Клітини HK-2 — вивчення функції та патології нирок за допомогою клітин HK-2 у нефрологічних дослідженнях
HK-2 — це лінія безсмертних епітеліальних клітин нирок людини, яка широко використовується в токсикологічних дослідженнях. Дослідники оцінюють вплив екологічних токсинів на ці ниркові клітини. Крім того, вони також використовують клітини HK-2 для дослідження захворювань нирок та механізмів їхнього розвитку.
- Середовище для культивування
- Ідеальним середовищем для клітин HK-2 є середовище для клітинних ліній кератиноцитів, що містить 10% сироватки ембріонів великої рогатої худоби, 0,05 мг/мл екстракту гіпофіза великої рогатої худоби (BPE) та 5 нг/мл епідермального фактора росту (EGF). Середовище слід замінювати кожні 2–3 дні на тиждень.
- Час подвоєння
- Час подвоєння клітин HK-2 становить від 47,3 до 61,7 годин.
- Тип росту
- Клітинна лінія епітелію нирок HK-2 є адгезивною.
- Рівень біобезпеки
- BSL-2
- Доступно у
- Cytion — Замовити HK-2
- Клітини HK-2: походження та загальні характеристики
- Клітинна лінія HK-2: інформація щодо культивування
- Переваги та обмеження клітин HK-2
- Застосування клітинної лінії HK-2 у наукових дослідженнях
- 5. Клітини HK-2: Наукові публікації
- Ресурси для клітинної лінії HK-2: протоколи, відео та інше
- Поширені запитання
Клітини HK-2: походження та загальні характеристики
Походження та загальні характеристики клітинної лінії необхідно знати для правильного поводження, утримання та використання клітинної лінії. У цьому розділі статті розглядаються такі питання: Що таке клітини HK-2 у людській нирці 2? Яка роль HK2? Що таке клітини HK2? Яке походження клітинної лінії HK-2? Які розміри та морфологія клітин HK-2?
- Клітини Human Kidney 2 (HK-2) — це тип клітин проксимальних канальців, що походять із нормальної тканини нирки дорослої людини європейського походження. Клітинна лінія HK-2 була створена шляхом трансфекції клітин нирки рекомбінантним ретровірусом, що містить гени E6/E7 вірусу папіломи людини 16. Цей експеримент призвів до імунізації та створення клітинної лінії епітеліальних клітин нирки HK-2, що безперервно ростуть.
- Клітини HK-2 мають епітеліальну морфологію.
- Розмір клітин HK-2 коливається в діапазоні 17,4–18,6 мкм у діаметрі. Середній діаметр становить 18,2 мкм [1].
Клітинна лінія HK-2: інформація щодо культивування
Інформація про культивування клітинної лінії людської нирки 2 може бути дуже корисною перед початком роботи з нею. У цьому розділі статті наведено найважливішу інформацію про культивування клітин HK-2. Ви дізнаєтеся: чи є клітини HK-2 адгезивними? Який час подвоєння клітин HK-2? Яке середовище використовується для культивування клітин HK-2?
Ключові моменти культивування клітин HK-2
Час подвоєння популяції:
Час подвоєння клітин HK-2 становить від 47,3 до 61,7 годин.
Адгезивні або в суспензії:
Лінія епітеліальних клітин нирок HK-2 є адгезивною.
Коефіцієнт субкультури:
Клітини HK-2 субкультурують у співвідношенні від 1:2 до 1:4. Адгезивні клітини HK-2 промивають 1 x PBS та інкубують при кімнатній температурі протягом 8–10 хвилин після додавання розчину Accutase. До дисоційованих клітин додають культуральне середовище та центрифугують. Зібрані клітини обережно ресуспендують та переливають у нові колби для культивування.
Середовище для росту:
Ідеальним середовищем для клітин HK-2 є середовище для клітинної лінії кератиноцитів, що містить 10% ембріональної сироватки великої рогатої худоби, 0,05 мг/мл екстракту гіпофіза великої рогатої худоби (BPE) та 5 нг/мл епідермального фактора росту (EGF). Середовище слід замінювати кожні 2–3 дні на тиждень.
Умови вирощування:
Культури клітинної лінії Human kidney 2 утримують у зволоженому інкубаторі з подачею 5% CO₂ при температурі 37 °C.
Зберігання:
Заморожені клітини зберігаються у паровій фазі рідкого азоту або при температурі нижче -150 °C в ультранизькотемпературному морозильнику.
Процес заморожування та середовище:
Середовища для заморожування CM-1 або CM-ACF ідеально підходять для заморожування клітин HK-2. Коротко кажучи, обирається метод повільного заморожування, що дозволяє знижувати температуру лише на 1 градус Цельсія на хвилину та захищає клітини від будь-якого шоку.
Процес розморожування:
Заморожені клітини розморожують у водяній бані, нагрітій до температури 37 градусів Цельсія. До цих клітин додають свіже культуральне середовище та ресуспендують. Після цього клітини переносять у нову колбу, що містить середовище для росту. Через 24 години середовище замінюють, щоб видалити компоненти середовища для заморожування.
Рівень біобезпеки:
Культури клітин HK-2 утримуються в лабораторіях рівня біобезпеки 1.
Переваги та обмеження клітин HK-2
HK-2 — це широко використовувана лінія епітеліальних клітин проксимальних канальців людини. Як і інші клітинні лінії, вона також має певні переваги та обмеження. У цьому розділі розглядаються основні переваги та недоліки клітинної лінії «людська нирка 2».
Переваги
До основних переваг клітинної лінії HK-2 належать:
Добре охарактеризована
Клітинна лінія HK-2 має детальну характеристику щодо морфології, розміру та геному. Було проведено численні дослідження цих нормальних клітин нирок.
