Клітинна лінія Jurkat E6.1

Jurkat E6.1 - це клон клітинної лінії Jurkat, імморталізованої лінії людських Т-лімфоцитів, отриманої з периферичної крові. Вперше отримані в 1977 році, вони використовуються в дослідженнях, пов'язаних з сигналізацією Т-клітинних рецепторів, Т-клітинною та іншими лімфоцитарними адоптивними терапіями проти раку, дослідженнями пов'язаних з кров'ю протоонкогенів, виживанням клітин і диференціацією клітин.

У цій статті ми надамо всю інформацію та передумови, які вам необхідно зрозуміти перед початком роботи з клонованими лініями клітин Jurkat E6.1, що включають в себе:

Походження, історія та загальна інформація
Характеристики клітинної культури
Застосування клітинних ліній Jurkat E6.1
Наукові публікації
Переваги та обмеження
Ресурси: Протоколи, відео та інше

1. походження, історія та загальна інформація

Тут представлена вся необхідна інформація, пов'язана з історією, походженням і загальними характеристиками клітинної лінії Jurkat E6.1 та поводженням з ними в культурі клітин.

Jurkat E6.1 - це імморталізована клітинна лінія Т-лімфоцитів людини. Ця клонована клітинна лінія є похідною клітинної лінії Jurkat, отриманої з периферичної крові 14-річного хлопчика, який страждав на гострий лімфобластний лейкоз у 1976 році. Після виділення з крові ці клітинні лінії спочатку отримали назву JM, оскільки JM і Jurkat вказують на те, що ці клітинні лінії були виділені від одного і того ж пацієнта. Клітинна лінія Jurkat E6.1 була клонована з похідних клітин, відомих як Jurkat-FHCRC.
Клітинні лінії E6.1 отримані з лейкемії; ці клітинні лінії використовуються для збільшення експресії IL-2 шляхом симуляції моноклональними антитілами або лектином. Вони експресують Т-клітинні антигенні рецептори, тому ці клітинні лінії можуть бути використані для вивчення порушень імунної системи та імуноонкологічних досліджень.
Морфологія клітин лінії Jurkat E6.1: Клітини Jurkat E6.1 були виділені від пацієнта з лейкемією і мають змінену морфологію в порівнянні з Т-лімфоцитами, що робить їх безсмертними клітинними лініями. Клітина лімфобласту утворюється, коли наївні лімфоцити активуються шляхом презентації антигену антигенпрезентуючими клітинами. Це призводить до посиленого росту ядра, цитоплазми, мРНК і білків.
Розмір клітин: Клітинні лінії Jurkat E6.1 є клонованими імморталізованими клітинами, діаметр яких найчастіше коливається в межах 10-16 мкм (діаметр може змінюватися в залежності від типу суспензії). Ці клітинні лінії мають дуже сферичну форму.
Геном і кількість хромосом: Ці клітинні лінії є псевдодиплоїдними лініями людських Т-лімфоцитів з модельною хромосомою 46. Вони також показують, що модальна хромосома присутня приблизно в 74% і демонструє рівень поліплоїдії близько 5,3%. Дослідження каріотипу показали каріотип з 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Хромосоми X і Y, як правило, мають нормальну копію в більшості клітинних ліній.
Клітинні лінії Jurkat проти клітинних ліній E6.1 Jurkat: Клітинні лінії Jurkat - це первинні батьківські клітинні лінії, вперше виділені від пацієнта з гострою лімфобластною лейкемією. Однак клітинні лінії E6.1 Jurkat є клонованим похідним клітинних ліній Jurkat-FHCRC.

Т-клітини, що борються з раком: CAR Т-клітинна імунотерапія.

