Опубліковано: 2023 р. | Останній перегляд: травень 2026 р.

Розуміння поняття «номер пасажу»

Поняття «номер пасажу» є ключовим у клітинній культурі та означає кількість разів, коли клітинну лінію піддавали субкультурі або переносили у свіже середовище для росту після її початкового відновлення з кріоконсервації або отримання з референтного банку клітин. Цей показник є вирішальним для відстеження походження та історії клітинної культури.

Огляд процесу

• У повсякденній практиці культивування клітин, коли клітини досягають певної щільності, їх переносять у нове середовище для підтримки росту та запобігання надмірному згущенню. Кожен такий перенос реєструється як пасаж.
• Традиційно, коли ми отримували клітинну лінію, наприклад, на 60-му пасажі від депозитарія, ми продовжували від цього номера пасажу, збільшуючи його з кожним субкультуруванням. Ця практика, хоча й зберігала історичний ланцюжок, часто призводила до високих номерів пасажів з самого початку. З огляду на широке і часто десятирічне використання певних клітинних ліній, таких як лінія HeLa, створена в 1951 році, неможливо визначити загальну кількість пасажів з моменту створення клітинної лінії.
• Щоб підвищити чіткість та якість наших процесів культивування клітин, на початку 2023 року ми переглянули цей підхід. Тепер, коли ми розпочинаємо культивування з нового флакона, незалежно від номера пасажу від депозитарію, ми обнуляємо лічильник і починаємо відлік заново з першого пасажу для кожної виготовленої партії.

Обґрунтування

Пасажування є життєво важливою процедурою для забезпечення здоров'я та корисності клітинних культур для досліджень. Коли клітини розростаються, вони зазнають інгібування контакту, що знижує швидкість їх проліферації, що може негативно вплинути на результати експериментів. Щоб пом'якшити ці проблеми, Cytion впроваджує суворий контроль за щільністю клітин, при якій відбувається субкультурування, тим самим підтримуючи низьку кількість пасажів під час виробництва своїх клітинних ліній. Цей запобіжний захід допомагає запобігти негативним наслідкам надмірного пасажування, таким як морфологічні аномалії, зміни швидкості росту та генетичний дрейф, що може призвести до значного відхилення клітин від їхнього початкового стану. Тривалі періоди субкультурування також можуть підвищити ризик мікробного забруднення.

Наша обіцянка

Ми гарантуємо, що клітини, які постачаються дослідникам, максимально наближені до початкового генетичного складу та фенотипних характеристик, що підвищує надійність експериментальних даних. Крім того, ретельно документуючи кожне пасування, Cytion сприяє простежуваності та відтворюваності досліджень — це зобов’язання, яке відображає високі стандарти практики в галузі клітинної культури. Дослідникам рекомендується вести точний облік номерів пасажів як на культуральних посудинах, так і в лабораторних щоденниках, щоб мати довідкову інформацію про стан та історію своїх клітинних культур.

Поради та типові помилки

Дотримання правильного протоколу є надзвичайно важливим, але розуміння типових помилок може бути не менш важливим. Процедури культивування клітин чутливі до незначних відхилень у техніці, часі та якості реагентів. Наведені нижче поради відображають найкращі практики, рекомендовані науковою командою Cytion на основі багаторічного досвіду культивування клітин.

• Завжди попередньо нагрівайте реагенти до 37 °C перед використанням, щоб мінімізувати термічний шок для клітин.
• Працюйте швидко, але обережно — мінімізуйте час перебування клітин поза інкубатором.
• Використовуйте сертифіковані реагенти, перевірені на відсутність мікоплазм, щоб уникнути забруднення, яке може поставити під загрозу результати експерименту.
• Документуйте кожен крок, включаючи номер пасажу, дату та спостереження за морфологією клітин.
• Перевірте свій протокол за допомогою невеликого пілотного експерименту перед масштабуванням, щоб уникнути марнування дорогих реагентів.

Рекомендовані реагенти Cytion

Cytion пропонує широкий асортимент перевірених реагентів для культивування клітин, спеціально розроблених для цього протоколу. Всі реагенти перевірені на ефективність з широко використовуваними клітинними лініями та доступні з повною документацією. Відвідайте cytion.com/Media-Reagents, щоб переглянути повний асортимент.