Клітини Hep3B: дослідження та відкриття в галузі гепатоцелюлярної карциноми
HEP3B — це імморталізована клітинна лінія гепатоцелюлярної карциноми людського походження. Вона широко використовується в дослідженнях гепатотоксичності та метаболізму лікарських засобів. Ефективність трансфекції HEP3B є значною; тому ці клітини зазвичай використовують для вивчення розвитку, прогресування та терапевтичних втручань при раку печінки. Ця стаття містить всю необхідну інформацію про клітинну лінію HEP3B, щоб допомогти вам у роботі з нею. В основному вона включатиме:
- Середовище для культивування
- Для культивування клітин HEP3B використовується середовище EMEM, що містить 10% FBS, 2,2 г/л NaHCO3, 2 мМ L-глутаміну та збалансований сольовий розчин Ерла (EBSS).
- Час подвоєння
- Час подвоєння клітин HEP3B становить приблизно 36 годин.
- Тип росту
- Ця клітинна лінія гепатоми є адгезивною.
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступно у
- Cytion — Замовити HEP3B
- Загальні характеристики та походження клітин HEP3B
- Інформація про культивування клітинної лінії HEP3B
- Клітинна лінія HEP3B: переваги та обмеження
- Застосування клітин HEP3B у наукових дослідженнях
- Публікації про клітинну лінію HEP3B
- Ресурси щодо клітинної лінії HEP3B: протоколи, відео та інше
- Загальні характеристики та походження клітин HEP3B
- Інформація про культивування клітинної лінії HEP3B
- Клітинна лінія HEP3B: переваги та обмеження
- Застосування клітин HEP3B у наукових дослідженнях
- 5. Публікації про клітинну лінію HEP3B
- Ресурси щодо клітинної лінії HEP3B: протоколи, відео та інше
- Поширені запитання
Загальні характеристики та походження клітин HEP3B
Основна інформація, яка вам потрібна про клітинну лінію, — це її походження та загальні характеристики. Це допоможе вам вирішити, як використовувати її у ваших дослідженнях, та полегшить роботу з нею. У цьому розділі статті ви знайдете всю необхідну інформацію про походження та характеристики HEP3B. Тут ви дізнаєтеся: Що таке клітинні лінії Hep 3B? Яке походження клітин Hep3B? Яка морфологія клітин HEP3B?
- HEP3B — це безперервна лінія клітин гепатоми людини, що походить з тканини печінки 8-річного африканського хлопчика з гепатоцелюлярною карциномою (ГЦК). Вона була створена Аденом та колегами у 1979 році в лабораторії Барбари Б. Ноулз, Інститут Вістар, Філадельфія, США [1].
- Клітини HEP3B мають інтеграцію геному вірусу гепатиту В (HBV) у свою хромосому.
- Ці клітини гепатоцитарної карциноми мають епітеліальну морфологію.
- Модальна кількість хромосом клітин HEP3B становить 60. На відміну від HepG2, вони не мають перегрупованої хромосоми 1.
У чому полягає різниця між HepG2 та Hep3B?
HepG2 та HEP3B відрізняються за кількістю хромосом у клітині. HEP3B містить 60 хромосом, тоді як клітини HepG2 мають у середньому 55 хромосом. Крім того, HepG2 не є пухлиногенним і є негативним щодо гепатиту В, тоді як HEP3B є пухлиногенним і позитивним щодо HBV.
Інформація щодо культивування клітинної лінії HEP3B
Знання про культивування клітинної лінії може полегшити вам роботу з нею. У цьому розділі висвітлено всі ключові моменти культивування клітинної лінії HEP3B HBV, зокрема: Який час подвоєння клітин Hep3B? Які умови культивування HEP3B? Як культивувати клітини HEP3B HCC?
Ключові моменти культивування клітин HEP3B
Час подвоєння:
Час подвоєння клітин HEP3B становить приблизно 36 годин.
Адгезивні або в суспензії:
Ця клітинна лінія гепатоми є адгезивною.
Коефіцієнт поділу:
Клітини HEP3B субкультурують у співвідношенні 1:2 до 1:4. Адгезивні клітини HEP3B промивають 1 x PBS, а потім інкубують з розчином для дисоціації Accutase. Через 8–10 хвилин додають свіже середовище, а клітини центрифугують. Зібрані клітини потім обережно ресуспендують і переливають у колби, що містять культуральне середовище, у рекомендованому співвідношенні поділу.
