Поради з безпеки при роботі з рідким азотом для надійного зберігання клітин

У лабораторіях клітинних культур рідкий азот необхідний для довготривалого зберігання і збереження цінних клітинних ліній. У компанії Cytion ми надаємо пріоритет як якості наших клітинних ліній, так і безпеці лабораторного персоналу, який працює з кріогенними матеріалами. У цьому всеосяжному посібнику викладено найважливіші заходи безпеки та найкращі практики роботи з рідким азотом при зберіганні клітин.

Основні засоби індивідуального захисту (ЗІЗ) для роботи з рідким азотом

При роботі з рідким азотом для збереження клітинних ліній, таких як клітини HeLa або MCF-7, використання належних ЗІЗ не підлягає обговоренню. Для захисту від бризок і парів, які можуть завдати серйозної шкоди очам і тканинам обличчя, обов'язковим є захисний козирок на все обличчя. Термоізольовані кріогенні рукавички повинні добре закривати передпліччя, оскільки стандартні лабораторні рукавички не забезпечують достатнього захисту від екстремального холоду. В якості зовнішнього захисного шару слід носити лабораторний халат, в ідеалі доповнений пластиковим фартухом з захистом від бризок, щоб забезпечити додатковий захист від випадкових розливів. Під час перенесення клітин з нашого середовища для заморожування CM-1 у сховище рідкого азоту переконайтеся, що ваш ЗІЗ знаходиться в хорошому стані, без ознак зносу або пошкоджень. Пам'ятайте, що навіть невеликий вплив рідкого азоту може призвести до негайного пошкодження тканин, тому комплексне ЗІЗ є необхідним при кожній взаємодії з системами зберігання LN2.

Вимоги до вентиляції та моніторинг кисню

Належна вентиляція має вирішальне значення при зберіганні цінних дослідницьких матеріалів, таких як клітини U937 і клітини RAJI, в рідкому азоті. При випаровуванні LN2 швидко розширюється - з одного літра рідкого азоту утворюється приблизно 700 літрів газоподібного азоту, який може швидко витіснити кисень у закритих приміщеннях. Приміщення для зберігання рідкого азоту повинно бути обладнане системами механічної вентиляції та пристроями моніторингу кисню. У приміщеннях, де зберігаються кілька клітинних ліній і велика кількість середовища для заморожування CM-1 - 500 мл, ми рекомендуємо встановити постійні монітори кисню зі звуковою сигналізацією, що спрацьовує при концентрації кисню 18%. Приміщення для зберігання повинно бути обладнане вентиляційними отворами, оскільки газ азот при нагріванні трохи легший за повітря. Ніколи не покладайтеся лише на природну вентиляцію - системи механічної вентиляції повинні регулярно перевірятися і обслуговуватися відповідно до специфікацій виробника, щоб забезпечити постійну швидкість повітрообміну.

Протокол безпеки для двох осіб

При роботі з рідким азотом для кріоконсервування чутливих клітинних ліній, таких як клітини HUVEC або мезенхімальні стовбурові клітини людини - кістковий мозок, завжди працюйте в парі. Ця система особливо важлива під час таких ключових операцій, як перенесення зразків у сховище, заповнення кріогенних посудин або робота з великими об'ємами заморожувального середовища CM-1. Друга людина виконує роль спостерігача за безпекою і може негайно відреагувати в разі надзвичайних ситуацій, таких як розлив, виснаження кисню або травми. Він повинен знаходитися біля виходу з лабораторії, підтримуючи візуальний контакт, але залишаючись подалі від безпосередньої робочої зони. Обидва члени команди повинні бути повністю навчені процедурам дій у надзвичайних ситуаціях і знати місцезнаходження засобів безпеки. Плануйте операції з рідким азотом на звичайні робочі години, коли присутній допоміжний персонал, і ніколи не намагайтеся виконувати кріогенні операції в неробочий час або у вихідні дні.

Обов'язкові вимоги до навчання для роботи з LN2

Перед початком роботи з системами зберігання рідкого азоту, що містять цінні зразки, такі як клітини HeLa, або працюють із заморожувальним середовищем CM-ACF, що не містить сироватки, обов'язковим є проходження всебічного навчання. Ця підготовка повинна охоплювати належні техніки поводження, розуміння кріогенної небезпеки та процедури реагування на надзвичайні ситуації. Співробітники, які працюють з нашими клітинними лініями, повинні продемонструвати компетентність у безпечних процедурах заповнення, правильному використанні ЗІЗ та розумінні ризиків кисневого виснаження. Навчання повинно включати практичні заняття з невеликими об'ємами під наглядом, перш ніж переходити до роботи з великими об'ємами. Необхідно вести документацію про проходження навчання, а також планувати регулярні повторні тренінги. Нові співробітники повинні спостерігати за досвідченим персоналом протягом щонайменше трьох повних процедур поводження з LN2, перш ніж працювати самостійно в команді. Пам'ятайте, що навіть досвідчений персонал потребує періодичної перепідготовки, щоб гарантувати, що протоколи безпеки залишаються свіжими і актуальними.

Системи моніторингу та сигналізації кисню

При зберіганні критично важливих дослідницьких матеріалів, таких як мезенхімальні стовбурові клітини людини - жирова тканина та мезенхімальні стовбурові клітини людини - желе Уортонса в рідкому азоті, надійні системи моніторингу кисню не підлягають обговоренню. Стаціонарні кисневі монітори повинні бути встановлені з сигналізацією, налаштованою на спрацьовування при концентрації кисню 18% (об'ємних). Ці системи вимагають стратегічного розміщення: на рівні підлоги, де спочатку збираються гази, важчі за повітря, на робочій висоті, а також біля ємностей для зберігання LN2. При зберіганні зразків у середовищі для заморожування CM-ACF - без сироватки - 500 мл, переконайтеся, що місця зберігання обладнані як звуковою, так і візуальною сигналізацією, яку можна розпізнати на фоні лабораторного шуму. Впровадити щомісячний графік тестування всіх систем моніторингу кисню, вести записи калібрування та встановити чіткі процедури евакуації у разі спрацювання сигналізації. Персонал ніколи не повинен намагатися обійти або відключити ці системи безпеки, незалежно від тривалості запланованої роботи з рідким азотом.