Mine kodulehele

Rakukultuuri keskkond

Kultiveeritud rakud vajavad edukaks kasvuks ja säilitamiseks hoolikat keskkonnakontrolli. Terviklik lähenemine hõlmab steriilsuse, toitainete tagamise, pH stabiilsuse ja temperatuuri kontrollimist.

Steriilsed tingimused ja toitainetega varustamine

Saastumise vältimiseks ja rakkude elujõulisuse tagamiseks on oluline steriilne keskkond. See saavutatakse tavaliselt aseptiliste tehnikate ja eriseadmete, näiteks laminaarvoolukapuute abil. Toitained saadakse kultuurkeskkonna kaudu, mis sisaldab segu olulistest koostisosadest, sealhulgas:

  • Anorgaanilised soolad: Olulised osmootilise tasakaalu säilitamiseks ja rakutegevuseks vajalike ioonide tagamiseks.
  • Süsivesikud: Teenivad energiaallikatena; glükoos on kõige sagedamini kasutatav suhkur.
  • Aminohapped: Valkude ehitusplokid; mõned neist on hädavajalikud ja neid ei saa rakud ise sünteesida.
  • Vitamiinid: Tegutsevad ensüümireaktsioonide kaasfaktorina; B-vitamiinid on raku ainevahetuse jaoks hädavajalikud.
  • Rasvhapped ja lipiidid: Rakumembraanide terviklikkuse ja toimimise olulised komponendid.
  • Valgud ja peptiidid: Seerumivabas keskkonnas asendavad need tavaliselt seerumist saadavaid kasvufaktoreid ja seonduvaid valke.
  • Seerum: Lisatakse sageli kasvufaktorite allikana, kuigi seerumivabad alternatiivid on muutlikkuse ja saastumisohu vähendamiseks muutumas üha populaarsemaks.
  • pH ja temperatuuri stabiilsus: Rakud vajavad optimaalseks kasvuks tavaliselt pH vahemikku 7,2-7,4. Seda reguleeritakse puhversüsteemidega, mis võivad olla kas CO2/bikarbonaadipõhised või keemiliselt saavutatud, kasutades aineid nagu HEPES. Temperatuuri hoitakse füsioloogiliste tingimuste jäljendamiseks umbes 37 °C juures.

Meediumivariandid ja optimeerimine

Aastate jooksul on välja töötatud mitmesuguseid baasmediume, et rahuldada konkreetseid rakutüüpe:

  • Tasakaalustatud soolalahused: Moodustavad keerulisemate meediumivormide aluse.
  • Basaalmeediumid, näiteks minimaalne oluline keskkond (MEM), kasutatakse primaarkultuuride ja diploidsete rakkude jaoks.
  • Komplekssed meediumid: Nagu RPMI 1640, sobivad need laiema hulga imetajarakkude jaoks.
  • Seerumivabad meediumid: Spetsiifiliste rakenduste jaoks kohandatud, vähendades loomsetest komponentidest tuleneva saastumise ohtu.

Meediumide valmistamine ja kvaliteedikontroll

Keskkonda võib valmistada ettevõttesiseselt olulistest koostisosadest või osta valmislahustena. Kvaliteedikontroll hõlmab saasteainete puudumise ja koostisosade õige kontsentratsiooni tagamist. Pulbriliste söötmete rekonstrueerimiseks on vaja kõrgekvaliteedilist vett ja ettevalmistatud söötmed tuleb steriliseerida, tavaliselt filtreerimise teel.

Seerumi kasutamine ja ohutusega seotud kaalutlused

Seerumi, eriti veiste loote seerumi (FBS) kasutamine on levinud selle rikkaliku kasvufaktorite sisalduse tõttu. Siiski järgitakse ohutuse tagamiseks ranget testimist ja hankimisprotokolli, kuna ollakse mures selliste haiguste nagu BSE pärast.

Regulatiivsed suunised ja suundumused

Kultuurides kasutatavad loomset päritolu materjalid on reguleeritud eeskirjadega, mis rõhutavad hankimise ja testimise tähtsust. Suundumus selliste materjalide võimalusel kõrvaldamiseks kajastub seerumi- ja loomavaba keskkonna alternatiivide väljatöötamises.

Kokkuvõtteks võib öelda, et rakukultuuride söötmetel on oluline roll rakkude kasvamisel ja säilitamisel in vitro. Iga komponent on hoolikalt valitud ja optimeeritud, et jäljendada in vivo keskkonda, tagades rakkude kasvu, ellujäämise ja funktsionaalsuse tingimused.

