Клітини NIH-3T3: розвиток досліджень фібробластів та застосування клітин NIH-3T3
Клітинна лінія NIH-3T3, створена у 1962 році Говардом Гріном та Джорджем Тодаро в Медичній школі Нью-Йоркського університету з тканини 17-денного ембріона миші швейцарського альбіноса, стала фундаментальним ресурсом у біомедичних дослідженнях. Відомі своєю високою сприйнятливістю до утворення вогнищ лейкемічного та саркомного вірусів, клітини NIH-3T3 слугують важливим інструментом для численних наукових досліджень, зокрема у галузі вірусної онкології, аналізу експресії генів та вивчення динаміки клітинного росту. Назва «3T3» відображає метод культивування клітин, позначаючи інтервал «3-денного перенесення» з початковою щільністю висівання 3 × 10^5 клітин, що підкреслює стандартизовані умови, за яких ці клітини вперше були культивовані та розмножені.
- Середовище для культивування
- Див. сторінку продукту
- Час подвоєння
- Див. сторінку продукту
- Тип росту
- Адгезивний
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступно у
- Cytion — Замовити NIH-3T3
Різноманітні морфологічні особливості та сфери застосування клітин NIH-3T3
Однією з характерних особливостей клітин NIH-3T3 є їхня морфологічна адаптивність, яка значно варіюється залежно від ступеня конfluентності культури. При низькій щільності ці фібробласти мають веретеноподібну структуру поодиноких клітин, яка перетворюється на щільні, закручені структури, коли популяція досягає конfluентності. Маючи середній діаметр близько 18 мкм, клітини NIH-3T3 є універсальною моделлю для поглиблених досліджень у галузі клітинної біології — від механізмів відновлення тканин до складних шляхів регуляції клітинного циклу.
Інформація щодо культивування
Основні дані щодо культивування:
Час подвоєння популяції: приблизно 20 годин.
Тип росту: адгезивні культури.
Щільність висівання: Рекомендована: 3–4 × 10⁴ клітин/см².
Середовище для культивування: DMEM або Ham's F12, з додаванням 5 % FBS та 2,5 мМ L-глутаміну.
Умови культивування: Утримувати при температурі 37 °C у зволоженому інкубаторі з 5% CO₂.
Зберігання: Зберігати при температурі нижче -195 °C у паровій фазі рідкого азоту.
Метод заморожування: Використовувати середовище CM-1 або CM-ACF; застосовувати метод повільного заморожування (зниження температури на 1 °C).
Протокол розморожування: швидке нагрівання у водяній бані при 37 °C, після чого — центрифугування для видалення заморожувального середовища, а потім ресуспендування у середовищі для культивування.
Рівень біобезпеки: Для культивування необхідні умови рівня біобезпеки 1.
Швейцарська миша-альбінос у лабораторії.
Переваги та недоліки використання клітин NIH 3T3
Переваги
Ефективність трансфекції: Клітини NIH-3T3, відомі своїми високими показниками трансфекції, чудово підходять як для досліджень тимчасової, так і стабільної експресії генів, при цьому сумісні з різноманітними методами трансфекції.
Користь як живильного шару: Ці клітини часто слугують живильним шаром для кокультур з такими клітинами, як кератиноцити та стовбурові клітини, завдяки виділенню ними факторів росту, що сприяють росту клітин у кокультурі.
Дослідження стовбурових клітин: Клітини NIH-3T3 є кращим вибором у дослідженнях стовбурових клітин для індукції плюрипотентності без генетичної модифікації та забезпечення сприятливого середовища для диференціації стовбурових клітин.
Стабільність культури: Клітини NIH-3T3 відомі своєю стабільністю та низькою частотою спонтанної трансформації. Однак за певних умов або після впливу конкретних онкогенів чи мутагенів клітини NIH-3T3 можуть зазнавати спонтанної трансформації. Ця трансформація може призвести до набуття ракових властивостей, таких як неконтрольований ріст, втрата контактного гальмування та здатність утворювати пухлини при введенні в сприйнятливих хазяїв.
Недоліки
Неоднорідний розмір клітин: Подовжена, веретеноподібна морфологія клітин NIH-3T3 може варіюватися, що ускладнює аналіз зображень під час досліджень.
Схильність до інфекцій: Ці клітини схильні до бактеріальних та мікоплазмових інфекцій, якщо їх не утримувати в суворих асептичних умовах, що потенційно може вплинути на цілісність експерименту.
Застосування клітин NIH-3T3 у наукових дослідженнях
Дослідження трансфекції ДНК: Стійкість клітин NIH-3T3 робить їх ідеальними для введення та вивчення функції різних генів, що було продемонстровано в дослідженнях, присвячених вивченню білків, таких як NAB2-STAT6, та їх ролі в клітинних процесах.
Клітинні аналізи: їхня надійність поширюється на різні аналізи, включаючи аналізи життєздатності, апоптозу та формування скупчень, що дає змогу отримати уявлення про клітинні реакції за різних експериментальних умов.
Дослідження клітинного циклу: Можливість простого регулювання клітинного циклу цієї клітинної лінії за допомогою рівня сироватки робить її потужною моделлю для вивчення регуляції клітинного циклу та його порушень у контексті захворювань.
