Клітини B16 — Основний посібник з використання клітин меланоми B16 в онкологічних дослідженнях
B16 — це клітинна лінія раку шкіри (меланоми) мишачого походження. Ця клітинна лінія є ефективною in vitro моделлю для вивчення раку шкіри людини. Її часто використовують для дослідження утворення солідних пухлин та метастазування ракових клітин.
- Середовище для культивування
- Клітини B16 культивують у середовищі EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium), що містить 10 % ембріональної сироватки бика (FBS). Середовище для росту слід оновлювати 2–3 рази на тиждень.
- Час подвоєння
- Середній час подвоєння популяції клітин B16 становить, за оцінками, 24 години.
- Тип росту
- Клітини B16 є адгезивними і ростуть у моношарах.
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступно у
- Cytion — Замовити B16
Ця стаття допоможе вам зрозуміти основи клітинної лінії меланоми B16. Зокрема, у ній розглядаються такі питання:
Загальні характеристики та походження клітинної лінії B16
У цьому розділі статті розглядаються характерні особливості клітинної лінії меланоми B16. Ви дізнаєтеся відповіді на такі поширені запитання: Що таке клітинна лінія раку B16? Звідки походять клітини B16? Який розмір клітин B16?
- Клітинна лінія B16 була створена в 1954 році. Ці клітини були отримані від мишей C57BL/6J, у яких спонтанно виникла пухлина на шкірі в лабораторії Jackson Laboratories у штаті Мен.
- Це епітеліальні клітини, що виробляють меланін, які мають здатність метастазувати в селезінку, печінку та легені.
- Клітини меланоми B16 ростуть у вигляді моношарів і мають епітеліоподібну та веретеноподібну морфологію.
- Розмір клітин клітинної лінії B16 становить приблизно 15,4 мкм.
- Існують окремі субклони клітин B16, зокрема B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 та B16F10. Ці сублінії відрізняються від батьківських клітин B16 і зберігають деякі специфічні особливості. Наприклад, вони мають відмінності в морфології, розмірі клітин та інших властивостях. B16F10 має високу здатність до метастазування в легені, а B164A5 є найбільш агресивною лінією клітин раку шкіри порівняно з B16F10, B16-GMCSF та B16FLT3 [1].
Інформація щодо культивування клітинної лінії B16
Перед тим, як розпочати утримання або культивування клітинної лінії, вам може знадобитися ключова інформація про час подвоєння, тип клітин, середовища для росту, умови культивування тощо. Цей розділ містить всю необхідну інформацію для культивування клітин B16.
Ключові моменти культивування клітин B16
Час подвоєння популяції:
Середній час подвоєння популяції клітин B16 становить приблизно 24 години.
Адгезивні або у суспензії:
Клітини B16 є адгезивними і ростуть у моношарах.
Щільність висівання:
Рекомендується висівати клітини B16 з щільністю 1–2 × 10⁴ клітин/см². Прикріплені клітини B16 промивають 1× PBS і відокремлюють від поверхні за допомогою розчину Accutase. Клітини центрифугують, а осад клітин ресуспендують у середовищі для росту. Пізніше ці клітини переносять у нову колбу для росту.
Середовище для росту:
Клітини B16 культивують у середовищі EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium), що містить 10 % ембріональної сироватки бика (FBS). Середовище для росту слід оновлювати 2–3 рази на тиждень.
Умови вирощування:
Для вирощування клітинної лінії B16 використовується зволожений інкубатор з подачею 5 % CO2 та температурою 37 °C.
Зберігання:
Ці клітини зберігаються при температурі нижче -150 °C або у паровій фазі рідкого азоту для збереження життєздатності клітин.
Процес заморожування та середовище:
Для заморожування клітин B16 методом повільного заморожування використовується заморожувальне середовище CM-1 або CM-ACF.