DMEM, w: 4,5 g/L glükoos, w: 4 mM L-glutamiin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaat
DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) on väga mitmekülgne ja laialdaselt kasutatav põhikeskkond, mis on mõeldud mitmesuguste imetajarakkude kasvu toetamiseks bioloogilistes uuringutes. See on ideaalne keskkond primaarsete fibroblastide, neuronite, gliarakkude, HUVECide, silelihasrakkude, samuti populaarsete rakuliinide, nagu HeLa, 293, Cos-7 ja PC-12, kultiveerimiseks.
DMEM-i eristab teistest söötmetest selle ainulaadne koostis. See sisaldab muljetavaldavalt neljakordselt suuremat aminohapete ja vitamiinide kontsentratsiooni võrreldes algse Eagle's Minimal Essential Mediumiga. Algselt töötati välja madala glükoosi (1 g/l) ja naatriumpüruvaadi sisaldusega, kuid DMEMi kasutatakse sageli kõrgema glükoosisisaldusega, kas koos naatriumpüruvaadiga või ilma selleta. Eelkõige ei sisalda DMEM valke, lipiide ega kasvufaktoreid, mistõttu on vaja seda täiendada. Optimaalse kasvu saavutamiseks on levinud lähenemisviis, et DMEMi täiendatakse 10% veise loote seerumiga (FBS). Lisaks kasutab DMEM naatriumbikarbonaatpuhvrisüsteemi, mis nõuab 5-10% CO2 keskkonda, et säilitada füsioloogiline pH.
Dulbecco modifitseeritud Eagle's Medium (DMEM) on raku
- ja koekultuuride jaoks ettenähtud keskkondade hulgas kõrgelt hinnatud, kuna see vastab erinevate kleepuvate rakkude fenotüüpide kasvuvajadustele. See ületab 1950ndatel aastatel kanarakkude kasvatamiseks välja töötatud algset Eagle's Mediumi täiustatud täiendava koostisega, mida tuntakse Dulbecco modifikatsioonina. See modifikatsioon tõstab valitud aminohapete ja vitamiinide sisaldust võrreldes originaalsöötmega kuni neljakordselt.
Rakukultuuride valdkonnas on DMEMil oluline roll erinevate rakutüüpide, sealhulgas primaarsete rakkude, tüvirakkude ja transformeeritud rakkude kasvukeskkonnana. Teadlased kasutavad DMEMi modifitseeritud versiooni ka mitmesuguste teaduslike rakenduste jaoks, näiteks ravimite avastamiseks, koetehnoloogia ja rakkude signaaliradade uurimiseks.

Kvaliteedikontroll

Steriilselt filtreeritud


Säilitamine ja säilivusaeg

Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.


Veotingimused

Keskkonnatemperatuur


Hooldus

Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.


Koostis



Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)


Aminohapped
Glütsiin
30.00



L-arginiini HCl
84.00



L-tsütsiin 2 HCl
62.57



L-Glutamiin
584.00



L-Histidiin HClH2O
42.00



L-isoleutsiin
105.00



L-leutsiin
105.00



L-Lüsiin HCl
146.00



L-metioniin
30.00



L-Fenüülalaniin
66.00



L-Seriin
42.00



L-treoniin
95.00



L-trüptofaan
16.00



L-Türosiin 2 Na 2H2O
103.79



L-Valiin
94.00


Vitamiinid
Koliinkloriid
4.00



D-kaltsium-pantotenaat
4.00



Foolhape
4.00



myo-Inositool
7.20



Nikotiinamiid
4.00



Püridoksaal-HCl
4.00



Riboflaviin
0.40



Tiamiini HCl
4.00


Anorgaanilised soolad
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Muud komponendid
D-glükoos
4500.00



Fenoolpunane naatriumsool
15.90



Naatriumpüruvaat
110.00

25,00 €*
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS
Eagle’i minimaalne põhikeskkonna (EMEM) on üks laialdasemalt kasutatavaid põhikeskkonnaid mitmesuguste imetajate rakkude, eriti adhesiivsete rakuliinide kasvatamiseks. Selle klassikalise koostise, mille töötas algselt välja Harry Eagle, sisaldab esmavajalikke aminohappeid, vitamiine ja anorgaanilisi sooli, mis on vajalikud nii esmaste rakkude kui ka väljakujunenud rakuliinide kasvu toetamiseks standardsetes kultiveerimistingimustes.

Seda kasutusvalmis, steriilselt filtreeritud vedelat koostist on täiendatud Earle’i tasakaalustatud soolalahusega (EBSS), 2 mM L-glutamiiniga, D-glükoosiga (1,0 g/l) ja 2,2 g/l naatriumvesinikkarbonaadiga (NaHCO3), mis muudab selle sobivaks kasutamiseks CO2-kontrollitud inkubaatori keskkonnas (tavaliselt 5 % CO2). Lisatud fenoolpunane toimib pH-indikaatorina, võimaldades rakukultuuri ajal keskkonna seisundi mugavat visuaalset jälgimist.

