Клітинна лінія HT-29
HT-29 — це лінія клітин колоректального раку людини, яка має широке застосування в дослідженнях раку та токсикології. Наприклад, ці клітини чутливі до стандартних хіміотерапевтичних методів лікування колоректального раку. Крім того, клітинна лінія HT-29 є добре охарактеризованою in vitro моделлю для дослідження реакції епітелію кишечника на бактеріальну інфекцію. Клітини HT-29 імітують характеристики зрілих клітин кишечника, тобто ентероцитів, і тому підходять для досліджень прикріплення та механізмів.
- Середовище для культивування
- Див. сторінку продукту
- Час подвоєння
- Див. сторінку продукту
- Тип росту
- Адгезивний
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступно у
- Cytion — Замовити HT-29
Клітини HT-29: походження та загальна інформація
Перш ніж використовувати будь-яку клітинну лінію, слід ознайомитися з її загальними характеристиками та походженням. Цей розділ допоможе вам дізнатися: Що таке клітини HT-29? Чи є HT-29 клітинною лінією колоректального раку? Яка морфологія клітин HT-29?
Що таке клітинна лінія HT-29? HT-29 — це клітинна лінія колоректальної аденокарциноми, створена в 1964 році Тремпе та Фогом. Клітини були спочатку отримані з первинної пухлини жінки кавказької раси (44 роки) з колоректальною аденокарциномою [1]. З моменту створення ця клітинна лінія використовується для вивчення біології ракових захворювань.
Морфологія клітин HT-29: Клітинна лінія HT-29 загалом має епітеліоподібну морфологію. Диференційовані клітини ростуть у моношарах, утворюють щільні міжклітинні з'єднання та мають апікальний щіткоподібний край. Якщо ці клітини вирощувати в середовищі з дефіцитом глюкози або додавати індуктори, такі як бутират або кислота, вони виявляють ознаки, подібні до ентероцитів.
Розмір клітин: Діаметр клітин колоректальної ракової лінії HT-29 становить 11 мкм.
Геном та плоїдність: Модальна кількість хромосом для клітинної лінії HT-29 становить 71. Вона може коливатися в діапазоні від 68 до 72. Крім того, оптимізована кількість хромосом для клітин HT-29 є гіпертриплоїдною, причому компонент 2S зустрічається з частотою 2,4 %.
Що таке HT29 MTX? HT29 MTX — це клітинна лінія, резистентна до метотрексату, виділена з оригінальної клітинної лінії HT-29 раку товстої кишки людини шляхом адаптації до 10 мкМ метотрексату. Ці клітини мають характеристики зрілих келихоподібних клітин, що секретують слиз.
Інформація про культивування клітинної лінії HT-29
Знання основних вимог до культивування клітинної лінії може полегшити вашу роботу з нею. Вам слід знати: який час подвоєння клітинної лінії HT-29? Яка щільність висівання клітин HT-29? Які середовища підходять для клітин HT-29?
Час подвоєння
Середній час подвоєння для клітинної лінії HT-29 становить 24 години.
Адгезивні/суспензійні
HT-29 — це адгезивна клітинна лінія.
Щільність висівання
Рекомендована щільність висівання для клітин HT-29 становить 3 × 104 клітин/см2. Вирощені клітини промивають 1× PBS і відокремлюють після інкубації з Accutase протягом 8–10 хвилин. Додають свіже середовище, а клітини центрифугують. Осад клітин ресуспендують, а клітини розливають у нові колби з рекомендованою щільністю клітин.
Середовище для культивування
Для оптимального культивування клітин HT-29 використовується мінімальне есенційне середовище Ігл (EMEM), доповнене 2,5 мМ L-глутаміном та 10 % FBS. Середовище слід замінювати 2–3 рази на тиждень.
Умови вирощування
Для росту клітин HT-29 необхідний інкубатор з вологістю, температурою 37 °C та подачею 5 % CO2.
Зберігання
Ці клітини зберігаються у паровій фазі рідкого азоту при температурі нижче -195 °C.
Середовище та процес заморожування
Заморожувальне середовище, яке використовується для клітинної лінії HT-29, — це CM-1 або CM-ACF. Клітини заморожують методом повільного заморожування, що забезпечує зниження температури на 1 °C та ефективно зберігає життєздатність клітин.