Середовище для росту:
Для культивування клітин HEP3B використовується середовище EMEM, що містить 10% FBS, 2,2 г/л NaHCO3, 2 мМ L-глутамін та збалансований сольовий розчин Ерла (EBSS).
Умови вирощування:
Клітини HEP3B культивують у зволоженому інкубаторі при температурі 37 °C з безперервною подачею 5% CO2.
Зберігання:
Заморожені клітини HEP3B зберігають при температурі нижче -150 °C в електричній морозильній камері або у паровій фазі рідкого азоту.
Процес заморожування та середовище:
Рекомендованим середовищем для заморожування клітин HEP3B є CM-1 або CM-ACF. Клітини заморожують за допомогою процесу повільного заморожування, який дозволяє знижувати температуру лише на 1 °C за хвилину, щоб зберегти життєздатність клітин.
Процес розморожування:
Заморожені клітини розморожують у водяній бані, попередньо нагрітій до 37 °C, протягом 40–60 секунд. Потім ці клітини додають до свіжого середовища для росту та центрифугують для видалення елементів середовища для заморожування. Зібрані клітини ресуспендують та розливають у нові колби для росту.
Рівень біобезпеки:
Для культивування клітин HEP3B необхідна лабораторія рівня біобезпеки 1.
Клітинна лінія HEP3B: переваги та обмеження
HEP3B — це широко використовувана клітинна лінія гепатоцелюлярної карциноми. У цьому розділі розглядаються деякі основні переваги та обмеження цих клітин гепатоми.
Переваги
Основними перевагами клітин HEP3B є:
Простота культивування
Клітини HEP3B не мають вибагливих вимог до культивування, що робить їх простими в роботі та утриманні в дослідницькій лабораторії. Це спрощує експериментальні процедури.
Висока ефективність трансфекції
Клітини HEP3B демонструють надзвичайну ефективність трансфекції, що робить їх широко використовуваними в генетичних маніпуляціях та дослідженнях, пов'язаних з експресією генів.
Онкогенність
HEP3B — це пухлиногенна клітинна лінія гепатоцелюлярної карциноми, здатна утворювати пухлини при введенні імунокомпрометованій миші. Це допомагає вивчати прогресування та розвиток раку за допомогою моделей ксенотрансплантатів HEP3B.
Статус P53 у HEP3B
Клітини HEP3B мають мутацію гена P53, подібну до гепатоцелюлярної карциноми (HCC) та інших видів раку, що робить їх придатними для вивчення впливу мутації P53 на ріст, розвиток та прогресування раку.
Обмеження
Обмеження, пов'язані з клітинною лінією HEP3B, такі:
Клітинна модель in vitro
Клітинна лінія HEP3B слугує in vitro моделлю клітин гепатоцелюлярної карциноми (ГЦК). Однак вона може не повністю відображати складність ГЦК, як це спостерігається в живих організмах. Відповідно, результати експериментів in vitro можуть відрізнятися від тих, що спостерігаються in vivo.
Застосування клітин HEP3B у дослідженнях
Клітинна лінія HEP3B має кілька застосувань у біомедичних дослідженнях. Деякі з основних застосувань клітин HEP3B у дослідженнях включають:
- Біологія раку: HEP3B — це клітинна лінія гепатоцелюлярної карциноми людини. Це безцінна клітинна модель для дослідження клітинних та молекулярних механізмів, що лежать в основі розвитку та прогресування ГЦК. Дослідники використовують ці клітини для вивчення генетичних мутацій, клітинних процесів та сигнальних шляхів клітин, пов’язаних із раком печінки. Наприклад, в одному дослідженні, в якому використовувалися клітини HEP3B, було виявлено, що мікроРНК-223-3p регулює компоненти інфламмасоми NLRP3, пригнічує проліферацію та посилює апоптоз клітин гепатокарциноми HEP3B [2].
- Скринінг та розробка лікарських засобів: клітинна лінія HEP3B також використовується для тестування, скринінгу та розробки нових терапевтичних засобів проти карциноми печінки. Крім того, її використовують для оцінки токсичності та ефективності різних протиракових препаратів та методів лікування. Дослідники також використовували ці клітини гепатоми для вивчення метаболізму ліків. Дослідники використовували клітини HEP3B та оцінили цитотоксичний потенціал екстракту рослини Cotinus coggygria на клітинах гепатокарциноми HEP3B [3].