Peamised omadused

Klassikaline Eagle’i MEM-koostis Earle’i tasakaalustatud soolalahusega (EBSS)
Sisaldab 2 mM L-glutamiini – valmis koheseks kasutamiseks
2,2 g/l naatriumvesinikkarbonaati – puhverdatud 5 % CO2 inkubeerimiseks
Peamise süsinikuallikana D-glükoos (1,0 g/l)
Fenoolpunane pH-indikaatorina
Ilma HEPES-ita ja ilma naatrium-püruvaadita
Steriilselt filtreeritud vedel keskkond, valmis kasutamiseks
pH 7,0 – 7,6


Tüüpilised rakendused
EMEM toetab mitmesuguste imetajate rakuliinide kasvatamist, sealhulgas HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 ja paljusid esmaseid rakke. Tüüpilised rakendused hõlmavad:

Adherentse rakuliini rutiinne hooldus ja paljundamine
Viiruste paljundamine ja vaktsiinide tootmine
Tsütotoksilisuse ja biotestide rakendused
Transfektsiooni ja valkude ekspressiooni uuringud
Alusuuringud rakubioloogias ja molekulaarbioloogias

Optimaalse rakkude kasvu tagamiseks lisatakse EMEM-ile tavaliselt 5–10 % loote veise seerumit (FBS) ja, sõltuvalt rakuliinist, mitte-essentsiaalseid aminohappeid (NEAA) ning antibiootikume, nagu penitsilliin/streptomütsiin.

Käsitsemine ja ladustamine
Hoida avamata pudelit +2 °C kuni +8 °C juures, valguse eest kaitstult. Pärast avamist kasutada aseptilistes tingimustes. Lahuses olev L-glutamiin laguneb järk-järgult – parima tulemuse saavutamiseks soovitame kasutada keskkonda 4 nädala jooksul pärast avamist või lisada enne kasutamist värsket L-glutamiini, kui seda hoitakse kauem. Enne rakkudele lisamist lasta keskkonnal soojeneda 37 °C-ni.

Kvaliteet
Valmistatud rangete kvaliteedistandardite kohaselt. Iga partii steriilsust, pH-d, osmolalisust ja endotoksiinitaset kontrollitakse, et tagada ühtlane toimivus rakukultuuri rakendustes.

Toote spetsifikatsioonid



Spetsifikatsioon
Detail



Toote tüüpMEM
TootekategooriaRakukultuuri kasvukeskkonnad
VormVedelik
SteriilneJah
Suurus500 ml
L-glutamiinL-glutamiiniga (2 mM)
GlükoosGlükoosiga (1,0 g/l)
NaHCO3NaHCO3-ga (2,2 g/l)
HEPESIlma HEPES-ita
NaHCO3Ilma naatrium-püruvaadita
FenoolpunaneFenoolpunasega
SoolalahusEarle’i tasakaalustatud soolalahus (EBSS)
pH7,0 – 7,6
EndotoksiinisisaldusEi ole täpsustatud
Säilitamine+2 °C kuni +8 °C



Koostis (koostis ühe liitri kohta)



Komponent
Kontsentratsioon (mg/l)




Anorgaanilised soolad


Kaltsiumkloriid · 2H2O265,00
Magneesiumsulfaat97,72
Kaaliumkloriid400,00
Naatriumkloriid6 800,00
Na-divesinikfosfaat, veevaba122,00
Naatriumvesinikkarbonaat (NaHCO3)2 200,00


Aminohapped

L-arginiin · HCl126,00
L-tsüstiin · 2HCl31,30
L-glutamiin292,00
L-histidiin · HCl · H2O42,00
L-isoleutsiin52,00
L-leutsiin52,00
L-lüsiin · HCl72,50
L-metioniin15,00
L-fenüülalaniin32,00
L-treoniin48,00
L-trüptofaan10,00
L-türosiin · 2Na · 2H2O51,90
L-valiin46,00


Vitamiinid

D-kaltsiumpantotenaat1,00
Koliinkloriid1,00
Foolhape1,00
Müo-inositool2,00
Nikotiinamiid1,00
Püridoksaal · HCl1,00
Riboflaviin0,10
Tiamiin · HCl1,00


