Клітини NCI-H1299: дослідження та клінічне значення клітин раку легенів NCI-H1299

Інформація щодо культивування

Підтримка культури клітинної лінії є складним завданням, доки ви не знаєте всієї ключової інформації про неї, зокрема: Який час подвоєння NCI-H1299? Яка щільність висівання NCI-H1299? Яке середовище використовується для культивування клітин NCI-H1299? Як культивувати клітинні лінії NCI-H1299? Цей розділ допоможе вам дізнатися відповіді на всі ці питання щодо культивування клітин NCI-H1299.

Ключові моменти культивування клітин NCI-H1299

Час подвоєння:

Час подвоєння клітин NCI-H1299 становить від 22 до 30 годин.

Адгезивні або у суспензії:

NCI-H1299 — це адгезивна клітинна лінія.

Коефіцієнт субкультури:

Клітини NCI-H1299 субкультурують у рекомендованому співвідношенні від 1:3 до 1:6. Для висівання адгезивні клітини промивають 1x PBS та інкубують з розчином для пасажування Accutase протягом 8–10 хвилин при кімнатній температурі. Відокремлені клітини додають до свіжого культурального середовища та центрифугують. Потім осад клітин ресуспендують, а клітини переносять у нові колби, що містять середовище для росту.

Середовище для росту:

RPM1 1640 є ідеальним середовищем для клітин NCI-H1299. Вона доповнюється 10 % сироваткою ембріонів великої рогатої худоби, 4500 мг/л глюкози, 2,0 мМ L-глутаміну, 1 мМ пірувату натрію, 1500 мг/л NaHCO₃ та 10 мМ HEPES. Середовище слід оновлювати 2–3 рази на тиждень.

Умови культивування:

Культури клітин раку легенів NCI-H1299 утримують у зволоженому інкубаторі при температурі 37 °C з подачею 5 % CO₂.

Зберігання:

Клітинну лінію NCI-H1299 можна довгостроково зберігати у паровій фазі рідкого азоту або в морозильних камерах з ультранизькою температурою нижче -150 °C.

Процес заморожування та середовище:

CM-1 або CM-ACF — середовища для заморожування клітин NCI-H1299. Клітини заморожують за допомогою процесу повільного заморожування, який забезпечує зниження температури лише на 1 градус за хвилину, щоб зберегти життєздатність клітин.

Процес розморожування:

Заморожені клітини NCI-H1299 швидко перемішують у попередньо нагрітій водяній бані при температурі 37 градусів Цельсія протягом 40–60 секунд, доки не залишиться невеликий шматочок льоду. До розморожених клітин додають свіже середовище, і їх можна відразу культивувати в нових колбах або відцентрифугувати. У першому випадку середовище слід замінити через 24 години інкубації. Центрифугування допомагає видалити залишки середовища для заморожування. Після цього зібрані клітини ресуспендують у свіжому середовищі та переносять у нову колбу для культивування.

Рівень біобезпеки:

Для роботи з клітинною культурою NCI-H1299 необхідна лабораторія рівня біобезпеки 1.

Придбати клітинну лінію NCI-H1299: високоякісні дослідницькі інструменти для вивчення біології раку легенів

Переваги та недоліки клітин NCI-H1299

Як і інші лінії ракових клітин людини, NCI-H1299 також має деякі характерні особливості, пов’язані з певними перевагами та недоліками. У цій статті ми узагальнили кілька найважливіших із них.

Переваги

Основними перевагами клітинної лінії недрібноклітинного раку легенів NCI-H1299 є:

• Модель раку легенів in vitro

  Клітинні лінії NCI-H1299 були отримані з метастазів у лімфатичних вузлах при карциномі легенів і, отже, мають відносно схожі властивості. Тому ці клітини можуть слугувати моделлю in vitro для дослідження біології раку легенів, клітинних та молекулярних механізмів, а також для скринінгу та тестування потенційних терапевтичних засобів.

• Простота культивування

  Клітини NCI-H1299 легко культивувати та підтримувати в умовах дослідницької лабораторії. Немає складних вимог та процедур щодо культивування клітин.