2. характеристики культури клітин

Ключові моменти для культивування клітин B16

Час подвоєння популяції	Час подвоєння популяції клітинних ліній Jurkat становить приблизно 20,7 годин, що забезпечує відносно швидкий розвиток клітин.
Адгезивні або неадгезивні	E6.1 Клітинні лінії Jurkat ростуть у неадгезивному режимі, перебуваючи в суспензії або у вигляді одношарового росту, або у вигляді вільно плаваючих згустків.
Щільність посіву	Рекомендована щільність посіву для клітинних ліній E6.1 Jurkat становить 1,0-2,0 x 105 життєздатних клітин/мл для забезпечення здорової адгезії та оптимального росту клітин.
Поживне середовище	Необхідним живильним середовищем для клітинних ліній E6.1 Jurkat є середовище RPMI-1640, розроблене ATCC (ATCC 30-2001). Повне середовище готується шляхом додавання зазначених компонентів, включаючи фетальну сироватку великої рогатої худоби (ATCC 30-2002), для досягнення кінцевої концентрації 10%.
Умови вирощування	E6.1 Клітинні лінії Jurkat можна культивувати у відповідному інкубаторі з 5% вмістом повітря та СО2, використовуючи середовище RPMI-1640 та фетальну сироватку великої рогатої худоби.
Умови зберігання	Довготривале зберігання клітинних ліній Jurkat у замороженому стані слід зберігати при -130 градусах Цельсія або в рідкому азоті в паровій фазі. Зберігання при -70 градусах Цельсія може призвести до втрати життєздатності клітин.
Заморожування	Аліквота приблизно 0,5-1,0 мл суспензії клітинної лінії зберігається в кріогенних пробірках для підтримання клітинних ліній. Потім ці пробірки поміщають в контейнер для кріозберігання при -70 градусах Цельсія. Наступного дня пробірки переносять у резервуар з рідким азотом і зберігають у паровій фазі.
Розморожування	Для розморожування клітинних ліній Jurkat пробірки з клітинною суспензією слід помістити на водяну баню при 37 градусах Цельсія. Суспензію можна розморожувати протягом 2 хвилин при легкому перемішуванні. Важливо тримати кришку флакона поза водяною банею, щоб запобігти контамінації клітинних ліній.
Рівень біобезпеки	Для вирощування клітинних ліній Jurkat в лабораторних умовах необхідний рівень біобезпеки BSL-1, що забезпечує дотримання основних заходів безпеки.

Клітини Jurkat E6.1 ростуть у кластерах при 10-кратному та 20-кратному збільшенні.

3. застосування клітинних ліній Jurkat E6.1

Клітинна лінія Jurkat E6.1 найбільш широко використовується в дослідженнях і вивченні розладів, пов'язаних з імунною системою і пов'язаними з нею раковими захворюваннями. Крім того, вона виявилася придатною для вивчення деяких складнощів, пов'язаних з ВІЛ-інфекцією, оскільки рецептор CD4 Т-клітин необхідний для проникнення ретровірусу.

Деякі ключові сфери застосування цих клітинних ліній обговорюються нижче:

Модельна система для Т-клітинної сигналізації та апоптичних шляхів: Ця лінія клітин, отримана з Т-клітинної лейкемії, широко використовується в дослідженнях, пов'язаних із сигнальним каскадом TCR. Jurkat E6.1 вивільняє більше IL-2 та IL-8, які згодом допомагають в активації Т-клітин і запускають запальні процеси. Ця клітинна лінія також відома своїм гіперфосфорильованим Pyk2 і підвищеним виробництвом Vav1, який має вирішальний вплив на перебудову актинового цитоскелета в Т-клітинах. Сегрегацію TCR в клітинах лінії Jurkat E6-1 також можна покращити шляхом примусової експресії LFA-1, що, відповідно, посилює сигналізацію TCR та експресію IL-2 . Дослідження клітинної проліферації та клітинного циклу також проводяться на клітинах лінії Jurkat E6.1. Їм надають перевагу при вивченні апоптичних шляхів та індукції пошкодження ДНК сполуками, отриманими з морських та рослинних джерел. У дослідженні 2013 р. на цих лініях клітин оцінювали вплив епігонального середовища акули на клітини людини. Аналогічно, репресивний вплив гірсутину рослинного походження на проліферацію клітин вивчався на клітинних лініях Jurkat E6.1. Часто протиракові дослідження також використовують Jurkat E6.1 для оцінки обраних мішеней. Вплив морських нейротоксинів, таких як бреветоксини (PbTx ), також вивчався на цих клітинних лініях.

