37° C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis
Koostisosad
mg/l
Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2H2O
44,00
Vask(II)-sulfaat x 5H2O
0,00
Raud(II)-sulfaat x 7H2O
0,83
Magneesiumkloriid x 6H2O
122,00
Kaaliumkloriid
223,65
Naatriumkloriid
7599,00
di-naatriumvesinikfosfaatveevaba
142,04
Tsinksulfaat x 7H2O
0,86
Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
1801,60
Hüpoksantiin
4,08
Linoolhape
0,08
DL-α-lipoehape
0,21
Fenool punane
1,20
Putressiin x 2HCl
0,16
Naatriumpüruvaat
110,00
Tümidiin
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminohapped
L-alaniin
8,91
L-arginiin x HCl
210,70
L-asparagiin x H2O
15,01
L-asparagiinhape
13,31
L-tsüsteiin x HCl x H2O
35,12
L-Alanüül-L-glutamiin
217,30
L-glutamiinhape
14,71
Glütsiin
7,51
L-Histidiin x HCl x H2O
20,96
L-isoleutsiin
3,94
L-leutsiin
13,12
L-Lüsiin x HCl
36,54
L-metioniin
4,48
L-Fenüülalaniin
4,96
L-proliin
34,53
L-Seriin
10,51
L-treoniin
11,91
L-trüptofaan
2,04
L-Türosiin
5,44
L-valiin
11,71
Vitamiinid
D(+)-Biootiin
0,01
D-kaltsium-pantotenaat
0,24
Koliinkloriid
13,96
Foolhape
1,32
müo-Inositool
18,02
Nikotiinamiid
0,04
Püridoksiin x HCl
0,06
Riboflaviin
0,04
Tiamiin x HCl
0,34
B12-vitamiin
1,36
See ainulaadne koostis ühendab Dulbecco modifitseeritud Eagle's Medium (DMEM) ja Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) täpses vahekorras 1:1. L-glutamiini lisamine parandab selle koostist veelgi.
DMEM, mis on saadud Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), pakub võrreldes oma eelkäijaga suuremat aminohapete ja vitamiinide kontsentratsiooni. Seevastu Ham's F-12 põhineb Ham's F-10 keskkonnas, pakkudes täiendavat komplekti olulisi komponente.
Rakkude optimaalse kasvu toetamiseks on tavaline tava täiendada DMEM:Ham's F12-d FBSiga, mille tüüpiline kontsentratsioon on 5-10%. See lisamine on vajalik, kuna keskkonnas puuduvad kasvuhormoonid, lipiidid ja rakkude arenguks olulised valgud.
DMEM:Ham's F12 sisaldab pH-puhvrisüsteemi ja sellele lisatakse sageli pH-indikaatorit fenoolpunast. DMEM:Ham's F12 või mis tahes bikarbonaatpuhvrisüsteemi kasutavas keskkonnas kasvatatavad rakud vajavad kontrollitud CO2-keskkonda 5-10%, et säilitada sobiv pH-tase.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
Glütsiin
18.75
L-alaniin
4.45
L-arginiini HCl
147.50
L-asparagiin H₂O
7.50
L-asparagiinhape
6.65
L-tsüsteiin HCl H₂O
17.56
L-tsüstiin 2 HCl
31.29
L-glutamiinhape
7.35
L-Glutamiin
365.00
L-Histidiin HCl H₂O
31.48
L-isoleutsiin
54.47
L-Leutsiin
59.05
L-Lüsiin HCl
91.25
L-metioniin
17.24
L-Fenüülalaniin
35.48
L-proliin
17.25
L-Seriin
26.25
L-treoniin
53.45
L-trüptofaan
9.02
L-Türosiini dinaatriumsool
48.10
L-valiin
52.85
Vitamiinid
D-Biotiin
0.0035
Koliinkloriid
8.98
D-kaltsium-pantotenaat
2.24
Foolhape
2.66
myo-Inositool
