Клітинна лінія HT-29
HT-29 - це лінія клітин колоректального раку людини з широким спектром застосування в онкологічних і токсикологічних дослідженнях. Наприклад, ці клітини чутливі до стандартного хіміотерапевтичного лікування колоректального раку. Крім того, клітинні лінії HT-29 є добре охарактеризованою моделлю in vitro для дослідження реакції кишкового епітелію на бактеріальну інфекцію. Клітини HT-29 імітують характеристики зрілих клітин кишечника, тобто ентероцитів, і, таким чином, підходять для прикріплення та механістичних досліджень.
У цій статті будуть розглянуті всі аспекти клітинної лінії HT-29, які необхідно знати перед початком роботи з нею. В основному вона буде включати в себе
- Клітини HT-29: Походження та загальна інформація
- Інформація про культуру клітин лінії HT-29
- Клітини HT-29: Переваги та обмеження
- Клітини HT-29: Застосування
- Наукові публікації про клітини HT-29
- Ресурси про клітини HT-29: Протоколи, відео та інше
1. Клітини HT-29: Походження та загальна інформація
Перш ніж використовувати будь-яку клітинну лінію, необхідно дізнатися про її загальні характеристики та походження. Цей розділ допоможе Вам у цьому: Що таке клітини HT-29? Чи є HT-29 клітинною лінією колоректального раку? Яка морфологія клітин HT-29?
Що таке клітинна лінія HT-29? HT-29 - це клітинна лінія колоректальної аденокарциноми, створена в 1964 році Тремпе і Фогом. Спочатку клітини були отримані з первинної пухлини жінки європеоїдної раси (44 роки) з колоректальною аденокарциномою [1]. З моменту свого створення ця клітинна лінія використовується для вивчення біології раку.
Морфологія клітин HT-29: Клітини лінії HT-29 в цілому мають епітеліоподібну морфологію. Диференційовані клітини ростуть моношаром, утворюють щільні міжклітинні з'єднання і мають апікальну щіточку. Якщо ці клітини вирощувати в середовищі з дефіцитом глюкози або за наявності індукторів, таких як бутират або кислота, вони набувають ознак ентероцитів.
Розмір клітин: Діаметр клітин лінії колоректального раку HT-29 становить 11 мкм.
Геном і плоїдність: Модальне число хромосом для клітинної лінії HT-29 становить 71. Воно може коливатися в межах 68-72. Крім того, впорядковане число хромосом для клітин HT-29 є гіпертриплоїдним, з 2S-компонентом, що зустрічається на рівні 2,4 %.
Що таке HT29 MTX? HT29 MTX - це стійка до метотрексату клітинна лінія, виділена з оригінальної клітинної лінії раку товстої кишки людини HT-29 шляхом адаптації до 10 мкМ метотрексату. Ці клітини мають характеристики зрілих келихоподібних клітин, що секретують слиз.
2. Інформація про культуру клітин лінії HT-29
Знання основних вимог до культури клітинної лінії може полегшити вашу роботу з нею. Ви повинні знати: який час подвоєння клітинної лінії HT-29? Яка щільність посіву клітин HT-29? Які середовища для клітин HT-29?
|
Час подвоєння |
Середній час подвоєння клітинної лінії HT-29 становить 24 години. |
|
Адгезія/суспензія |
HT-29 є адгезивною клітинною лінією. |
|
Щільність посіву |
Рекомендована щільність посіву клітин HT-29 становить 3 x104 клітин/см2. Вирощені клітини промивають 1 X PBS і відокремлюють після інкубації з аккутазою протягом 8-10 хвилин. Додають свіже середовище, і клітини центрифугують. Клітинний осад ресуспендують, і клітини розподіляють у нові колби з рекомендованою щільністю клітин. |
|
Поживне середовище |
Для оптимального культивування клітин HT-29 використовується мінімальне основне середовище Eagle's (EMEM), доповнене 2,5 мМ L-глутаміну і 10% FBS. Середовище слід замінювати 2-3 рази на тиждень. |
|
Умови культивування |
Для росту клітин HT-29 потрібен гуміфікований інкубатор з температурою 37°C і 5% подачею CO2. |
|
Зберігання |
Ці клітини зберігають у паровій фазі рідкого азоту при температурі нижче -195°C. |
|
Заморожувальне середовище і процес |
Для клітинної лінії HT-29 використовується середовище для заморожування CM-1 або CM-ACF. Клітини заморожуються за допомогою повільного процесу заморожування, який викликає зниження температури на 1 °C і ефективно захищає життєздатність клітин. |
|
Процес розморожування |
Заморожені клітини HT-29 розморожують на водяній бані при температурі 37°C. Ці клітини можна ресуспендувати і безпосередньо вносити в колбу зі свіжим живильним середовищем. На противагу цьому, розморожені клітини можна центрифугувати для видалення елементів заморожувального середовища, ресуспендувати у свіжому середовищі та культивувати у флаконах. |
|
Рівень біобезпеки |
Для роботи з клітинами лінії HT-29 використовується рівень біобезпеки 1. |
3. Клітини HT-29: Переваги та обмеження
Кожна клітинна лінія має унікальні переваги та недоліки, які відрізняють її від інших клітинних ліній. У цьому розділі ми розглянемо основні переваги та обмеження, пов'язані з клітинами HT-29.