• Мутації P53 та KRAS у клітинах NCI-H1299

  У клітинах NCI-H1299 відсутня експресія гена p53, що дозволяє клітинам інтенсивно проліферувати. Крім того, вони мають мутацію KRAS, яка сприяє росту, проліферації, інвазії та міграції клітин. З огляду на це, дослідники використовують клітини H1299 для вивчення молекулярних механізмів, пов’язаних із мутаціями KRAS та P53.

Недоліки

Недоліками клітин NCI-H1299 є:

• Тканинна специфічність

  Клітини NCI-H1299 походять із тканини легенів. Тому їхнє застосування здебільшого обмежується дослідженнями карциноми легенів. Вони можуть не повністю відображати гетерогенність та загальні характеристики інших типів раку.

Дослідницькі застосування клітин NCI-H1299

Клітинна лінія NCI-H1299 широко використовується в дослідженнях раку легенів. Нижче наведено кілька перспективних напрямків застосування цієї клітинної лінії.

• Біологія раку: клітини NCI-H1299 є чудовим дослідницьким інструментом для вивчення розвитку та прогресування раку, а також пов’язаних з цим клітинних і молекулярних механізмів. Ці клітини мають певні мутації, що дозволяє дослідникам вивчати відповідну поведінку ракових клітин, сигнальні шляхи та профілі експресії генів. У кількох дослідженнях клітинна лінія NCI-H1299 недрібноклітинного раку легенів використовувалася для вивчення біології раку легенів. Наприклад, у дослідженні, проведеному в 2018 році, за допомогою клітин NCI-H1299 вивчався сигнальний шлях, залучений до апоптозу клітин раку легенів. Дослідники виявили, що шлях PI3K/AKT сприяє проліферації клітин, а його інгібування може спричинити загибель ракових клітин [1]. Аналогічно, в іншому дослідженні вивчалися механізми, що беруть участь у епітеліально-мезенхімальному переході (ЕМТ) клітин NCI-H1299. У цьому дослідженні було висунуто гіпотезу, що позаклітинний білок SPARC (секретований білок, кислий і багатий на цистеїн) сприяє EMT та міграції клітин NCI-H1299, тим самим сприяючи пухлиноутворенню — білок SPARC діє як медіатор сигнального шляху TGF-β1 [2]. 

• Розробка та скринінг лікарських засобів: клітинна лінія NCI-H1299, що походить від раку легенів людини, широко використовується для оцінки токсичності та ефективності потенційних лікарських засобів. Крім того, її застосовують дослідники для вивчення механізму дії протипухлинних препаратів. У дослідженнях ці клітини також використовували для виявлення можливих мішеней для лікарських засобів та механізмів резистентності. Наприклад, у дослідженні, проведеному Сяо-Юнь Шень та колегами, вивчався протираковий потенціал природної сполуки бруцеїну D (BD). Результати показали, що BD суттєво гальмує проліферацію, інвазію та міграцію клітин NCI-H1299. Отже, його можна розглядати як потенційну ад’ювантну терапію для лікування недрібноклітинного раку легенів [3]. Аналогічно, в одному дослідженні оцінювали цитотоксичні ефекти ксантохумолу як окремо, так і в поєднанні з хіміотерапевтичним препаратом цисплатином на клітини раку легенів NCI-H1299 [4].

Часті запитання про клітинну лінію NCI-H1299

Література

1. Gu, J. та ін., Дослідження індукованого EGCG апоптозу в клітинах раку легенів шляхом інгібування сигнального шляху PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): с. 4557–4563.
2. Sun, W., та ін., SPARC діє як медіатор TGF-β1 у сприянні епітеліально-мезенхімальному переходу в клітинах раку легенів A549 та H1299. Biofactors, 2018. 44(5): с. 453–464.
3. Шень, С.-Ю. та ін., Дослідження механізму дії бруцеїну D у лікуванні клітин недрібноклітинного раку легенів H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): с. 500.
4. Лонг, Б. та ін., Цитотоксична дія ксантохумолу та його комбінації з цисплатином на клітини метастатичного раку легенів людини H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): с. 1–15.