Підвищіть ефективність своїх досліджень за допомогою клітин NIH-3T3
Огляд основних досліджень із використанням клітинної лінії фібробластів NIH 3T3
Клітинна лінія NIH-3T3 відіграла ключову роль у численних дослідницьких проектах, що охоплюють різні аспекти клітинної біології. Нижче наведено деякі значущі дослідження, в яких використовувалися ці клітини:
- Дослідження фузійного білка NAB2-STAT6: опубліковане в журналі «Biochemical and Biophysical Research Communications», це дослідження присвячене вивченню впливу фузійного білка NAB2-STAT6 на клітини NIH-3T3, зокрема його ролі у посиленні клітинного росту та міграції через регуляцію EGR-1.
- Дослідження APOBEC3 та мишачого лейкемічного вірусу: Це дослідження, опубліковане в журналі «Virology», присвячене вивченню гіпермутації мишачого лейкемічного вірусу AKV у клітинах NIH-3T3, що експресують мишачий ген APOBEC3.
- Оцінка антиметастатичного потенціалу епігенетичних препаратів: У журналі «Oncotargets and Therapy» це дослідження оцінює антиметастатичну дію гідралазину та вальпроєвої кислоти на трансформовані RAS клітини NIH-3T3.
- Вплив байкалеїну на проліферацію клітин NIH-3T3 та синтез колагену: У цьому дослідженні на основі клітин NIH-3T3 вивчається, як байкалеїн впливає на проліферацію клітин та синтез колагену шляхом модуляції осі miR-9/інсуліноподібний фактор росту-1.
- Дослідження дефіциту рибофлавіну та пухлиноутворення: У цьому дослідженні наведено результати щодо того, як дефіцит рибофлавіну в клітинах NIH-3T3 сприяє пухлиноутворенню шляхом стимулювання проліферації клітин та порушення регуляції генів клітинного циклу.
Необхідні ресурси для досліджень клітин NIH-3T3
Для дослідників, зацікавлених у роботі з клітинами NIH-3T3, доступні різноманітні ресурси, що містять інструкції щодо культивування та експериментальних протоколів:
- Формування сфероїдів у клітинах NIH-3T3: Це відео містить детальний покроковий опис формування сфероїдів — техніки 3D-культивування клітин, яка об’єднує клітини NIH-3T3 у кластери, пропонуючи більш фізіологічно релевантну модель для досліджень.
- Моніторинг росту клітин NIH-3T3: за допомогою системи візуалізації живих клітин JuLI Br у цьому відео зафіксовано динаміку росту клітин NIH-3T3 протягом 65 годин, що демонструє проліферацію клітин у реальному часі.
Ці матеріали покликані підтримати ваші наукові дослідження з використанням клітин NIH-3T3, забезпечуючи основу для успішних експериментів та відкриттів.
Поширені запитання про клітини NIH-3T3
Література
- Rahimi, A.M., M. Cai та S. Hoyer-Fender, «Гетерогенність клітинної лінії фібробластів NIH3T3». Cells, 2022. 11(17): с. 2677.
- Лейбігер, К. та ін., «Перша молекулярно-цитогенетична характеристика клітинної лінії NIH 3T3 з високою роздільною здатністю за допомогою мишачого багатоколірного фарбування». Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): с. 306–312.
- Ван, Х.-С. та ін., Порівняльний аналіз різних підкладкових шарів з фібробластами 3T3 для культивування лімбальних стовбурових клітин кроликів. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): с. 1021.
- Ван, З., та ін., Диференціація нейрональних клітин із фібробластів NIH/3T3 за визначених умов. «Development, growth & differentiation», 2011. 53(3): с. 357–365.
- Парк, Й.-С. та ін., Фузійний білок NAB2-STAT6 опосередковує клітинну проліферацію та онкогенну прогресію через регуляцію EGR-1. «Biochemical and Biophysical Research Communications», 2020. 526(2): с. 287–292.
- Маттссон, М., Експресія Sloppymerase™ у клітинах NIH/3T3: дослідження універсальності схильної до помилок фузійної полімерази. 2021.
- Сахінтурк, В. та ін., Акриламід проявляє свою цитотоксичність у фібробластах NIH/3T3 шляхом апоптозу. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): с. 481–489.
- Лусі, Е.А. та Ф. Каїччі, «Відкриття першого ретрогігантського вірусу людини: опис його морфології, ретровірусної кінази та здатності індукувати пухлини у мишей». bioRxiv, 2019: с. 851063.
- Ендо, М. та ін., Сигнальний шлях E2F1‐Ror2 опосередковує скоординовану транскрипційну регуляцію, сприяючи переходу з фази G1 у фазу S у фібробластах NIH/3T3, стимульованих bFGF. The FASEB Journal, 2020. 34(2): с. 3413–3428.
- Лонг, Л. та ін., Дефіцит рибофлавіну сприяє пухлиноутворенню в клітинах HEK293T та NIH3T3 шляхом підтримки клітинної проліферації та регулювання транскрипції генів, пов’язаних із клітинним циклом. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): с. 834–843.