Переваги
Основними перевагами клітин HT-29 є
-
Легкість у культивуванні
Клітинну лінію HT-29 легко обробляти і підтримувати, вона не має складних вимог до культивування. Вона широко культивується в дослідницьких лабораторіях.
-
Модель клітин кишечника in vitro
Клітини HT-29 можуть диференціюватися у зрілі клітини кишечника (ентероцити та клітини, що виробляють слиз) за певних умов культивування. Вони використовуються як клітинна модель для вивчення перетравлення їжі та біодоступності.
-
Висока ефективність трансфекції
Клітини раку товстої кишки HT-29 мають високу ефективність трансфекції, що робить їх придатними для досліджень експресії та регуляції генів. Експерименти з транзиторної та стабільної трансфекції можна проводити різними методами.
-
Чутливістьдо лікарських препаратів
Клітини HT-29 чутливі до хіміотерапевтичних препаратів, таких як фторурацил та оксаліплатин, що широко використовуються для лікування раку товстої кишки. Їх використовують для вивчення лікарської стійкості та скринінгу потенційних терапевтичних препаратів для лікування колоректальної карциноми.
Обмеження
-
Гетерогенність
Клітини HT-29, як і інші ракові клітинні лінії, демонструють гетерогенність і можуть не утворювати однорідну клітинну популяцію. Це може вплинути на відтворюваність результатів у певних аналізах і призвести до незначних варіацій в експериментальних результатах.
-
Обмежена диференціація
Клітини HT-29 мають обмежений потенціал диференціювання. Вони не повністю диференціюються в клітини кишечника або товстої кишки, а демонструють лише кілька характерних ознак. Це обмеження може обмежити їх використання у вивченні більш складних біологічних процесів.
4. клітини HT-29: Застосування
Клітинна лінія HT-29 широко культивується в дослідницьких лабораторіях завдяки широкому спектру застосувань. У цьому розділі ми розглянемо лише кілька важливих застосувань клітин HT-29.
Дослідження раку: HT-29 - це клітинна лінія колоректальної аденокарциноми, тому її використовують для вивчення прогресування, розвитку та молекулярних механізмів, що лежать в основі раку. Дослідження, проведене в 2018 році, використовувало клітинну лінію HT-29 для вивчення клітинних молекул, відповідальних за метастазування. Це дослідження показало, що гени віментину та CXCR4 регулюють метастазування клітин. Тоді як трансфекція імітатора мікроРНК-193a-5p може знизити рівень мРНК цих генів і успішно зменшити метастазування ракових клітин [2].
Токсикологічні дослідження: Клітинна лінія HT-29 широко використовується в токсикологічних дослідженнях. Ці клітини колоректальної карциноми використовуються для оцінки токсичності різних препаратів-кандидатів за допомогою різних аналізів. Наприклад, у дослідженні вивчався потенціал токсичності етанольного екстракту рослини Syzygium cumini на клітинній лінії HT-29. Результати показали значне пригнічення росту клітин HT-29, що вказує на перспективні протиракові властивості екстракту [3].
Мікробіологія: HT-29 можна використовувати як систему клітин-хазяїв для дослідження патогенезу потенційних мікробів, тобто бактерій і вірусів. Дослідники можуть інфікувати клітини HT-29 мікробами для вивчення їхньої вірулентності та реакції хазяїна. В одному з таких досліджень клітини HT-29 використовували для вивчення пробіотичних властивостей молочнокислих бактерій [4]. В іншому дослідженні клітини HT-29 використовували для оцінки ефективності та безпечності лікування бактеріофагами [5].
