Vero Cells: Новаторські шляхи у вивченні вірусів та створенні інноваційних вакцин

Клітинна лінія Vero- увічнена модель клітин ссавців, отримана з епітеліальних клітин нирок африканської зеленої мавпи - знаходиться на передовій досліджень у вірусології, мікробіології, клітинній та молекулярній біології. Їх широке застосування охоплює розробку вакцин, фармацевтичний скринінг, дослідження біології вірусів і паразитів, імунології пухлин та імунотерапевтичних стратегій.

Походження та ключові особливості клітин Vero

Заглиблення в клітинні лінії, такі як Vero, викликає кілька запитань: Що саме являють собою клітини Vero? Як була створена клітинна лінія Vero? Яка історія стоїть за назвою "Vero"? Цей сегмент має на меті з'ясувати генезис та основні характеристики клітин Vero.

Клітинна лінія Vero була створена в 1962 р. з епітеліальних клітин нирок африканської зеленої мавпи. Ця лінія була культивована Y. Kawakita і Yasumura в Університеті Чіба в Японії. Термін "Vero" походить від "Verda reno" з есперанто, що перекладається як "зелена нирка", хоча "Vero" також перегукується з поняттям "істина"

Клітини Vero зазвичай утворюють моношари, але можуть адаптуватися до суспензійних культур, демонструючи епітеліальну структуру. Ці клітини характеризуються округлою або видовженою формою і середнім діаметром близько 17 мкм. Примітно, що клітини Vero мають гіподиплоїдне число хромосом, причому модальне число хромосом становить 58 приблизно в 66% клітинної популяції, хоча в невеликій частині (1,7%) клітин існують варіанти з більш високою плоїдністю.

Клони клітин Vero та їх унікальні властивості

Окремі клони, отримані з клітинної лінії Vero, мають унікальні властивості, які відрізняють їх від оригінальної лінії. Серед них можна виділити два помітних клони клітин Vero:

• Клітинна лінія Vero E6: Також відомий як Vero C1008, цей клон походить від клітин Vero 76 і був виділений в 1979 році P.J. Price з використанням техніки розведення на мікротитрованих планшетах. Клітини Vero E6 особливо підходять для культивування вірусів, які повільно реплікуються.

• Клітини Vero 76: Отримані з нирки африканської зеленої мавпи в 1968 році, ці клітини зберігають епітеліальну морфологію, характерну для клітин Vero.

Ці варіанти клітин Vero, поряд з батьківською лінією, продовжують відігравати важливу роль у просуванні вірусологічних досліджень і розробці медичних втручань, що підкреслює їх значення в науковому співтоваристві.

Інформація про культивування

Культивування клітин Vero, клітинної лінії мавп, вимагає знання специфічних параметрів, таких як час подвоєння, щільність посіву та відповідне живильне середовище.

• Час подвоєння популяції: час подвоєння клітин Vero становить близько 24 годин.

• Прилипання: Клітини Vero прилипають до поверхонь і зазвичай утворюють моношари при культивуванні.

• Щільність посіву: Рекомендується починати з щільності посіву 1 x 10^4 клітин/см^2. Для культивування прилиплих клітин Vero промийте їх PBS і обробіть аккутазою, щоб відокремити їх. Після відокремлення клітини центрифугують, ресуспендують у свіжому середовищі і переносять у нові колби для культивування.

• Поживне середовище: Для культивування клітин Vero підходять середовища Ham's F12 і DMEM. До них слід додати 2,5 мМ L-глутаміну та 5% фетальної сироватки великої рогатої худоби (FBS) для підтримки оптимального росту. Поживне середовище слід оновлювати два-три рази на тиждень.

• Умови вирощування: Клітини Vero процвітають при температурі 37°C у зволоженій атмосфері з 5% CO2.

• Зберігання: Для тривалого зберігання клітини Vero слід зберігати при температурі нижче -150°C або в морозильній камері з наднизькою температурою, або в паровій фазі рідкого азоту.

• Процес заморожування і середовище: Для кріоконсервування використовуйте CM-1 або CM-ACF, або живильне середовище з FBS і ДМСО. Використовуйте повільну техніку заморожування, поступово знижуючи температуру на 1°C за хвилину.

• Процес розморожування: Розморозьте клітини Vero, зануривши контейнер у водяну баню з температурою 37°C і обережно перемішуючи протягом 40-60 секунд. Потім розведіть клітини у свіжому середовищі, центрифугуйте, щоб видалити кріопротектор, ресуспендуйте у свіжому живильному середовищі та помістіть їх у нову колбу для відновлення та росту.

• Рівень біобезпеки: З клітинами Vero слід працювати в лабораторії, яка відповідає вимогам рівня біобезпеки 1.

Застосування клітинної лінії Vero в дослідженнях

Клітинна лінія Vero має численні дослідницькі застосування в галузі клітинної біології та вірусології. Тут ми розглянемо деякі з них.

Клітини Vero у вірусних дослідженнях та виробництві вакцин

Клітини Vero, отримані з клітин нирок африканських зелених мавп, стали основним елементом біопроцесу розробки вакцин проти різних вірусів, включаючи поліовірус та вірус японського енцефаліту. Їх адаптивність як в адгезивних, так і в суспензійних культурах, а також широкі можливості підтримки вірусів, в тому числі таких патогенів, як вірус чуми дрібних жуйних, підкреслюють їх важливість для виділення вірусів і розробки вакцин.

Численні дослідження використовували клітини Vero для виробництва вакцин для людини. Наприклад, відоме дослідження, опубліковане в 2019 році, продемонструвало використання клітин Vero у розробці інактивованої вакцини проти вірусу жовтої лихоманки [2].