Дослідження ВІЛ: Одним з найважливіших застосувань клітинних ліній Jurkat E6.1 є їх здатність слугувати придатною моделлю для вивчення ВІЛ завдяки їх здатності вибирати різні сигнальні події, що індукують TCA. Клітинні лінії Jurkat E6.1 використовуються не тільки для розуміння активації ВІЛ, але й для вивчення механізмів латентності ВІЛ. Реплікація та інфікування ВІЛ були детально вивчені на цих лініях, де їх можна піддавати редагуванню генів та нокауту генів, як це було зроблено в дослідженні 2021 року. Вплив доставки ліків на ВІЛ-інфекцію, таких як ефавіренц (Efa) та енфувіртид (Enf) пролонгованої дії, спільно навантажених полімерно-ліпідних гібридних наночастинок (PLN) на проникнення вірусу, вивчався на клітинних лініях Jurkat E6.1. Клітини Jurkat E6.1, сконструйовані за допомогою CRISPR/Cas9, неодноразово використовували для вивчення механізмів проникнення, реплікації та інфікування ВІЛ.

4. наукові публікації

Ось кілька яскравих прикладів з великої колекції досліджень, що включають клітинні лінії Jurkat E6.1.

Метаболіт селену метилселенол регулює експресію лігандів, які запускають імунну активацію через рецептор лімфоцитів NKG2D

Використовуючи Jurkat E6.1, інкубували клітини в різних сполуках селену для вивчення експресії лігандів та поверхневої експресії MICA/B.

Каракасова кислота, ент-3,4-секонкаурен, сприяє апоптозу та диференціації клітин через інгібування сигнального шляху NFkB у лейкемічних клітинах.

Розуміння індукованої караказиновою кислотою цитотоксичності в лініях Т-лімфоцитів людини, таких як Jurkat E6.1 та HL-60.

Докази розвитку in vitro медикаментозної резистентності до азидотимідину у клітинних лініях Т-лімфоцитарної лейкемії (Jurkat E6-1/AZT-100) та у пацієнтів дитячого віку з ВІЛ-1 інфекцією

Використовували клітини Jurkat E6.1, інкубовані протягом тривалого часу з препаратом AZT, для вивчення резистентності до азидотимідину (AZT) у ВІЛ-1-інфікованих пацієнтів.

Дослідження клітинної лінії Jurkat E6.1 щодо впливу деяких біоіндолів на плинність мембрани

У цьому дослідженні було використано систему поляризованого флуоресцентного аналізу для вивчення впливу біоіндолів, включаючи серотонін, триптофан і мелатонін, на плинність клітинної мембрани в клітинах лінії Jurkat E6.1.

Молекулярний механізм індукції апоптозу в клітинах Jurkat E6-1 екстрактом алкалоїдів Tribulus terrestris

Екстракт алкалоїдівTribulus terrestris індукував апоптоз у клітинах Jurkat E6.1 для розуміння основного механізму дії.

Підвищення експресії LFA-1 посилює архітектуру імунного синапсу та сигналізацію Т-клітинних рецепторів у клітинах Jurkat E6.1

Сигналізація Т-клітинних рецепторів у клітинах Jurkat E6.1 була посилена шляхом примусового збільшення експресії LFA-1.

5. переваги та обмеження

Як і інші клітинні лінії, Jurkat E6.1 має свої переваги та обмеження.