5. Наукові публікації про клітини HT-29
Цей розділ ознайомить вас з деякими відомими публікаціями про клітини HT-29, які допоможуть вам розробити своє дослідження.
Оцінка протиракової дії етанольного екстракту Syzygium cumini на колоректальну клітинну лінію HT-29
У цьому дослідженні запропоновано етанольний екстракт Syzygium cumini як потенційний протираковий засіб проти клітинної лінії колоректального раку HT-29. Екстракт значно пригнічував ріст ракових клітин.
У цій публікації в журналі Bioscience Reports досліджено протиракову активність сполуки тетрадрин на клітинах раку товстої кишки HT-29. Результати показали, що тетрадрин пригнічує проліферацію та ріст ракових клітин шляхом регулювання клітинних сигнальних шляхів.
У цьому дослідженні припускається, що мікроРНК-193a-5p може потенційно регулювати метастазування клітин HT-29 шляхом регуляції генів, пов'язаних з метастазуванням.
Ця стаття опублікована в журналі Nature Scientific Reports у 2018 році. У цьому дослідженні було використано пухлинну клітинну лінію HT-29 як клітинну модель кишечника для оцінки ефективності запропонованого лікування бактеріофагами.
У цьому дослідженні вчені використовували клітини HT-29 для вивчення пробіотичної активності молочнокислих бактерій. Цікаво, що дослідження показало, що лактобактерії запобігають адгезії патогенних бактерій до клітин товстої кишки.
6. Клітини HT-29 Ресурси: Протоколи, відео та інше
У цьому розділі ми розглянемо деякі онлайн-ресурси, присвячені клітинам HT-29, які допоможуть вивчити протоколи їх утримання, культивування та трансфекції.
Протоколи культивування клітин
Наступні ресурси допоможуть вам дізнатися про субкультивування клітин HT-29.
- Культивування клітин HT-29: Це посилання надасть базові знання про живильне середовище, розморожування та субкультивування клітин HT-29.
- Догляд за культурами HT-29: Ця стаття містить всю корисну інформацію про культивування та підтримку клітин HT-29.
Протоколи трансфекції
Клітинна лінія HT-29 має високу ефективність трансфекції і часто використовується в дослідженнях експресії генів. Наступні ресурси описують можливі протоколи трансфекції цих клітин.
- Трансфекція HT-29: За цим посиланням можна ознайомитися з детальним протоколом трансфекції клітин HT-29.
- Трансфекція клітинної лінії HT-29: Цей документ описує протокол трансфекції клітин лінії HT-29 плазмідною ДНК.
Відео, пов'язані з клітинною лінією HT-29
Ось кілька відеороликів, присвячених культивуванню та підтримці цієї пухлинної лінії.
- Пасажування клітин: Це відео показує протокол пасажування клітин для адгезійних клітинних ліній.
- Трансфекція клітин HT-29: Це відео допоможе вам розібратися з методом трансфекції, який використовується для клітин HT-29.
Ми сподіваємося, що інформація в цій статті є цінною і достатньою для того, щоб ви могли працювати з клітинами лінії HT-29 і підтримувати її в належному стані. Якщо ви плануєте використовувати клітини HT-29 у своїх дослідженнях, замовляйте їх у нас.
Список використаної літератури
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles, and I. Recio, Клітинна лінія HT29. Вплив харчових біоактивних речовин на здоров'я: моделі in vitro та ex vivo, 2015: с. 113-124.
- Ширафкан Н. та ін., мікроРНК-193a-5p інгібує міграцію клітин раку товстої кишки людини HT-29 через пригнічення шляху метастазування. Журнал клітинної біохімії, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Ходавірдіпур А., Зареан Р., Сафаралізаде Р. Оцінка протиракової дії етанольного екстракту Syzygium cumini на клітинну лінію колоректального раку HT-29. Журнал раку шлунково-кишкового тракту, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C. та ін., Пробіотичні властивості лактобактерій та їх здатність пригнічувати адгезію ентеропатогенних бактерій до клітин Caco-2 та HT-29. Пробіотики та антимікробні білки, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J. та ін., Бактеріофаги більш вірулентні до бактерій з людськими клітинами, ніж у бактеріальній культурі; висновки з клітин HT-29. Наукові доповіді, 2018. 8(1): p. 5091.