Клітини Vero широко використовуються в дослідженнях вірусних інфекцій, наприклад, в дослідженні, проведеному в 2020 році, клітини Vero інфікували різними ізолятами вірусу SARS-CoV-2 для вивчення властивостей росту вірусу [4]. Аналогічно, в іншому дослідженні вивчали відповіді клітин на інфекцію SARS-CoV-2 з використанням культури клітин Vero [5].

Роль клітин Vero в тканинній інженерії та розробці попередніх біопроцесів

Окрім виробництва вакцин, клітини Vero роблять внесок у тканинну інженерію та більш широку сферу розробки біопроцесів, що підкреслює необхідність постійних досліджень їх властивостей та застосування. Вибір відповідних субліній клітин Vero є ключовим для максимізації їх потенціалу в біотехнологічній та фармацевтичній галузях.

Застосування клітин Vero у тестуванні ефективності та безпеки лікарських засобів

Клітини Vero часто застосовуються в тестуванні лікарських засобів для оцінки ефективності та безпечності фармацевтичних сполук. Ці клітини часто розглядаються як стандартна модель нормальних клітин нирок у дослідженнях, що вивчають цитотоксичні ефекти різних лікарських засобів і терапевтичних агентів. Наприклад, дослідження, в якому порівнювався вплив екстрактів кореня рослини Terminalia avicennioides на HepG2, клітинну лінію раку печінки, та клітини Vero, отримані з епітелію нирок мавп, показало, що екстракти більш згубно впливають на ракові клітини, ніж на нормальні клітини.

Обмеження клітин Vero

Хоча клітини Веро широко використовуються, вони мають свої обмеження, такі як вироблення веротоксину і геномні зміни, які можуть вплинути на певні сфери застосування. Розуміння специфічних підліній і геномних особливостей клітин Vero, включаючи лінію F6, має важливе значення для оптимізації їх використання в різних біопроцесах.

Дослідіть наші клітини Vero та їхні похідні для революційних дослідницьких застосувань

Наукові публікації

Нижче наведені деякі останні та найбільш цитовані наукові публікації за участю клітин Vero.

Адаптація клітин Vero до суспензійного росту для виробництва вірусу сказу в різних безсироваткових середовищах

У цьому дослідженні, опублікованому в Vaccine Journal (2019), клітини Vero були адаптовані до росту в суспензійних культурах для отримання вірусу сказу у високому титрі з використанням різних безсироваткових середовищ.

Чутливість Toxoplasma gondii до етанольного екстракту Tinospora crispa в клітинах Vero

Ця стаття була опублікована в журналі "Доказова комплементарна та альтернативна медицина" у 2019 році. Дослідження показало, що етанольний екстракт рослини Tinospora crispa згубно впливає на паразита Toxoplasma gondii. Однак він є безпечним для клітин хазяїна (клітинної лінії Vero).

Вплив екстракту листя Colchicum baytopiorum на цитотоксичність та шляхи загибелі клітин у клітинних лініях C-4 I та Vero

Ця стаття була опублікована в Journal of the Balkan Union of Oncology в 2021 році. У цій роботі Озлем Дагдевірен Озсойлемез та Гюль Озджан дослідили цитотоксичну дію екстракту листя Colchicum baytopiorum на клітинні лінії C-4I та Vero.

Ресвератрол пригнічує реплікацію коронавірусу тяжкого гострого респіраторного синдрому 2 (SARS-CoV-2) в культивованих клітинах Vero

У цьому дослідженні, опублікованому в журналі Phytotherapy Research (2021), використовували клітини Vero, інфіковані SARS-CoV-2, для вивчення терапевтичного впливу ресвератролу на реплікацію вірусу.

Ліпофільні статини пригнічують продукцію вірусу Зіка в клітинах Vero

У цій статті в журналі Nature Scientific Reports (2019) висловлюється припущення, що ліпофільні статини, тобто церивастатин, ловастатин, фувастатин, симвастатин і мевастатин, можуть перешкоджати виробленню вірусу Зіка в клітинах Vero.

Ресурси для клітин Vero: Протоколи, відео та інше

• Трансфекція клітин Vero: За цим посиланням ви знайдете протокол трансфекції клітин Vero.
• Трансфекція клітинної лінії Vero: Це відео пояснює протокол трансфекції клітин лінії Vero.
• Субкультура клітин Vero: Це відео описує загальні рекомендації щодо субкультивування адгезивних клітинних ліній.

Протоколи культивування клітин

• Культивування клітин Vero: Цей веб-сайт містить добре пояснений протокол культивування клітин Vero.
• Культура клітин Vero: Цей документ може допомогти вам вивчити протокол розмноження, підтримання та заморожування клітин Vero.

Посилання

1. Аммерман, Н.К., М. Бейер-Секстон та А.Ф. Азад, Вирощування та підтримання клітинних ліній Vero. Сучасні протоколи в мікробіології, 2008. 11(1): с. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
2. Пато, Т.П. та ін., Очищення вірусу жовтої лихоманки, отриманого в клітинах Vero, для виробництва інактивованої вакцини. Вакцина, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H. та ін., Антипроліферативна дія екстрактів та фракцій кореня Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill and Perr. на клітинні лінії HepG2 та Vero. Клінічна фітологія, 2021, 7(1): с. 1-7.
4. Яо П. та ін., Ізоляція та характеристики росту SARS-CoV-2 в клітинах Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Парк Б.К. та ін., Диференціальна сигналізація та продукція вірусу в клітинах Calu-3 та Vero після інфікування SARS-CoV-2. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.