Процес розморожування:
Заморожені клітини B16 розморожують при температурі 37 °C у водяній бані, що містить антимікробний засіб. Розморожені клітини можна безпосередньо культивувати, розміщуючи їх у колбах, що містять середовище для росту. Крім того, ці клітини можна центрифугувати для видалення компонентів середовища для заморожування, а потім культивувати в новому середовищі.
Рівень біобезпеки:
З клітинною лінією B16 слід працювати або зберігати її в лабораторії першого рівня біобезпеки.
Клітинна лінія B16: переваги та недоліки
Як і інші клітинні лінії, B16 має унікальне поєднання переваг і недоліків. У цьому розділі перелічено деякі суттєві плюси та мінуси цієї клітинної лінії меланоми.
Переваги
B16 є першим ефективним мишачим інструментом, який широко використовується в дослідженнях метастазування завдяки своїм перевагам. Деякі переваги цієї клітинної лінії раку шкіри:
Легкість культивування
Клітинну лінію B16 легко культивувати в дослідницьких лабораторіях. Вона широко використовується для вивчення біології ракових клітин, сигнальних шляхів тощо.
Швидке зростання
Клітинна лінія меланоми B16 демонструє високу швидкість проліферації, що робить її придатною для вивчення процесів клітинного поділу та росту.
Онкогенність
B16 — це пухлиногенна клітинна лінія з пухлиноподібними властивостями, такими як інвазія, міграція та проліферація. Вона є цінною для вивчення утворення пухлин, їх прогресування та метастазування.
Недоліки
Недоліки, пов'язані з клітинною лінією B16, такі:
Відсутність релевантності для людини
Оскільки B16 є клітинною лінією меланоми миші, вона може неточно відображати біологію раку шкіри людини, що обмежує можливість застосування результатів досліджень у клінічній практиці.
Гетерогенність
Клітини B16 є гетерогенними, демонструючи різноманітні генетичні та фенотипні властивості в межах однієї культури. Це може вплинути на надійність та відтворюваність результатів.
Застосування клітин B16
Клітинна лінія B16 широко використовується в наукових дослідженнях. Ось кілька перспективних застосувань цієї клітинної лінії:
- Біологія пухлин: Ця мишача клітинна лінія раку шкіри є пухлиногенною і широко використовується для розуміння біології пухлин. Було проведено кілька досліджень з метою вивчення клітинних механізмів, що лежать в основі росту, проліферації та метастазування пухлинних клітин, з використанням клітин B16. У дослідженні, проведеному в 2020 році, клітини B16 використовували для вивчення ролі довгої некодуючої РНК, LncRNA MEG3, у формуванні, рості та метастазуванні меланоми. Це дослідження виявило, що некодуюча РНК модулює вісь miRNA-21/E-Cadherin для стимулювання цих клітинних процесів [2]. Аналогічно, було проведено дослідження з метою вивчення потенційної ролі сигналізації Notch1 в індукованій пухлиною імуносупресії з використанням клітин B16 [3].
- Розробка лікарських засобів: клітини B16 використовуються для валідації та тестування потенційних терапевтичних ефектів потенційних лікарських засобів. У дослідженні оцінювали протипухлинну дію неогамбогінової кислоти, природної сполуки, з використанням клітинної лінії B16. Результати дослідження показали, що ця сполука модулює сигнальний шлях PI3K/Akt/mTOR, викликаючи загибель ракових клітин [4]. В іншому дослідженні вивчався протимеланомний ефект гінзенозиду Rg3, сапоніну, з використанням клітинної лінії B16. Дослідження показало, що ця природна сполука проявляє протипухлинну активність шляхом пригнічення шляхів ERK та Akt [5].
5. Наукові публікації, присвячені клітинам B16
Ось кілька важливих наукових публікацій, присвячених клітинній лінії меланоми B16.
У цій публікації в журналі Cancer Cell International (2020) висловлено припущення, що довга некодуюча РНК MEG3 посилює утворення, ріст та метастазування клітин меланоми B16 шляхом модуляції осі miRNA-21/E-кадгерин.