12.60
Nikotiinamiid
2.02
Püridoksiin HCl
0.031
Püridoksaal-HCl
2.00
Riboflaviin
0.219
Tiamiini HCl
2.17
B12-vitamiin
0.68
Anorgaanilised soolad
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Muud komponendid
D-glükoos
3151.00
Hüpoksantiin
2.40
HEPES
3574.50
Linoolhape
0.042
Lipoehape
0.105
Fenoolpunane naatriumsool
8.63
Putressiin 2 HCl
0.081
Naatriumpüruvaat
55.00
Tümidiin
0.365
- ja kanamaksa rakkude kasvatamist, eriti vähendatud seerumi tingimustes.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium on hoolikalt koostatud rakukultuuritingimuste optimeerimiseks. Sellel on rikastatud koostis, mis pakub kõrgendatud koguseid olulisi komponente, nagu aminohappeid ja naatriumpüruvaati, samuti täiendavaid elemente, sealhulgas putressiini, tümidiini, hüpoksantiini ja tsinki. Need lisandid võimaldavad teadlastel täiendada keskkonda minimaalse seerumi või konkreetsete rakutüüpide jaoks määratletud komponentidega, hõlbustades täpseid katsetingimusi.
Eelkõige ei sisalda Ham's F-12K (Kaighn's) keskkond valke ega kasvufaktoreid. Sellest tulenevalt on sageli vaja lisada kasvufaktoreid ja veiste loote seerumit (FBS), mis võimaldab teadlastel kohandada keskkonda vastavalt oma konkreetsete rakuliinide nõuetele. Optimaalse tulemuslikkuse tagamiseks tuleb FBS-i kontsentratsioon iga rakuliini jaoks hoolikalt optimeerida, tagades optimaalse kasvu ja funktsionaalsuse.
Füsioloogilise pH säilitamiseks kasutatakse Ham's F-12K (Kaighn's) keskkonnas naatriumbikarbonaatpuhvrisüsteemi (2,5 g/l), mis eeldab kasvatamise ajal kontrollitud 5-10% CO2-keskkonda. See tagab, et keskkonna pH jääb rakkude kasvu ja elujõulisuse jaoks ideaalsesse vahemikku
Kvaliteedikontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.
Hooldus
Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37°C vähendavad toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis
Koostisosad
mg/l
Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2H2O
135,24
Vask(II)-sulfaat x 5H2O
0,00
Raud(II)-sulfaat x 7H2O
0,83
Magneesiumkloriid x 6H2O
105,72
Magneesiumsulfaat x 7H2O
394,49
Kaaliumkloriid
283,29
Kaaliumdivesinikfosfaat
58,52
Naatriumkloriid
7597,20
dinaatriumvesinikfosfaatveevaba
115,02
Tsinksulfaat x 7H2O
0,14
Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
1260,00
Hüpoksantiin
4,08
DL-α-lipoehape
0,21
Fenool punane
3,00
Putressiin x 2HCl
0,32
Naatriumpüruvaat
220,00
NaHCO3
2500,00
Tümidiin
0,73
Aminohapped
L-alaniin
17,82
L-arginiin x HCl
421,40
L-asparagiin x H2O
30,02
L-asparagiinhape
26,62
L-tsüsteiin x HCl x H2O
70,24
L-glutamiin
292,20
L-glutamiinhape
29,42
Glütsiin
15,01
L-Histidiin x HCl x H2O
41,92
L-isoleutsiin
7,87
L-leutsiin
26,24
L-Lüsiin x HCl
73,04
L-metioniin
8,95
L-fenüülalaniin
9,91
L-proliin
69,06
L-Seriin
21,02
L-treoniin
23,82
L-trüptofaan
