Клітини BV2 - дослідження центральної нервової системи за допомогою клітин мікроглії BV2

BV2 - це отримана від мишей лінія мікрогліальних клітин, яка широко використовується в неврологічних дослідженнях. Ця імморталізована клітинна лінія може слугувати моделлю in vitro для вивчення нейродегенеративних захворювань та пов'язаних з ними клітинних станів і процесів, наприклад, нейрозапалення. Крім того, клітини BV2 розглядаються як альтернативна модельна система для первинної мікроглії.

У цій статті ми обговоримо походження, інформацію про культуру клітин та дослідницькі застосування мишачої лінії мікроглії BV2. Зокрема, ми розглянемо наступне:

Походження та загальні характеристики клітин BV2
Клітинна лінія BV2: Інформація про культивування
Переваги та обмеження клітин BV2
Застосування клітинної лінії BV2 в дослідженнях
Клітини BV2: Наукові публікації
Ресурси для клітинної лінії BV2: Протоколи, відео та інше

1. Походження та загальні характеристики клітин BV2

Цей розділ статті пояснює походження клітинної лінії BV2 та загальні характеристики, які відрізняють її від інших мікрогліальних клітинних ліній. Тут ви дізнаєтесь: Що таке клітини BV2? Звідки беруться клітини BV2? Який розмір клітини BV2?

Лінія мікрогліальних клітин BV2 була отримана з мікроглії неонатальних (новонароджених) C57/BL6 Клітинну лінію імморталізували шляхом інфікування клітин ретровірусом J2, що несе онкоген v-raf/v-myc [1].
Нестимульовані клітини BV2 мають амебоподібну, гіпертрофовану морфологію. Ця морфологія демонструє високоактивований і запальний стан клітин BV2 порівняно з первинною мікроглією [2].
Діаметр, зареєстрований для клітинної лінії BV-2, коливається від 10 до 15 мкм.

Клітинна лінія BV2 проти ECO 2

Обидві лінії є мікрогліальними клітинами миші, але відрізняються одна від одної. Основна відмінність полягає в тому, що BV2 була створена за допомогою генетичних маніпуляцій, тоді як ECO 2 була створена спонтанно. Крім того, ECO 2 має ті ж самі загальні характеристики, що й BV2, але для її культивування потрібне додавання колонієстимулюючого фактору-1 (CSF-1).

Анімація через кольорову мережу нервових клітин з імпульсами.

2.клітинна лінія BV2: Інформація про культивування

Перш ніж працювати з культурою клітинної лінії та підтримувати її в належному стані, необхідно отримати інформацію про культивування клітин. Цей розділ статті допоможе вам дізнатися про всі ключові моменти культивування клітинних ліній BV2. Зокрема, ми поговоримо про наступне: Який час подвоєння BV2? Які середовища використовують для культивування клітин BV2? Клітинна лінія BV2 є адгезивною чи суспензійною? Як розморожувати клітини BV2?

Ключові моменти для культивування клітин BV2

Час подвоєння:	Мікрогліальні клітини BV2 ростуть дуже швидко, середній час подвоєння BV2 становить 34,5 години.
Адгезія або суспензія:	BV2 є адгезивною клітинною лінією.
Співвідношення поділу:	Цю адгезивну мікрогліальну клітинну лінію субкультивують у співвідношенні від 1:2 до 1:4. Клітини промивають PBS та інкубують з Accutase (розчин для дисоціації). Через 10 хвилин їх центрифугують і збирають. Потім ці клітини додають у колби зі свіжим живильним середовищем відповідно до рекомендованого співвідношення.
Поживне середовище:	Для культивування клітинної лінії BV2 використовується середовище RPMI 1640. Для ідеального росту клітин до RPMI BV2 додають 10% FBS, 2,0 мМ стабільного глутаміну, 2,0 г/л NaHCO3. Поживне середовище оновлюють 2-3 рази на тиждень.
Умови вирощування:	Культури BV2 підтримують у зволоженому інкубаторі при 37°C з постійною подачею 5% CO2.
Зберігання:	Заморожені флакони з клітинами BV2 зберігають при температурі нижче -150 °C або в паровій фазі рідкого азоту, або в електричній морозильній камері.
Процес і середовище заморожування:	Для клітинних ліній BV2 рекомендується використовувати заморожувальні середовища CM-1 або CM-ACF. Клітини заморожують з використанням повільного процесу заморожування, який дозволяє знижувати температуру лише на 1°C за хвилину для збереження життєздатності клітин.
Процес розморожування:	Заморожений флакон з клітинами BV2 швидко перемішують на водяній бані (37°C) протягом 40-60 секунд до утворення невеликої крижаної грудки. Розморожені клітини додають до свіжого живильного середовища і центрифугують, щоб видалити компоненти заморожуючого середовища. Зібрані клітини знову ресуспендують і виливають у культуральну колбу для росту.
Рівень біобезпеки:	Для культивування клітинної лінії BV2 рекомендується рівень біобезпеки 1.

