Клітини P19 — дослідження ембріональної карциноми з використанням клітин P19
P19 — це лінія клітин ембріональної карциноми мишей. Вона широко використовується в біомедичних дослідженнях, головним чином для вивчення біології розвитку, біології стовбурових клітин, клітинної диференціації та скринінгу лікарських препаратів. Оскільки клітини P19 мають здатність до диференціації, вони можуть бути корисними для дослідження складних біологічних процесів, таких як формування тканин та ранній ембріональний розвиток. У цій статті ми розглянемо основні відомості про клітини P19, отримані з мишей.
- Середовище для культивування
- Середовище DMEM/Ham's F12, що містить 5 % фетальної сироватки бика, 3,1 г/л глюкози, 1,6 мМ L-глутаміну, 1,0 мМ пірувату натрію, 15 мМ HEPES та 1,2 г/л NaHCO₃.
- Час подвоєння
- Час подвоєння клітин лінії P19 становить приблизно 2–3 дні.
- Тип росту
- Лінія ембріональних карциномних клітин P19 є адгезивною.
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступна у
- Cytion — Замовити P19
- Загальні характеристики та походження клітин P19
- Інформація щодо культивування клітин P19
- Клітинна лінія P19: переваги та недоліки
- Дослідницьке застосування клітин P19
- Придбайте клітинну лінію P19 вже сьогодні
- Клітини P19: наукові публікації
- Ресурси щодо клітинної лінії P19: протоколи, відео та інше
- Дослідження клітинної лінії P19: поширені запитання
- Література
- Поширені запитання
Загальні характеристики та походження клітин P19
Перед початком роботи з клітинною лінією важливо знати її загальні характеристики та походження. У цьому розділі розглядаються такі питання: Що таке клітинна лінія P19? Який розмір клітин P19? Яке походження клітин P19?
- P19 — це тип плюрипотентних клітин ембріональної карциноми, спочатку отриманих із тератокарциноми, що розвинулася у миші лінії C3H/He. Клітинну лінію вперше створили у 1982 році Макберні та Роджерс.
- Клітини P19 можуть безперервно рости в культуральному середовищі, збагаченому сироваткою. Вони можуть диференціюватися в інші типи клітин під впливом нетоксичних препаратів, таких як ретиноєва кислота та диметилсульфоксид (DMSO) [1].
- Ці клітини карциноми миші мають епітеліоподібну морфологію.
- Клітинна лінія P19 має еуплоїдний чоловічий каріотип (n=40; XY).
Інформація щодо культивування клітин P19
Клітинна лінія P19 широко культивується в дослідницьких лабораторіях завдяки своїм унікальним характеристикам. Її культивування є простим і зручним. У цьому розділі наведено всю ключову інформацію, необхідну для утримання та розмноження клітинної культури P19. Ми дізнаємося: Який час подвоєння клітин P19? Як культивувати клітинну лінію P19? Чи є P19 адгезивною клітинною лінією?
Ключові моменти культивування клітин P19
Час подвоєння:
Час подвоєння клітин лінії P19 становить приблизно 2–3 дні.
Адгезивна чи суспензійна:
Клітинна лінія ембріональної карциноми P19 є адгезивною.
Коефіцієнт субкультури:
Клітини P19 слід пересівати кожні 48 годин, при цьому для цих клітин слід дотримуватися коефіцієнта поділу 1:10. Адгезивні клітини промивають 1X фосфатно-буферним сольовим розчином та інкубують з Accutase до дисоціації клітин. До клітин додають культуральне середовище, а потім їх збирають шляхом центрифугування. Зібрані клітини обережно ресуспендують і розливають у нові колби.
Середовище для росту:
Середовище DMEM/Ham's F12, що містить 5 % фетальної бичачої сироватки, 3,1 г/л глюкози, 1,6 мМ L-глутаміну, 1,0 мМ пірувату натрію, 15 мМ HEPES та 1,2 г/л NaHCO₃, використовується для культивування клітин P19.