Процес розморожування
Заморожені клітини HT-29 розморожують у водяній бані, налаштованій на температуру 37 °C. Ці клітини можна ресуспендувати та безпосередньо перенести у колбу зі свіжим ростовим середовищем. На відміну від цього, розморожені клітини можна центрифугувати для видалення елементів середовища для заморожування, ресуспендувати у свіжому середовищі та культивувати у колбах.
Рівень біобезпеки
Для роботи з клітинною лінією HT-29 та її утримання використовується рівень біобезпеки 1.
Клітини HT-29: переваги та обмеження
Кожна клітинна лінія має свої унікальні переваги та недоліки, що відрізняють її від інших клітинних ліній. У цьому розділі розглядаються основні переваги та обмеження, пов'язані з клітинами HT-29.
Переваги
Основними перевагами клітин HT-29 є:
-
Простота культивування
Клітинна лінія HT-29 проста в обробці та утриманні, не вимагає складних умов культивування. Вона широко культивується в дослідницьких лабораторіях.
-
Модель клітин кишечника in vitro
Клітини HT-29 можуть диференціюватися в зрілі клітини кишечника (ентероцити та клітини, що виробляють слиз) за певних умов культивування. Вони використовуються як клітинна модель для вивчення травлення їжі та біодоступності.
-
Висока ефективність трансфекції
Клітини раку товстої кишки HT-29 мають високу ефективність трансфекції, що робить їх придатними для досліджень експресії та регуляції генів. За допомогою різних методів можна проводити як тимчасові, так і стабільні експерименти з трансфекції.
-
Чутливість до ліків
Клітини HT-29 чутливі до хіміотерапевтичних препаратів, таких як фторурацил та оксаліплатин, які зазвичай використовуються для лікування раку товстої кишки. Вони використовуються для вивчення резистентності до ліків та скринінгу потенційних терапевтичних препаратів для колоректального раку.
Обмеження
-
Гетерогенність
Клітини HT-29, як і інші лінії ракових клітин, виявляють гетерогенність і можуть не утворювати однорідної клітинної популяції. Це може вплинути на відтворюваність результатів у певних аналізах і призвести до незначних відхилень у результатах експериментів.
-
Обмежена диференціація
Клітини HT-29 мають обмежений потенціал диференціації. Вони не диференціюються повністю в клітини кишечника або товстої кишки, а виявляють лише кілька характерних ознак. Це обмеження може обмежувати їх використання у вивченні більш складних біологічних процесів.
Клітини HT-29: Застосування
Клітинна лінія HT-29 широко культивується в дослідницьких лабораторіях завдяки широкому спектру застосування. У цьому розділі розглядаються лише кілька значущих застосувань клітин HT-29.
Дослідження раку: HT-29 — це клітинна лінія колоректальної аденокарциноми, тому її використовують для вивчення прогресування раку, його розвитку та основних молекулярних механізмів. У дослідженні, проведеному в 2018 році, клітинну лінію HT-29 використовували для вивчення клітинних молекул, відповідальних за метастазування. У ході цього дослідження було виявлено, що гени віментину та CXCR4 регулюють метастазування клітин. У той час як трансфекція міметика мікроРНК-193a-5p може знизити рівні мРНК цих генів та успішно зменшити метастазування ракових клітин [2].
Токсикологічні дослідження: Клітинна лінія HT-29 широко використовується в токсикологічних дослідженнях. Ці клітини колоректального раку використовуються для оцінки токсичності різних потенційних лікарських засобів за допомогою різних аналізів. Наприклад, в одному дослідженні вивчався потенціал токсичності етанольного екстракту рослини Syzygium cumini на клітинній лінії HT-29. Результати показали значне пригнічення росту клітин HT-29, що вказує на багатообіцяючі протиракові властивості екстракту [3].
Мікробіологія: HT-29 можна використовувати як систему клітин-господарів для дослідження патогенезу потенційних мікроорганізмів, тобто бактерій та вірусів. Дослідники можуть інфікувати клітини HT-29 мікроорганізмами для вивчення їх вірулентності та реакції хазяїна. У такому дослідженні клітини HT-29 використовували для вивчення пробіотичних властивостей молочнокислих бактерій [4]. В іншому дослідженні клітини HT-29 використовували для оцінки ефективності та безпеки лікування бактеріофагами [5].