Ця стаття була опублікована в журналі International Journal of Molecular Medicine у 2018 році. У цьому дослідженні вивчався меланогенний ефект та механізми дії похідного псоралену — 4-метил-6-феніл-2H-фуро[3,2-g]хромен-2-ону (MPFC) — у клітинах B16. У дослідженні висунуто гіпотезу, що цей похідний сполуки сприяє меланогенезу шляхом стимулювання сигнальних шляхів PKA та p38 MAPK у клітинах.
Це дослідження було опубліковано в 2018 році в журналі «Journal of Experimental & Clinical Cancer Research». Результати дослідження свідчать про те, що активація сигнального шляху Notch1 у клітинах B16 може перешкоджати протипухлинному імунітету шляхом підвищення експресії гена TGF-β1.
Неогамбогінова кислота індукує апоптоз клітин меланоми B16 через сигнальний шлях PI3K/Akt/mTOR
Це дослідження було проведено Чунланом Ву та його колегами у 2020 році та опубліковано в журналі «Acta Biochimica Polonica». У цьому дослідженні стверджується, що неогамбогінова кислота, природна сполука, може спричиняти загибель клітин меланоми B16 шляхом модуляції сигнального каскаду PI3K/Akt/mTOR.
Ця наукова стаття була опублікована в журналі European Journal of Medicinal Chemistry у 2018 році. У цьому дослідженні вчені вивчали протиракову активність сполуки — комплексу іридію (III) — на клітинах меланоми B16.
Айлантон індукує зупинку клітинного циклу та апоптоз у клітинах меланоми B16 та A375
У цьому дослідженні було висунуто гіпотезу, що біоактивна речовина рослинного походження, айлантон, має протиракову дію, оскільки може індукувати апоптоз та зупинку клітинного циклу в клітинах меланоми B16 та A375. Ця стаття була опублікована в журналі «Biomolecules» у 2019 році.
Ресурси для клітинної лінії B16: протоколи, відео та інше
Існує обмежена кількість ресурсів щодо клітинної лінії B16, що пояснюють протоколи її культивування та трансфекції.
- Культивування клітин меланоми: це відео містить цінні поради щодо культивування клітинних ліній меланоми.
- Субкультура клітинної лінії: це відео пояснює загальний протокол субкультури клітинної лінії.
- Трансфекція клітинної лінії B16F10: це відео пояснює протокол трансфекції для сублінії клітин меланоми B16. Воно може допомогти вам оптимізувати протокол трансфекції для клітин B16.
Нижче наведено деякі протоколи культивування клітин B16.
- Культивування клітин B16: Цей веб-сайт містить всю необхідну інформацію щодо культивування клітин B16, включаючи середовища для росту, субкультурування, розморожування та заморожування клітин.
Посилання
- Danciu, C., et al., Поведінка чотирьох різних субліній клітин мишачої меланоми B 16: шкіра C57 BL/6J. Міжнародний журнал експериментальної патології, 2015. 96(2): с. 73-80.
- Wu, L., et al., LncRNA MEG3 сприяє росту, метастазуванню та формуванню меланоми шляхом модуляції осі miR-21/E-кадгерин. Cancer cell international, 2020. 20: с. 1-14.
- Ян, З., та ін., Сигналізація Notch1 у клітинах меланоми сприяла індукованій пухлиною імуносупресії через підвищення експресії TGF-β1. Журнал експериментальних та клінічних досліджень раку, 2018. 37(1): с. 1–13.
- Wu, C., et al., Неогамбогінова кислота індукує апоптоз клітин меланоми B16 через сигнальний шлях PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): с. 197–202.
- Meng, L., et al., Протипухлинна активність гінзенозиду Rg3 у меланомі шляхом пригнічення шляхів ERK та Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): с. 2069-2079.