4,08
L-Türosiin
10,87
L-valiin
23,42
Vitamiinid
D(+)-Biotiin
0,07
D-kaltsium-pantotenaat
0,48
Koliinkloriid
13,96
Foolhape
1,32
müo-Inositool
18,02
Nikotiinamiid
0,04
Püridoksiin x HCl
0,06
Riboflaviin
0,04
Tiamiin x HCl
0,34
B12-vitamiin
1,36
- 0,02 temperatuuril 20–25 °C. Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes. Hooldus Hoida külmikus +2 °C kuni +8 °C pimedas kohas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37 °C vähendab toote kvaliteeti. Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid). Kui kasutatakse ainult osa keskkonnast, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage toatemperatuuril. Kõigi keskkonna, välja arvatud baaskeskkonna, kõlblikkusaeg on 6–8 nädalat alates avamiskuupäevast. Koostis Komponendid mg/L Anorgaanilised sooladKaltsiumkloriid x 2H2O132,0 Magneesiumsulfaat97,67 Kaaliumkloriid400 Naatriumkloriid6460 Dinatriumvesinikfosfaat (veevaba)504,00 Muud komponendidD(+)-glükoos (veevaba)3000 Glutatioon (redutseeritud)0 Lihapepton600 Fenoolpunane naatriumsool11 AminohappedL-alaniin13,36 L-arginiin x HCl42,14 L-asparagiin x H2O45,03 L-asparagiinhape19,97 L-tsüsteiin x HCl x H2O31,75 L-glutamiin (stabiilne)219,15 L-glutamiinhape22,07 Glütsiin7,51 L-histidiin x HCl x H2O20,96 L-hüdroksüproliin19,67 L-isoleutsiin39,36 L-leutsiin39,36 L-lüsiin x HCl36,54 L-metioniin14,92 L-fenüülalaniin16,52 L-proliin17,27 L-seriin26,28 L-treoniin17,87 L-trüptofaan3,06 L-türosiini dinaatriumsool26,10 L-valiin17,57 Vitamiinidp-aminobensoehape1,0 Askorbiinhape0,56 D(+)-biotiin0,20 D-kaltsiumpantotenaat0,2 Koliinkloriid5 Foolhape10 Müo-inositool36 Nikotinaamid0 Nikotiinhape0,5 Püridoksaal HCl0,5 Püridoksiin HCl0,5 Riboflaviin0,2 Tiamiin HCl0,2 Vitamiin B122,0
IMDM sobib hästi kiiresti paljunevate, suure tihedusega rakukultuuride, sealhulgas Jurkat-, COS-7
- ja makrofaagirakkude kasvatamiseks. Erinevate rakukultuuride jaoks saadaval olevad IMDMi erinevad modifikatsioonid on leitavad meediumivaliku tööriista abil. Vedelkeskkonnad pakuvad olulisi toitaineid kõigi rakukultuuride jaoks. Iga meie kvaliteetne rakukultuurikeskkond on toodetud vastavalt algselt avaldatud valemile või modifikatsioonidele, mis on vajalikud kultuurikeskkonna järjepideva toimimise ja stabiilsuse tagamiseks.
IMDM vs. DMEM
IMDM sisaldab kaaliumnitraati raudnitraadi asemel ning HEPESi ja naatriumpüruvaati. IMDMi lisakomponendid muudavad selle sobivamaks spetsiaalsete rakutüüpide ja spetsiifiliste rakenduste jaoks kui DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM ja RPMI on erineva koostisega, mis võib olla oluline PMA/ionomütsiini stimuleerimisel. Üks oluline erinevus on Ca2+ kontsentratsioon. Kui RPMI sisaldab 0,42 mM Ca2+, siis IMDM sisaldab 1,49 mM.
Kvaliteedikontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.