Muud koostisosad

D(+)-glükoos1 000,00
Fenoolpunane10,00

25,00 €*
Ham's F12 keskkond, w: 1,0 mM stabiilne glutamiin, w: 1,0 mM naatriumpüruvaat, w: 1,176 g/L NaHCO3
Ham's F-12 Medium, tuntud ka kui Ham's F-12 Nutrient Mix, on laialdaselt kasutatav põhikeskkond, mis on mõeldud spetsiaalselt rakukultuuride jaoks. Seda on laialdaselt kasutatud Hiina Hamsteri munarakkude (CHO), kopsurakkude ja hiire L-rakkude seerumivaba, üksikute rakkude kasvatamiseks. Lisaks sellele on Ham's F-12 valitud söötmeks kloonilise toksilisuse analüüsi (CTA) jaoks.
Üks selle märkimisväärseid eeliseid on võime toetada rakkude kasvu ilma seerumi lisamise vajaduseta. See välistab seerumi komponentidest tingitud võimalikud häired, tagades järjepidevad ja usaldusväärsed katsetulemused. Ham's F-12 Medium pakub seerumivaba kultuurikeskkonda pakkudes teadlastele suuremat kontrolli oma uuringute üle.
Ham's F-12 Mediumi teine oluline omadus on selle sobivus üksikute rakkude kasvatamiseks. See muudab selle suurepäraseks valikuks erinevate rakuliinide, sealhulgas CHO-rakkude, kopsurakkude ja hiire L-rakkude jaoks. Keskkonna optimeeritud toitainete koostis hõlbustab üksikute rakkude tõhusat kinnitumist ja kasvu, võimaldades homogeensete rakukultuuride rajamist parema reprodutseeritavusega.
Lisaks sellele on Ham's F-12 keskkond saanud tunnustuse kui eelistatud keskkond kloonilise toksilisuse analüüsi (CTA) jaoks. See test mängib olulist rolli ainete tsütotoksilise mõju hindamisel rakkudele. Kasutades Ham's F-12 keskkonda CTAs, saavad teadlased täpselt hinnata erinevate ühendite või töötlemisviiside mõju üksikutele rakkudele, andes väärtusliku ülevaate toksikoloogilistest profiilidest.
Kvaliteedikontroll

pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.

Hooldus

Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37° C vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37° C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.

Koostis




Koostisosad
mg/l


Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2H2O
44,00



Vask(II)-sulfaat x 5H2O
0,00



Raud(II)-sulfaat x 7H2O
0,83



Magneesiumkloriid x 6H2O
122,00



Kaaliumkloriid
223,65



Naatriumkloriid
7599,00



di-naatriumvesinikfosfaatveevaba
142,04



Tsinksulfaat x 7H2O
0,86


Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
1801,60



Hüpoksantiin
4,08



Linoolhape
0,08



DL-α-lipoehape
0,21



Fenool punane
1,20



Putressiin x 2HCl
0,16



Naatriumpüruvaat
110,00



Tümidiin
0,73



NaHCO3
1176,00


Aminohapped
L-alaniin
8,91



L-arginiin x HCl
210,70



L-asparagiin x H2O
15,01



L-asparagiinhape
13,31



L-tsüsteiin x HCl x H2O
35,12



L-Alanüül-L-glutamiin
217,30



L-glutamiinhape
14,71



Glütsiin
7,51



L-Histidiin x HCl x H2O
20,96



L-isoleutsiin
3,94



L-leutsiin
13,12



L-Lüsiin x HCl
36,54



L-metioniin
4,48



L-Fenüülalaniin
4,96



L-proliin
34,53



L-Seriin
10,51



L-treoniin
11,91



L-trüptofaan
2,04



L-Türosiin
5,44



L-valiin
11,71


Vitamiinid
D(+)-Biootiin
0,01



D-kaltsium-pantotenaat
0,24



Koliinkloriid
13,96



Foolhape
1,32



müo-Inositool
18,02



Nikotiinamiid
0,04



Püridoksiin x HCl
0,06



Riboflaviin
0,04



Tiamiin x HCl
0,34



B12-vitamiin
1,36

25,00 €*
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3
DMEM:Ham's F12 on bioloogilistes uuringutes rakukultuurides laialdaselt tunnustatud ja laialdaselt kasutatav baaskeskkond. See on erinevate imetajate rakuliinide kasvu jaoks oluline toitainete allikas, eriti kui seda täiendatakse loote veise seerumiga (FBS).

See unikaalne koostis ühendab Dulbecco modifitseeritud Eagle'i keskkonna (DMEM) ja Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) täpses 1:1 suhtes. L-glutamiini lisamine täiustab selle koostist veelgi.

DMEM, mis on tuletatud Eagle'i minimaalse essentsiaalse keskkonna (EMEM) baasil, pakub võrreldes oma eelkäijaga suuremat aminohapete ja vitamiinide kontsentratsiooni. Seevastu Ham's F-12 põhineb Ham's F-10 keskkonnal, pakkudes täiendavat komplekti olulisi komponente.

Optimaalse rakkude kasvu toetamiseks on tavaline lisada DMEM:Ham's F12-le FBS-i tüüpilises kontsentratsioonis 5–10%. See lisand on vajalik, kuna keskkonnas puuduvad rakkude arenguks olulised kasvuhormoonid, lipiidid ja valgud.