Мікрогліальні клітини BV2 під мікроскопом при 40-кратному та 20-кратному збільшенні.

3.переваги та обмеження клітин BV2

Як і інші клітинні лінії, клітини BV2 також мають певні переваги та обмеження. Деякі з них згадані тут.

Переваги

До переваг клітинної лінії BV2 належать

Первинні мікрогліоподібні властивості

Клітини BV2 володіють деякими первинними мікрогліальними характеристиками і використовуються як альтернативна модель для вивчення функцій і реакцій мікроглії. Вони експресують F4/80, CD11b та Iba1, які є важливими біомаркерами первинної мікроглії.

Безсмертя

Клітини BV2 є безсмертними, що дозволяє їм безперервно рости. Ця характеристика робить їх ідеальними для довготривалих експериментів з культурою клітин.

Обмеження

Обмеження, пов'язані з клітинами BV2, є наступними:

Клітинна лінія мишачого походження	Клітинна лінія BV2 отримана з мікроглії миші. Результати досліджень з використанням клітин BV2 можуть мати обмежену застосовність до специфічних для людини захворювань і досліджень.
Модель in vitro	Клітини BV2 слугують моделлю in vitro для вивчення функцій мікроглії. Однак важливо зазначити, що вони можуть не повністю відтворювати характеристики і складність мікрогліальних клітин головного мозку in vivo.

4.застосування клітинної лінії BV2 в дослідженнях

Клітинна лінія BV2 має декілька застосувань у дослідженнях в галузі неврології. У цьому розділі згадані деякі з найпоширеніших дослідницьких застосувань клітин BV2.

Дослідження нейродегенеративних захворювань: Мишача лінія мікрогліальних клітин BV2 є цінним дослідницьким інструментом для вивчення нейродегенеративних захворювань, таких як хвороба Паркінсона, хвороба Альцгеймера та розсіяний склероз. Дослідники вивчали нейротоксичність і патологію захворювань, а також оцінювали терапевтичні засоби з використанням клітинних ліній BV2. Так, у дослідженні, проведеному у 2020 році, оцінювали протизапальну та нейропротекторну дію природного гідроксистильбену, рапонтицину, що міститься в рослині Rheum rhaponticum, використовуючи активовані ліпополісахаридом клітини BV2 як модель хвороби Паркінсона. Сполука послаблює активацію BV2, опосередковану ліпополісахаридом (ЛПС), шляхом інгібування синтази оксиду азоту та зменшення активних форм кисню і прозапальних медіаторів. Отже, рапонтицин чинить протизапальну та нейропротекторну дію на індуковану ЛПС мікрогліальну модель (BV2) [3]. Аналогічним чином, в одному з досліджень було вивчено залучення сигнальних шляхів до нейрозапалення. Дослідники розробили модель запалення через ліпополісахарид-опосередковану активацію BV2. Вони виявили, що сигнальна вісь AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB залучена до нейрозапалення. Крім того, вони також оцінили бета-нафтофлавон (BNF), природний флавоноїд, на предмет його протизапальної та нейропротекторної дії, використовуючи цю модель. Сполука виявляла ці терапевтичні ефекти шляхом пригнічення активації BV2 [4]. Аналогічно, в дослідженні використовували клітини BV2 і вивчали покращувальний вплив препарату зонізаміду на мітохондріальну дисфункцію в мікрогліальних клітинах. Результати цього дослідження підтримують клінічне застосування зонізаміду для лікування хвороби Паркінсона [5].

650,00 EUR*

Вміст: 1.5 milliliter

Ціни без урахування податків та витрат на доставку

cryovial

Номер продукту: 305156

5.клітини BV2: Наукові публікації

Нижче наведені деякі цікаві та найбільш цитовані дослідження за участю клітин BV2.