Переваги

Існує багато причин, чому їй надають перевагу в цих застосуваннях:

Режим росту
Jurkat E6.1 є суспензійною і неадгезивною клітинною лінією, тобто вона росте в підвішеному стані і не прилипає до поверхні культури.
Експресія генів
Клітинна лінія Jurkat E6.1 експресує гени, що кодують інтерлейкін-2 (IL-2) і CD3. Після стимуляції моноклональними антитілами, лектинами або ефірами форболу проти антигенного комплексу Т3 ці клітини продукують посилений ІЛ-2.
Експресія антигенів
Клітинна лінія Jurkat E6.1 експресує антиген CD3, пов'язаний з активацією та сигналізацією Т-клітин.
Маркери експресії
Клітинна лінія експресує маркери Т-клітинних антигенних рецепторів (TCR), які мають вирішальне значення для розпізнавання Т-клітинами та імунної відповіді.
Придатність для трансфекції
Клітинна лінія Jurkat клон E6.1 підходить для експериментів з трансфекції хазяїна, що дозволяє вводити в клітини екзогенний генетичний матеріал для різних дослідницьких цілей.

Обмеження

Після переваг перейдемо до обмежень, пов'язаних з використанням клітинних ліній Jurkat E6.1:

Трансфекція клітин вірусним вектором
Трансфекція клітин Jurkat E6.1 є складним завданням через їхнє Т-клітинне походження. Зазвичай для генетичної модифікації потрібні дорогі та трудомісткі вірусні вектори. Невірусні вектори показали низьку ефективність трансфекції та значну токсичність у клітинах Jurkat.
Бактеріальне забруднення
Клітинні культури Jurkat E6.1 слід контролювати на предмет потенційного бактеріального забруднення для забезпечення достовірності результатів експерименту.
Вірусні забруднення
Клітинні лінії Jurkat E6.1 експресують різні рецептори хемокінів і мають низький рівень CD4, що полегшує проникнення вірусів. Це робить їх чутливими до вірусів, що інфікують Т-клітини, таких як HTLV та ВІЛ.

430,00 EUR*

Вміст: 1.5 milliliter

Ціни без урахування податків та витрат на доставку

cryovial

Номер продукту: 300223

6.ресурси: Протоколи, відео та інше

У цьому розділі ви знайдете методи і протоколи для культивування і трансфекції клітин, а також навчальні відео, пов'язані з цією клітинною лінією:

Протоколи культивування клітин

Тут наведені деякі основні процедури культивування, яких слід дотримуватися для цієї лінії клітин:

Cell Culture SOP, Propagation of Jurkat: Каліфорнійський університет також надав у своєму браузері USCS Genome метод для культивування клону E6-1 лінії Jurkat.
Юркат, клон E6-1: культура та поводження з культурою: Elabscience розмістила протокол поводження з культурою на своєму сайті з описом продукту.

Протоколи трансфекції

Нижче наведено список різних доступних протоколів трансфекції:

Протокол трансфекції клітин Jurkat Cells з реагентом ліпофектамін LTX: Протокол трансфекції клітин Jurkat Cell з використанням реагенту Lipofectamine LTX від ThermoFisher.
Протокол Amaxa™ 4D-Nucleofector™ для клону Jurkat E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG надала протокол трансфекції для клону Jurkat E6.1 від ATCC з використанням 4D-Nucleofector® X Unit.

Відео про Jurkat E6.1

Існує кілька чудових відеороликів, що охоплюють концепції клітинних культур, процедури, проліферацію, нанесення покриттів та інші теми.

Пасажування клітин:Основи культури клітин: Це чудове відео з основ пасажування клітинних ліній людини за допомогою ThermoFisher.
Розморожування клітин: Основи культури клітин: Це відео містить основні інструкції з культивування та розморожування клітин за допомогою ThermoFisher.
Протокол трансфекції плазмідної ДНК: Це відео присвячене протоколу трансфекції плазмідної ДНК за допомогою реагентів Lipofectamine® LTX і Plus™ від ThermoFisher.
Вимірювання апоптозу з використанням суспензії клітин Jurkat, оброблених 3 мікромолярним стауроспорином: Це відео демонструє, як виконати аналіз апоптозу на цитометрі Celigo з використанням реагентів Hoechst і каспази 3/7 від Nexcelom Bioscience.