DMEM:Ham's F12 sisaldab pH-puhversüsteemi ja seda täiendatakse sageli fenoolpunasega, mis on pH-indikaator. DMEM:Ham's F12-s või mis tahes bikarbonaatpuhversüsteemi kasutavas keskkonnas kasvatatavad rakud vajavad sobiva pH-taseme säilitamiseks kontrollitud CO2-keskkonda (5–10%). 


Kvaliteedikontroll

Steriilselt filtreeritud


Ladustamine ja kõlblikkusaeg

Hoida +2 °C kuni +8 °C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada temperatuuril 4 °C ja kasutada 6–8 nädala jooksul.


Transporditingimused

Ümbritseva õhu temperatuur


Hooldus

Hoida pimedas kohas temperatuuril +2 °C kuni +8 °C. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist temperatuurini +37 °C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, nagu mikrolaineahjud.
Kui kasutatakse ainult osa keskkonnast, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.


Koostis



Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)


Aminohapped
Glütsiin
18,75


L-alaniin
4,45


L-arginiin HCl
147,50


L-asparagiin H₂O
7,50


L-asparagiinhape
6,65


L-tsüsteiin HCl H₂O
17,56


L-tsüstiin 2 HCl
31,29


L-glutamiinhape
7,35


L-glutamiin
365,00


L-histidiin HCl H₂O
31,48


L-isoleutsiin
54,47


L-leutsiin
59,05


L-lüsiin HCl
91,25


L-metioniin
17,24


L-fenüülalaniin
35,48


L-proliin
17,25


L-seriin
26,25


L-treoniin
53,45


L-trüptofaan
9,02


L-türosiin 2 Na 2 H2O
55,79


L-valiin
52,85


Vitamiinid
D-biotiin
0,0035


Koliinkloriid
8,98


D-kaltsiumpantotenaat
2,24


Foolhape
2,66


Müo-inositool
12,60


Nikotiinamiid
2,02


Püridoksiin-HCl
0,031


Püridoksaal-HCl
2,00


Riboflaviin
0,219


Tiamiin HCl
2,17


B12-vitamiin
0,68



Anorgaanilised soolad
CaCl2 2 H2O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO3)3 9 H2O
0,05


FeSO4 7 H2O
0,417


KCl
311,80


MgCl2 6 H2O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na2HPO4
71,02


NaH2PO4 2 H2O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Muud koostisosad
D-glükoos
3151,00


Hüpoksantiin
2,40


HEPES
3574,50


Linoolhape
0,042


Lipoiinhape
0,105


Fenoolpunase naatriumsool
8,63


Putreskiin-2-HCl
0,081


Na-püruvaat
55,00


Tümidiin
0,365

25,00 €*
Ham's F12K Medium, w: 2,0 mM L-Glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,5 g/L NaHCO3
Tutvustame Ham's F-12K (Kaighn's) keskkonda, mis on Ham's F-12 keskkonna spetsiaalne modifikatsioon, mis on mõeldud vastama bioloogiliste uuringute ainulaadsetele nõuetele. See täiustatud keskkond pakub selgeid eeliseid, parandades inimese primaarsete hepatotsüütide, samuti roti
- ja kanamaksa rakkude kasvatamist, eriti vähendatud seerumi tingimustes.

Ham's F-12K (Kaighn's) Medium on hoolikalt koostatud rakukultuuritingimuste optimeerimiseks. Sellel on rikastatud koostis, mis pakub kõrgendatud koguseid olulisi komponente, nagu aminohappeid ja naatriumpüruvaati, samuti täiendavaid elemente, sealhulgas putressiini, tümidiini, hüpoksantiini ja tsinki. Need lisandid võimaldavad teadlastel täiendada keskkonda minimaalse seerumi või konkreetsete rakutüüpide jaoks määratletud komponentidega, hõlbustades täpseid katsetingimusi.

Eelkõige ei sisalda Ham's F-12K (Kaighn's) keskkond valke ega kasvufaktoreid. Sellest tulenevalt on sageli vaja lisada kasvufaktoreid ja veiste loote seerumit (FBS), mis võimaldab teadlastel kohandada keskkonda vastavalt oma konkreetsete rakuliinide nõuetele. Optimaalse tulemuslikkuse tagamiseks tuleb FBS-i kontsentratsioon iga rakuliini jaoks hoolikalt optimeerida, tagades optimaalse kasvu ja funktsionaalsuse.

Füsioloogilise pH säilitamiseks kasutatakse Ham's F-12K (Kaighn's) keskkonnas naatriumbikarbonaatpuhvrisüsteemi (2,5 g/l), mis eeldab kasvatamise ajal kontrollitud 5-10% CO2-keskkonda. See tagab, et keskkonna pH jääb rakkude kasvu ja elujõulisuse jaoks ideaalsesse vahemikku
Kvaliteedikontroll

pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.