Умови культивування:
Для вирощування та культивування ембріональної карциномної клітинної лінії P19 необхідний зволожений інкубатор, налаштований на 37 °C з подачею 5 % CO₂.
Зберігання:
Заморожені флакони з клітинами P19 слід зберігати при температурі нижче -150 °C у морозильній камері або у паровій фазі рідкого азоту для збереження життєздатності клітин протягом тривалого часу.
Процес заморожування та середовище:
Для заморожування клітин P19 можна використовувати середовища CM-1 або CM-ACF, застосовуючи метод повільного заморожування, який захищає клітини від будь-якого шоку та зберігає їх життєздатність.
Процес розморожування:
Заморожені клітини P19 можна розморожувати у водяній бані при температурі 37 °C шляхом інтенсивного струшування флакона протягом 40–60 секунд. До клітин додають свіже середовище та центрифугують для видалення елементів середовища для заморожування. Клітинний осад знову ресуспендують, а клітини переносять у нову колбу для культивування.
Рівень біобезпеки:
Для роботи з клітинною лінією P19 необхідні лабораторні умови рівня біобезпеки 1.
Клітинна лінія P19: переваги та недоліки
У цьому розділі розглядаються переваги та недоліки клітинної лінії P19.
Переваги
- Потенціал диференціації: Клітини P19 можуть диференціюватися в різні типи клітин, зокрема кардіоміоцити, нейрони та клітини мікроглії. Для диференціації їм потрібні нетоксичні препарати, такі як ретиноєва кислота та диметилсульфоксид (DMSO). Ретиноєва кислота індукує розвиток нейронів, мікроглії та астроглії, тоді як ДМСО ініціює розвиток пульсуючих кардіоміоцитів та клітин гладких м’язів. Таким чином, клітини P19 є корисними для вивчення клітинної диференціації та процесів розвитку.
- Модельна система: Плюрипотентна лінія ембріональних карциномних клітин P19 є цінною моделлю для вивчення раннього ембріонального розвитку. Дослідники використовують клітини P19 для з’ясування сигнальних шляхів клітин та клітинних і молекулярних механізмів, що беруть участь у цих процесах.
Недоліки
- Мишаче походження: P19 — це лінія клітин ембріональної карциноми мишей. Отже, результати досліджень із використанням цих клітин можуть не повністю відповідати біології та процесам людини.
Наукові застосування клітин P19
Клітини P19 мають кілька напрямків застосування в наукових дослідженнях завдяки їхній здатності до диференціації та значенню для біології розвитку та досліджень стовбурових клітин. Серед важливих напрямків застосування ембріональних карциномних клітин P19 можна виділити:
- Дослідження диференціації клітин: Як відомо, клітини P19 можуть диференціюватися в нейрони, мікроглію, клітини гладких м’язів та кардіоміоцити; тому їх широко використовують для вивчення процесів клітинної диференціації. Крім того, це допомагає дослідникам вивчати розвиток нервової та серцевої систем та відповідні механізми. Дослідження, проведене у 2018 році, показало, що активні форми кисню (АФК) спрямовують диференціацію клітин P19 у певні типи клітин та запобігають індукції інших [3]. В іншому дослідженні вивчався процес нервової диференціації, опосередкований ретиноєвою кислотою, і було виявлено участь сигнального шляху PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Біологія розвитку: Клітини P19 є надзвичайно цінною моделлю для вивчення раннього ембріонального розвитку. Вони допомагають дослідникам зрозуміти складні біологічні процеси, такі як формування тканин під час ембріонального розвитку. У ході дослідження використовували клітини P19 та вивчали молекулярні фактори, що сприяють утворенню дефекту міжшлуночкової перегородки (VSD). Результати показали, що довга некодуюча РНК SNHG6 сприяє розвитку VSD шляхом негативної регуляції miRNA-101 та активації шляху Wnt/β-катеніну [5].