5. Наукові публікації про клітини HT-29
У цьому розділі ви знайдете інформацію про деякі важливі публікації щодо клітин HT-29, які допоможуть вам у розробці вашого дослідження.
У цьому дослідженні етиловий екстракт Syzygium cumini було запропоновано як потенційний протираковий засіб проти колоректальної клітинної лінії HT-29. Екстракт значно пригнічував ріст ракових клітин.
У цій публікації в журналі Bioscience Reports було перевірено протиракову активність сполуки тетрандрин на клітинах HT-29. Результати показали, що тетрандрин пригнічує проліферацію та ріст ракових клітин через регулювання сигнальних шляхів клітин.
У цьому дослідженні було висунуто гіпотезу, що miRNA-193a-5p потенційно може регулювати метастазування клітин HT-29 шляхом регулювання генів, пов'язаних з метастазуванням.
Ця стаття опублікована в журналі Nature Scientific Reports у 2018 році. У цьому дослідженні використовували пухлинну клітинну лінію HT-29 як модель клітин кишечника для оцінки ефективності запропонованого лікування бактеріофагами.
У цьому дослідженні вчені використовували клітини HT-29 для вивчення пробіотичної активності молочнокислих бактерій. Цікаво, що дослідження показало, що лактобактерії запобігають прилипанню патогенних бактерій до клітин товстої кишки.
Клітини HT-29 Ресурси: протоколи, відео та інше
У цьому розділі розглядаються деякі онлайн-ресурси, присвячені клітинам HT-29, які допоможуть ознайомитися з протоколами їх утримання, культивування та трансфекції.
Протоколи культивування клітин
Наступні ресурси допоможуть вам у субкультуруванні клітин HT-29.
- Культивування клітин HT-29: за цим посиланням ви знайдете базові відомості про живильне середовище, розморожування та субкультурування клітин HT-29.
- Утримання культур HT-29: Ця стаття містить всю корисну інформацію про культивування та утримання клітин HT-29.
Протоколи трансфекції
Клітинна лінія HT-29 має високу ефективність трансфекції і часто використовується в дослідженнях експресії генів. Наведені нижче ресурси описують можливі протоколи трансфекції для цих клітин.
- Трансфекція HT-29: Це посилання на веб-сайт містить детальний протокол трансфекції клітин HT-29.
- Трансфекція клітинної лінії HT-29: Цей документ описує протокол трансфекції клітинної лінії HT-29 плазмідною ДНК.
Відео, пов'язані з клітинною лінією HT-29
Ось кілька відео про культивування та утримання цієї пухлиногенної клітинної лінії.
- Пасажування клітин: це відео демонструє протокол пасажування клітин для адгезивних клітинних ліній.
- Трансфекція клітин HT-29: Це відео допоможе вам ознайомитися з методом трансфекції, що використовується для клітин HT-29.
Ми сподіваємося, що інформація в цій статті буде для вас корисною та достатньою для роботи з клітинною лінією HT-29 та її утримання. Якщо ви плануєте використовувати клітини HT-29 у своєму дослідженні, замовляйте їх у нас.
Посилання
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles, and I. Recio, HT29 cell line. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: p. 113-124.
- Shirafkan, N. та ін., microRNA‐193a‐5p інгібує міграцію клітин раку товстої кишки людини HT‐29 шляхом пригнічення шляху метастазування. Журнал клітинної біохімії, 2019. 120(5): с. 8775–8783.
- Ходавірдіпур, А., Р. Зареан та Р. Сафаралізаде, Оцінка протиракового ефекту етанольного екстракту Syzygium cumini на клітинній лінії колоректального раку HT-29. Журнал раку шлунково-кишкового тракту, 2021. 52: с. 575–581.
- Фонсека, Х.С. та ін., Пробіотичні властивості лактобактерій та їх здатність інгібувати адгезію ентеропатогенних бактерій до клітин Caco-2 та HT-29. Пробіотики та антимікробні білки, 2021. 13: с. 102–112.
- Shan, J., et al., Бактеріофаги є більш вірулентними до бактерій у людських клітинах, ніж у бактеріальних культурах; висновки на основі клітин HT-29. Наукові звіти, 2018. 8(1): с. 5091.