Wilms8 细胞
一般信息
| 说明 | Wilms8 细胞系来源于一名患有种系 WT1 基因突变的儿科患者的原发性 Wilms 肿瘤。该细胞系的特点是 WT1 基因发生了同卵无义突变(c.1168 C>T,p.R390X),导致 WT1 功能完全丧失。WT1 对肾脏的正常发育至关重要,它的失活是 Wilms 肿瘤某些侵袭性亚型的共同特征,尤其是那些表现出间质分化的亚型。因此,Wilms8 为研究 WT1 缺失对肿瘤发生的影响提供了一个有价值的模型,尤其是在 Wilms 肿瘤具有明显间质成分的情况下。 除了 WT1 基因突变外,Wilms8 细胞还携带 CTNNB1 基因突变(p.S45A),该基因编码 β-Catenin,它是 Wnt 信号通路的一个关键调节因子。丝氨酸 45 的突变破坏了导致 β-Catenin 降解的正常磷酸化过程,导致其在细胞核中稳定和积累。这导致 Wnt 信号的持续激活,从而推动细胞增殖,并导致 Wilms8 细胞系的致癌特性。Wilms8 中 WT1 缺失与 Wnt 信号异常之间的相互作用使其成为了解 Wilms 肿瘤生物学中这些通路的分子机制的重要模型。 Wilms8 细胞表现出间充质表型,其特征是表达波形蛋白而不表达细胞角蛋白等上皮标记物。这与原始肿瘤中观察到的基质分化一致。这些细胞表现出有限的进一步间质分化能力,如在特定条件下形成肌肉样细胞。对 Wilms8 的蛋白质组分析表明,包括 PDGFRβ 和 AXL 在内的多种受体酪氨酸激酶(RTK)被激活,它们参与了细胞存活、迁移和增殖等关键过程。下游信号通路的激活,尤其是 MAPK 和 PI3K/AKT 通路的激活,进一步促成了 Wilms8 细胞的侵袭性特征。 总之,Wilms8 细胞系是研究由 WT1 缺失和 Wnt 信号异常驱动的 Wilms 肿瘤分子基础的重要工具。它的遗传和表型特征使其成为研究这些关键通路之间相互作用的强大平台,并可用于确定具有基质成分的 Wilms 肿瘤的潜在治疗靶点。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 肾脏 |
| 疾病 | Wilms 肿瘤 |
| 应用 | 体外细胞培养模型。生化研究 |
特点
| 年龄 | 8 个月 |
|---|---|
| 性别 | 男 |
| 种族 | 高加索人 |
| 形态学 | 纺锤形 |
| 细胞类型 | Wilms 细胞 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | Wilms8(Cytion 目录号 300416) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_A5SJ |
生物分子数据
| 突变概况 | WT1 突变状态:同基因 c.1168C>T,p.390x,LOH: , CTNNB1 突变状态:异基因 TCT>GCT,p.S45A |
|---|
处理
| 培养基 | MSCGM 试剂盒(龙沙公司提供) |
|---|---|
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
|
| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
|---|---|
| HLA 等位基因 |
A*: '02:01:01, '03:01:01
B*: '15:01:01, '37:01:01
C*: '04:01:01, '06:02:01
DRB1*: '08:01:01G, '11:01:01
DQA1*: '04:01:01, '05:05:01
DQB1*: '03:01:01, '04:02:01
DPB1*: '03:01:01, '06:01:01
E: '01:03:02
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