Мітохондріальні лізати індукують запалення та зміни, пов'язані з хворобою Альцгеймера, в мікрогліальних та нейронних клітинах

Це дослідження опубліковане в Journal of Alzheimer's Disease (2015). У дослідженні припускається, що молекули мтДНК DAMP (damage-associated molecular pattern - молекулярний патерн, пов'язаний з пошкодженням мітохондрій) можуть спричиняти запальні зміни в мікрогліальних клітинах (BV2). Таким чином, вони також можуть сприяти нейрозапаленню при хворобі Альцгеймера.

Терапевтичний ефект відвару хуанлянь цзеду на хворобу Альцгеймера шляхом регулювання фагоцитозу, індукованого aβ в мікрогліальних клітинах bv-2

У цій статті, опублікованій в FARMACIA (2021), використовувалися клітини BV2 і визначався терапевтичний ефект відвару хуанлянь цзеду (HLJDD) на хворобу Альцгеймера. Дослідження показало, що HLJDD сприяє фагоцитозу амілоїду-бета BV2 шляхом підвищення експресії білка Trm2, що було підтверджено за допомогою вестерн-блот-аналізу BV2.

Альфа-синуклеїн активує мікроглію BV2 залежно від її агрегаційного стану

У цій науковій статті, опублікованій в журналі Biochemical and Biophysical Research Communications (2016), припускається, що альфа-синуклеїн, розчинний білок у центральній нервовій системі дорослої людини, може активувати клітини BV2 в залежності від їхнього агрегаційного стану.

Екзосоми клітин BV-2, індуковані альфа-синуклеїном: важливий медіатор нейродегенерації при ХП

Це дослідження було опубліковане в журналі Neuroscience Letters у 2013 році. У цьому дослідженні стверджується, що екзосоми, які виділяються з мікрогліальних клітин BV2, активованих альфа-синуклеїном, можуть бути важливими медіаторами нейродегенерації при хворобі Паркінсона.

Ідебенон зменшує нейрозапалення та модулює мікрогліальну поляризацію в LPS-стимульованих клітинах BV2 та мишах з хворобою Паркінсона, індукованою MPTP

Це дослідження було опубліковане в журналі Frontiers Cellular Neuroscience (2019). У ньому припускається, що ідебенон, антиоксидант, модулює мікрогліальну поляризацію та зменшує запалення в клітинах BV2, активованих ліпополісахаридами, та в моделі мишей з хворобою Паркінсона, індукованою 1-метил-4-феніл-1,2,3,6-тетрагідропіридином (MPTP).

6.ресурси для клітинної лінії BV2: Протоколи, відео та інше

Онлайн-ресурси, доступні по BV2, обмежені. Ось деякі з них.

Субкультивування клітинної лінії BV2: Це посилання на веб-сайт містить короткий протокол субкультивування клітинних ліній BV2.
Розморожування заморожених клітин: Це відео допоможе вам вивчити базовий протокол розморожування та культивування заморожених клітин.

Протокол культивування клітин BV2 наведено тут.

Культивування клітин BV2: Це посилання на веб-сайт містить протокол культивування клітин BV2. Крім того, на ньому також можна знайти живильні середовища для клітинної лінії BV2 та склади середовищ для заморожування.

Список використаних джерел

Ван, Ю., Ю. Пенг та Х. Ян, Коментар: Нейрозапальні моделі культури клітин in vitro та потенційне застосування для лікування неврологічних розладів. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
Саркар С. та ін., Характеристика та порівняльний аналіз нової мишачої мікрогліальної клітинної моделі для вивчення механізмів нейрозапалення при нейротоксичних ураженнях. Нейротоксикологія, 2018. 67: p. 129-140.
Чжао Ф. та ін. Нейропротекторна дія рапонтицину проти хвороби Паркінсона: Результати дослідження на моделі in vitro BV-2 та in vivo MPTP-індукованої моделі мишей. Журнал біохімічної та молекулярної токсикології, 2021. 35(1): p. e22631.
Гао X. та ін., Бета-нафтофлавон інгібує ЛПС-індуковане запалення в клітинах BV-2 через сигнальну вісь AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB. Імунобіологія, 2020. 225(4): p. 151965.
Тада С. та ін., Зонізамід покращує мікрогліальну мітохондріопатію в моделях хвороби Паркінсона. Brain Sciences, 2022. 12(2): p. 268.