- Тестування лікарських засобів: клітинну лінію ембріональної карциноми мишей P19 також використовують для скринінгу потенційних кандидатів на лікарські засоби. У ході одного з досліджень використовували диференційовані нейрони клітин P19 та вивчали нейропротекторні ефекти синтетичного L-допа та водного екстракту насіння Mucuna pruriens щодо інгібування ацетилхолінестерази. Результати показали, що рослинний екстракт продемонстрував багатообіцяючі результати порівняно з L-допа [6].
Придбайте клітинну лінію P19 вже сьогодні
Клітини P19: Наукові публікації
У цьому розділі статті ми розглянемо кілька цікавих наукових публікацій, присвячених клітинам P19.
Ця стаття була опублікована в журналі «Oncology Reports» у 2017 році. У дослідженні висунуто гіпотезу, що статеві гормони гіпофіза стимулюють адгезію, проліферацію та міграцію клітинних ліній тератокарциноми, зокрема клітин P19.
Довга некодуюча РНК uc.4 впливає на диференціацію клітин через сигнальний шлях TGF-бета
У цій публікації в журналі «Experimental & Molecular Medicine» (2018) використовували клітини P19 та досліджували функцію довгої некодуючої РНК uc.4. Результати показали, що uc.4 впливає на диференціацію клітин шляхом модуляції сигнального шляху TGF-бета.
Ця наукова стаття була опублікована у 2018 році в журналі «Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine». Дослідження показало, що екстракт природної мозкової тканини та тривимірна клітинна культура можуть прискорити диференціацію клітин ембріональної карциноми P19 у нейрональні клітини.
Це дослідження було опубліковано у 2020 році в журналі «Journal of Ethnopharmacology». У дослідженні було висунуто гіпотезу, що екстракт листя Cichorium intybus L. може індукувати диференціацію клітин ембріональної карциноми P19 у β-клітини підшлункової залози, що виробляють інсулін.
Це дослідження було опубліковано в журналі «Molecules» (2022). У ньому досліджувалися нейропротекторні ефекти та інгібуюча дія на ацетилхолінестеразу екстракту насіння Mucuna pruriens на нейрони клітин лінії P19.
Ресурси щодо клітинної лінії P19: протоколи, відео та інше
Нижче наведено кілька ресурсів щодо клітин P19.
- Протокол нейрональної диференціації клітин P19: Ця стаття містить протокол нейрональної диференціації клітин P19 та іншу корисну інформацію про диференціацію клітин P19.
- Трансфекція клітин P19: за цим посиланням ви зможете ознайомитися з протоколом трансфекції клітин P19.
За цим посиланням наведено протокол культивування клітин P19.
- Клітини P19: Цей веб-сайт містить усю корисну інформацію про клітинну лінію P19, включаючи умови культивування, середовища для клітин P19, поділ клітин та багато іншого.
Дослідження клітинної лінії P19: Поширені запитання
Література
- McBurney, M.W., Клітини ембріональної карциноми P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): с. 135–40.
- Бресслер, Дж. та ін., Лінія клітин ембріональної карциноми P19: модель для вивчення взаємодій між генами та навколишнім середовищем. Cell Culture Techniques, 2011: с. 223–240.
- Пашковська, Н., У. Гей та Г. Рьодель, Мітохондріальні АФК керують диференціацією мишачих плюрипотентних клітин P19. Stem Cell Research, 2018. 30: с. 180–191.
- Фу, Ф. та ін., Все-транс-ретиноїдна кислота індукує диференціацію клітин P19 у нейрони, залучені до сигнального шляху PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): с. 4386–4396.
- Цзян, Ю., та ін., Довга некодуюча РНК SNHG6 сприяє утворенню дефекту міжшлуночкової перегородки шляхом негативної регуляції miR-101 та активації шляху Wnt/β-катеніну. «Die Pharmazie — Міжнародний журнал фармацевтичних наук», 2019. 74(1): с. 23–28.
- Камкаен, Н. та ін., Водний екстракт насіння Mucuna pruriens продемонстрував кращі нейропротекторні ефекти та інгібуючу дію на ацетилхолінестеразу порівняно із синтетичною L-допою. Molecules, 2022. 27(10): с. 3131.