Hooldus

Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37°C vähendavad toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.

Koostis




Koostisosad
mg/l


Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2H2O
135,24



Vask(II)-sulfaat x 5H2O
0,00



Raud(II)-sulfaat x 7H2O
0,83



Magneesiumkloriid x 6H2O
105,72



Magneesiumsulfaat x 7H2O
394,49



Kaaliumkloriid
283,29



Kaaliumdivesinikfosfaat
58,52



Naatriumkloriid
7597,20



dinaatriumvesinikfosfaatveevaba
115,02



Tsinksulfaat x 7H2O
0,14


Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
1260,00



Hüpoksantiin
4,08



DL-α-lipoehape
0,21



Fenool punane
3,00



Putressiin x 2HCl
0,32



Naatriumpüruvaat
220,00



NaHCO3
2500,00



Tümidiin
0,73


Aminohapped
L-alaniin
17,82



L-arginiin x HCl
421,40



L-asparagiin x H2O
30,02



L-asparagiinhape
26,62



L-tsüsteiin x HCl x H2O
70,24



L-glutamiin
292,20



L-glutamiinhape
29,42



Glütsiin
15,01



L-Histidiin x HCl x H2O
41,92



L-isoleutsiin
7,87



L-leutsiin
26,24



L-Lüsiin x HCl
73,04



L-metioniin
8,95



L-fenüülalaniin
9,91



L-proliin
69,06



L-Seriin
21,02



L-treoniin
23,82



L-trüptofaan
4,08



L-Türosiin
10,87



L-valiin
23,42


Vitamiinid
D(+)-Biotiin
0,07



D-kaltsium-pantotenaat
0,48



Koliinkloriid
13,96



Foolhape
1,32



müo-Inositool
18,02



Nikotiinamiid
0,04



Püridoksiin x HCl
0,06



Riboflaviin
0,04



Tiamiin x HCl
0,34



B12-vitamiin
1,36

108,00 €*
McCoys 5A keskkond (modifitseeritud), w: 3,0 g/L glükoos, w: stabiilne glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3
McCoy's 5A Medium on väga soovitatav ja spetsialiseeritud keskkond, mis on loodud viiruste kasvu ja paljunemise soodustamiseks esmaste rakukultuurides. See on saavutanud märkimisväärse tunnustuse oma erakordse toimivuse poolest mitmesugustes bioloogilistes uurimistöödes. McCoy's 5A Mediumi üks silmapaistev rakendus on selle kasutamine inimese käärsoole kartsinoomi rakuliinide kultiveerimisel. Täpsemalt on seda kasutatud leutsiinirikka korduva G-valgu-seotud retseptori (LGR5) ja selle rolli uurimisel käärsoolevähi metastaasides. Seda keskkonda on tõhusalt kasutatud mitmete käärsoole kartsinoomi rakuliinide, sealhulgas HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b ja TENN, kasvatamisel, võimaldades teadlastel süveneda käärsoolevähi metastaaside aluseks olevatesse mehhanismidesse. Lisaks rakendamisele vähiuuringutes on McCoy's 5A Medium osutunud asendamatuks osteoblastide uurimisel. Teadlased, kes uurivad kaltsiumivaeguse hüdroksüapatiidi ioonide reaktsioonivõimet standardse rakukultuuri keskkonnas, on kasutanud seda keskkonda osteoblastide kasvatamiseks. See rakendus on aidanud paremini mõista osteoblastide ja kaltsiumivaeguse hüdroksüapatiidi vahelisi vastasmõjusid, aidates kaasa edusammudele luu-uuringute valdkonnas. McCoy 5A keskkonna koostis on hoolikalt välja töötatud, muutes Basal Medium Eagle'is leiduvaid aminohappeid, et pakkuda maksavähirakkudele optimaalset toetust. See rikastatud koostis muudab keskkonna sobivaks mitmesugustele väljakujunenud rakuliinidele, samuti esmasrakkudele, suurendades veelgi selle mitmekülgsust ja rakendatavust erinevates uurimistingimustes. McCoy's 5A Mediumi biokeemilised ja füsioloogilised mõjud ulatuvad kaugemale maksavähirakkudest. Seda on edukalt kasutatud luuüdi, naha, igeme, neeru, omentumi, neerupealise, kopsu, põrna, roti embrüo ja muude rakutüüpide esmaste kultuuride kasvu toetamiseks. See lai kasutusala tõestab McCoy's 5A Mediumi laia kasulikkust erinevate rakutüüpide kasvu ja säilitamise toetamisel tervikliku bioloogilise uurimistöö jaoks. Koostis See McCoy's 5A keskmine (modifitseeritud) sisaldab 3,0 g/l glükoosi, stabiilset glutamiini, 2,0 mM naatrium-püruvaati ja 2,2 g/l NaHCO3. Kvaliteedikontroll pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20–25 °C.  Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes. Hooldus Hoida külmikus +2 °C kuni +8 °C pimedas kohas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37 °C vähendab toote kvaliteeti.  Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).  Kui kasutatakse ainult osa keskkonnast, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage toatemperatuuril. Kõigi keskkonna, välja arvatud baaskeskkonna, kõlblikkusaeg on 6–8 nädalat alates avamiskuupäevast. Koostis Komponendid mg/L Anorgaanilised sooladKaltsiumkloriid x 2H2O132,0 Magneesiumsulfaat97,67 Kaaliumkloriid400 Naatriumkloriid6460 Dinatriumvesinikfosfaat (veevaba)504,00 Muud komponendidD(+)-glükoos (veevaba)3000 Glutatioon (redutseeritud)0 Lihapepton600 Fenoolpunane naatriumsool11 AminohappedL-alaniin13,36 L-arginiin x HCl42,14 L-asparagiin x H2O45,03 L-asparagiinhape19,97 L-tsüsteiin x HCl x H2O31,75 L-glutamiin (stabiilne)219,15 L-glutamiinhape22,07 Glütsiin7,51 L-histidiin x HCl x H2O20,96 L-hüdroksüproliin19,67 L-isoleutsiin39,36 L-leutsiin39,36 L-lüsiin x HCl36,54 L-metioniin14,92 L-fenüülalaniin16,52 L-proliin17,27 L-seriin26,28 L-treoniin17,87 L-trüptofaan3,06 L-türosiini dinaatriumsool26,10 L-valiin17,57 Vitamiinidp-aminobensoehape1,0 Askorbiinhape0,56 D(+)-biotiin0,20 D-kaltsiumpantotenaat0,2 Koliinkloriid5 Foolhape10 Müo-inositool36 Nikotinaamid0 Nikotiinhape0,5 Püridoksaal HCl0,5 Püridoksiin HCl0,5 Riboflaviin0,2 Tiamiin HCl0,2 Vitamiin B122,0