Безсмертність
HK-2 — це безперервна клітинна лінія з подовженим терміном життя, що дозволяє розмножувати її протягом декількох пасажів. Ця особливість забезпечує безперервне постачання клітин для лабораторних експериментів.
Характеристики епітелію проксимальних канальців
Клітини HK-2 демонструють добре диференційований фенотип, характерний для клітин проксимальних канальців (PTC), що знаходяться в нирках людини. Ця унікальна риса робить клітини HK-2 цінною in vitro моделлю для вивчення фізіології нирок, клітинних процесів та реакцій на різні подразники.
Обмеження
Ось деякі обмеження клітинної лінії HK-2:
Модель in vitro
HK-2 слугує in vitro моделлю нормальних клітин нирок, зокрема демонструючи характеристики епітеліальних клітин проксимальних канальців. Однак вона може не повністю відтворювати складність тканини нирок людини та мікросередовища, що зустрічається in vivo.
Застосування клітинної лінії HK-2 у дослідженнях
Клітинна лінія HK-2 має численні застосування в токсикологічних дослідженнях. Тут ми обговорили деякі конкретні та значущі наукові застосування цієї лінії клітин проксимальних канальців людини.
- Фізіологія нирок: Клітини HK-2 зазвичай використовуються для вивчення нормальної фізіології та функцій нирок. Дослідники використовують ці епітеліальні клітини проксимальних канальців для дослідження іонних каналів, транспортних процесів та інших клітинних механізмів, що регулюють гомеостаз нирок. Наприклад, дослідники вивчали роль каналів Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) у (+)-Conocarpan (CNCP), неолігнані, що індукує загибель клітин епітелію нирок, HK-2 [2].
- Хвороби нирок: Клітинну лінію людської нирки 2 використовують для дослідження різних захворювань нирок, а саме гострого ураження нирок та діабетичної нефропатії, а також їхніх клітинних та молекулярних механізмів. Наприклад, дослідження виявило, що рівні метилювання білка Клото пов’язані з ураженням нирок. Зниження метилування промотора гена Klotho може посилити його експресію та полегшити ураження нирок, індуковане в діабетичних мишах-моделях db/db та клітинах HK-2, оброблених високим рівнем глюкози [3].
- Токсикологічні дослідження: Клітини HK-2 є чудовим дослідницьким інструментом для оцінки потенційних ефектів різних лікарських засобів, хімічних речовин та забруднювачів навколишнього середовища. Ці дослідження можуть допомогти вченим оцінити безпеку ліків та їхні побічні ефекти на ниркові клітини. Наприклад, у дослідженні, опублікованому в 2022 році, оцінювали потенційний вплив полісахаридів та водного екстракту природної рослини Polygonatum kingianum (PK) на індуковану ураном нефротоксичність у клітинах HK-2. Вони виявили, що PK має захисну дію та запобігає урановому отруєнню ниркових клітин [4].
5. Клітини HK-2: Наукові публікації
Нижче наведено кілька цікавих наукових публікацій, присвячених епітеліальним клітинам нирок HK-2.
У цьому дослідженні, опублікованому в журналі «Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity» (2022), висловлено припущення, що циркулярна РНК HIPK3 може зменшити інгібування проліферації клітин HK-2, спричинене токсичним впливом високого рівня глюкози. Крім того, вона може інгібувати загибель клітин шляхом регулювання каскаду miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
У цій науковій публікації в журналі Nanomedicine (2020) оцінювалися різні механізми токсичності наночастинок золота (AuNPs) у ракових клітинах 786-0 та епітеліальних клітинах проксимальних канальців HK-2.
Ця стаття була опублікована в журналі Renal Failure (2022). У висновках зазначається, що мікроРНК-320c може зменшити токсичність, індуковану високим рівнем глюкози, у клітинах нирок (HK-2) шляхом впливу на PTEN та інгібування сигнального шляху PI3K/AKT.
У цьому дослідженні, опублікованому в журналі Tissue Engineering Part A (2022), висловлено припущення, що екзосоми, отримані з мезенхімальних стовбурових клітин, запобігають епітеліально-мезенхімальному переходу клітин нирок HK-2.
У статті, опублікованій у журналі «Journal of Pharmacy and Pharmacology» (2019), стверджується, що lncRNA TapSAKI посилює запальну реакцію та загибель клітин HK-2 шляхом регулювання сигнального шляху microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
Ресурси для клітинної лінії HK-2: протоколи, відео та інше
HK-2 — відома клітинна лінія. Ось кілька ресурсів, що описують протокол культивування клітин HK-2.
- Культура клітин HK-2: Цей веб-сайт містить велику кількість інформації про культуру клітин HK-2. Зокрема, тут наведено рецепт середовища для клітин HK-2, протокол пасажування, а також протокол поводження з проліферативними та кріоконсервованими культурами та їх утримання.
- Пасажування клітин: це відео допоможе вам ознайомитися із загальним протоколом поділу або пасажування адгезивних клітинних ліній.
Посилання
- Handl, J., et al., Вплив багаторазового пасажування на чутливість клітин HK-2 проксимальних канальців людини до токсичних сполук. Physiological Research, 2020. 69(4): с. 731.
- Yang, G., et al., Активація каналів TRPC6 сприяє (+)-конокарпан-індукованій апоптотичній загибелі клітин HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: с. 281-290.
- Ян, С.Х. та ін., EGCG послаблює ниркове ушкодження шляхом зворотного впливу на гіперметилювання klotho у діабетичних мишей db/db та клітинах HK-2. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Захисний ефект полісахаридів та водного екстракту Polygonatum kingianum на токсичність, індуковану ураном, у клітинах нирок людини (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: с. 68-79.