- Вірусні інфекції: HEP3B — це клітинна лінія, позитивна до вірусу гепатиту В; тому її використовують для вивчення вірусних інфекцій, які можуть призвести до розвитку раку печінки, тобто HBV та HCV. Це може допомогти краще зрозуміти вірусні інфекції та розробити потенційні антивірусні методи лікування. Наприклад, у одному дослідженні використовували ракові клітини гепатоцитів HEP3B та вивчали важливість убіквітинування для поширення вірусу гепатиту С. Результати дослідження свідчать про те, що убіквітин-специфічна протеаза 15 (USP15) бере участь у розмноженні HCV шляхом регулювання функцій, специфічних для гепатоцитів, включаючи утворення ліпідних крапель та трансляцію РНК HCV [4].
5. Публікації про клітинну лінію HEP3B
У цьому розділі статті розглядаються кілька цікавих наукових публікацій, присвячених клітинам HEP3B.
У цій публікації в журналі Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) висловлено припущення, що стрес ендоплазматичного ретикулуму, індукований сполукою лютеоліну, може чинити протипухлинну дію на клітини P53-нульової лінії HEP3B незалежно від P53.
Потенційна дія на клітини раку печінки Hep3B лупеолу, виділеного з Avicennia marina
У цьому дослідженні, опублікованому в журналі «Archiv der Pharmazie» (2021), було запропоновано пентациклічний тритерпеноїд, лупеол, як потенційний протираковий засіб проти клітин HEP3B.
Ця стаття опублікована в журналі Molecular Medicine Reports (2017). Результати дослідження свідчать, що етанольний екстракт Cnidium monnieri (L.) Cusson індукує загибель клітин (апоптоз) та зупинку клітинного циклу в клітинах гепатокарциноми HepG2 та HEP3B шляхом регуляції сигнального шляху p53 та Akt/GSK-3β.
У цьому дослідженні, опублікованому в журналі «Biomolecules and Therapeutics» (2020), було висунуто гіпотезу, що ауранофін виявляє синергічну активність і сприяє сульфорафан-опосередкованому апоптозу клітин HEP3B через активацію шляху PI3K/AKT.
У цій науковій статті, опублікованій у журналі BioFactors (2023), висловлено припущення, що циркулярна РНК-0072309 чинить протипухлинну дію на клітини гепатоцелюлярної карциноми HEP3B шляхом впливу на мікроРНК-665.
Ресурси для клітинної лінії HEP3B: протоколи, відео та інше
Нижче наведено кілька ресурсів, доступних щодо клітин HEP3B:
- Трансфекція HEP3B: у цьому відео пояснюється протокол трансфекції клітин HEP3B.
- Ефективність трансфекції HEP3B: за цим посиланням ви дізнаєтеся про склад середовища DMEM для HEP3B, пасажування клітин та протокол трансфекції клітин HEP3B. Крім того, тут наведено інформацію щодо оптимізації використання реагенту Lipofectamine 3000 для HEP3B у вашому протоколі трансфекції.
Наступне посилання містить протокол культивування клітин HEP3B:
- Умови культивування HEP3B: Це посилання допоможе вам ознайомитися з протоколом роботи з культурами Huh7 та HEP3B та їх утриманням.
- Клітини HEP3B: Цей веб-сайт містить багато інформації про клітини HEP3B, включаючи середовища HEP3B, протокол поділу клітин, розморожування та роботи з проліферативними та кріоконсервованими культурами.
Посилання
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Походження та властивості клітинних ліній гепатоцелюлярної карциноми. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): с. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p регулює NLRP3, сприяючи апоптозу та інгібуючи проліферацію клітин hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): с. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. та S. Selen-Isbilir, Цитотоксичний ефект екстракту Cotinus coggygria на лінію ракових клітин Hep3B. Natural Product Research, 2022: с. 1-4.
- Kusakabe, S. та ін., USP15 бере участь у розмноженні вірусу гепатиту С шляхом регулювання трансляції вірусної РНК та утворення ліпідних крапель. Journal of Virology, 2019. 93(6): с. 10.1128/jvi. 01708-18.