30,00 €*
IMDM, w: 4,5 g/L glükoos, w: 4 mM L-glutamiin, w: 25 mM HEPES, w: 1,0 mM naatriumpüruvaat, w: 3,024 g/L NaHCO3
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) on kompleksne ja rikastatud kasvukeskkond rakukultuuride kasvatamiseks. IMDM on DMEMi modifikatsioon, mis sisaldab seleeni ning sisaldab võrreldes DMEMiga täiendavaid aminohappeid, vitamiine ja anorgaanilisi soolasid. Selles puudub raud ja seda tuleb täiendada veisefetaalse seerumiga (FBS). IMDM kasutab naatriumbikarbonaatpuhvrisüsteemi ja vajab füsioloogilise pH säilitamiseks 5-10% CO2 keskkonda.
IMDM sobib hästi kiiresti paljunevate, suure tihedusega rakukultuuride, sealhulgas Jurkat-, COS-7
- ja makrofaagirakkude kasvatamiseks. Erinevate rakukultuuride jaoks saadaval olevad IMDMi erinevad modifikatsioonid on leitavad meediumivaliku tööriista abil. Vedelkeskkonnad pakuvad olulisi toitaineid kõigi rakukultuuride jaoks. Iga meie kvaliteetne rakukultuurikeskkond on toodetud vastavalt algselt avaldatud valemile või modifikatsioonidele, mis on vajalikud kultuurikeskkonna järjepideva toimimise ja stabiilsuse tagamiseks.
IMDM vs. DMEM
IMDM sisaldab kaaliumnitraati raudnitraadi asemel ning HEPESi ja naatriumpüruvaati. IMDMi lisakomponendid muudavad selle sobivamaks spetsiaalsete rakutüüpide ja spetsiifiliste rakenduste jaoks kui DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM ja RPMI on erineva koostisega, mis võib olla oluline PMA/ionomütsiini stimuleerimisel. Üks oluline erinevus on Ca2+ kontsentratsioon. Kui RPMI sisaldab 0,42 mM Ca2+, siis IMDM sisaldab 1,49 mM.
Kvaliteedikontroll

pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.