Hooldus
Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37° C vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37° C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis
Koostisosad
mg/l
Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2 H2O
219,00
Kaaliumkloriid
330,00
Kaaliumnitraat
0.076
Magneesiumsulfaat veevaba
97,73
Naatriumkloriid
4,505.00
Naatriumdivesinikfosfaat veevaba
109,00
Naatriumseleniit
0,02
Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
4,500.00
HEPES
5,958.00
Naatriumpüruvaat
110,00
Punane fenool
15,00
Aminohapped
L-alaniin
25,00
L-arginiin x HCl
84,00
L-asparagiin x H2O
25,00
L-asparagiinhape
30,00
L-tsüstiin x 2HCl
91,24
L-Glutamiin
584,00
L-glutamiinhape
75,00
Glütsiin
30,00
L-Histidiin x HCl x H2O
42,00
L-isoleutsiin
104,80
L-leutsiin
104,80
L-Lüsiin x HCl
146,20
L-metioniin
30,00
L-fenüülalaniin
66,00
L-proliin
40,00
L-Seriin
42,00
L-treoniin
95,20
L-trüptofaan
16,00
L-Türosiin x 2Na
104,20
L-Valiin
93,60
Vitamiinid
D(+)-Biootiin
0.013
D-kaltsium-pantotenaat
4,00
Koliinkloriid
4,00
Foolhape
4,00
müo-Inositool
7,20
Esialgu inimleukeemiarakkude kasvu toetamiseks nii suspensiooni
- kui ka monokihiliste kultuuride puhul loodud RPMI 1640 keskkond on teadlaste ja kaubanduslike tarnijate muudatuste kaudu muutunud sobivaks mitmesuguste imetajarakkude jaoks. See sobib erakordselt hästi selliste rakuliinidega nagu HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrotsüüdid ja kartsinoomid.
RPMI 1640 Medium eristub teistest rakukultuurikeskkondadest oma unikaalse koostise poolest. See sisaldab märkimisväärses koguses fosfaate, aminohappeid ja vitamiine. Eelkõige sisaldab see biotiini, B12-vitamiini ja PABA-d, mis puuduvad Eagle's Minimal Essential Medium'is või Dulbecco's Modified Eagle Medium'is. Lisaks sellele on RPMI 1640 Mediumis oluliselt kõrgemad inositooli ja koliini vitamiinide kontsentratsioonid. See ei sisalda aga valke, lipiide ega kasvufaktoreid. Sellest tulenevalt on rakkude optimaalsete kasvutingimuste tagamiseks tavaliselt vaja lisada 10% veiste loote seerumit (FBS).
RPMI 1640 keskkonda puhverdav süsteem põhineb naatriumbikarbonaadil ja vajab 5-10% CO2 keskkonda, et säilitada füsioloogiliselt sobiv pH. Redutseeriva aine glutatiooni lisamine eristab seda keskkonda teistest veelgi.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
Glütsiin
10.00
L-Alanüül-L-glutamiin
434.40
L-arginiin
200.00
L-asparagiinH2O
56.82
L-asparagiinhape
20.00
L-tsüstiin 2HCl
65.20
L-glutamiinhape
20.00
L-Histidiin HClH2O
20.27
L-Hüdroksü-L-proliin
20.00
L-isoleutsiin
50.00
L-leutsiin
50.00
L-Lüsiin HCl
40.00
L-metioniin
15.00
L-Fenüülalaniin
15.00
L-proliin
20.00
L-Seriin
30.00
L-treoniin
20.00
L-trüptofaan
5.00
L-Türosiin 2Na 2H2O
28.83
L-Valiin
20.00
Vitamiinid
p-Aminobensoehape
1.00
D-Biotiin
0.20
Koliinkloriid
3.00
D-kaltsium-pantotenaat
0.25
Foolhape
1.00
myo-Inositool
35.00
Nikotiinamiid
1.00
Püridoksiin HCl
1.00
Riboflaviin
0.20
Tiamiini HCl
1.00
B12-vitamiin
0.005
Anorgaanilised soolad
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Muud komponendid
D-glükoos
2000.00
L-glutatioon redutseeritud
1.00
Fenoolpunane naatriumsool
5.30