Hooldus

Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37° C vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37° C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis




Koostisosad
mg/l


Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2 H2O
219,00



Kaaliumkloriid
330,00



Kaaliumnitraat
0.076



Magneesiumsulfaat veevaba
97,73



Naatriumkloriid
4,505.00



Naatriumdivesinikfosfaat veevaba
109,00



Naatriumseleniit
0,02


Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
4,500.00



HEPES
5,958.00



Naatriumpüruvaat
110,00



Punane fenool
15,00


Aminohapped
L-alaniin
25,00



L-arginiin x HCl
84,00



L-asparagiin x H2O
25,00



L-asparagiinhape
30,00



L-tsüstiin x 2HCl
91,24



L-Glutamiin
584,00



L-glutamiinhape
75,00



Glütsiin
30,00



L-Histidiin x HCl x H2O
42,00



L-isoleutsiin
104,80



L-leutsiin
104,80



L-Lüsiin x HCl
146,20



L-metioniin
30,00



L-fenüülalaniin
66,00



L-proliin
40,00



L-Seriin
42,00



L-treoniin
95,20



L-trüptofaan
16,00



L-Türosiin x 2Na
104,20



L-Valiin
93,60


Vitamiinid
D(+)-Biootiin
0.013



D-kaltsium-pantotenaat
4,00



Koliinkloriid
4,00



Foolhape
4,00



müo-Inositool
7,20

25,00 €*
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3
RPMI 1640 keskkond, tuntud ka kui RPMI keskkond, on väga mitmekülgne rakukultuurikeskkond, mida kasutatakse laialdaselt bioloogilistes uuringutes erinevate imetajarakkude kasvatamiseks. See keskkond, mille arendasid George E. Moore, Robert E. Gerner ja H. Addison Franklin 1966. aastal tuntud Roswell Park Comprehensive Cancer Center'is, on saanud oma nime Roswell Park Memorial Institute'i (RPMI) päritolu järgi.
Esialgu inimleukeemiarakkude kasvu toetamiseks nii suspensiooni
- kui ka monokihiliste kultuuride puhul loodud RPMI 1640 keskkond on teadlaste ja kaubanduslike tarnijate muudatuste kaudu muutunud sobivaks mitmesuguste imetajarakkude jaoks. See sobib erakordselt hästi selliste rakuliinidega nagu HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrotsüüdid ja kartsinoomid.
RPMI 1640 Medium eristub teistest rakukultuurikeskkondadest oma unikaalse koostise poolest. See sisaldab märkimisväärses koguses fosfaate, aminohappeid ja vitamiine. Eelkõige sisaldab see biotiini, B12-vitamiini ja PABA-d, mis puuduvad Eagle's Minimal Essential Medium'is või Dulbecco's Modified Eagle Medium'is. Lisaks sellele on RPMI 1640 Mediumis oluliselt kõrgemad inositooli ja koliini vitamiinide kontsentratsioonid. See ei sisalda aga valke, lipiide ega kasvufaktoreid. Sellest tulenevalt on rakkude optimaalsete kasvutingimuste tagamiseks tavaliselt vaja lisada 10% veiste loote seerumit (FBS).
RPMI 1640 keskkonda puhverdav süsteem põhineb naatriumbikarbonaadil ja vajab 5-10% CO2 keskkonda, et säilitada füsioloogiliselt sobiv pH. Redutseeriva aine glutatiooni lisamine eristab seda keskkonda teistest veelgi.
Kvaliteedikontroll

Steriilselt filtreeritud


Säilitamine ja säilivusaeg

Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.


Veotingimused

Keskkonnatemperatuur


Hooldus

Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.



Koostis




Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)


Aminohapped
Glütsiin
10.00



L-Alanüül-L-glutamiin
434.40



L-arginiin
200.00



L-asparagiinH2O
56.82



L-asparagiinhape
20.00



L-tsüstiin 2HCl
65.20



L-glutamiinhape
20.00



L-Histidiin HClH2O
20.27



L-Hüdroksü-L-proliin
20.00



L-isoleutsiin
50.00



L-leutsiin
50.00



L-Lüsiin HCl
40.00



L-metioniin
15.00



L-Fenüülalaniin
15.00



L-proliin
20.00



L-Seriin
30.00



L-treoniin
20.00



L-trüptofaan
5.00



L-Türosiin 2Na 2H2O
28.83



L-Valiin
20.00


Vitamiinid
p-Aminobensoehape
1.00



D-Biotiin
0.20



Koliinkloriid
3.00



D-kaltsium-pantotenaat
0.25



Foolhape
1.00



myo-Inositool
35.00



Nikotiinamiid
1.00



Püridoksiin HCl
1.00



Riboflaviin
0.20



Tiamiini HCl
1.00



B12-vitamiin
0.005


Anorgaanilised soolad
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Muud komponendid
D-glükoos
2000.00



L-glutatioon redutseeritud
1.00



Fenoolpunane naatriumsool
5.30

25,00 €*

Oleme tuvastanud, et asute teises riigis või kasutate hetkel valitud keelest erinevat brauseri keelt. Kas soovite nõustuda soovitatud seadistustega?

Sulge