Клітини B16-F10 — вивчення клітинної лінії меланоми B16-F10 у дослідженнях метастазування
Клітини B16-F10 становлять клітинну лінію меланоми, отриману від миші C57BL/6J. Вони широко використовуються в дослідженнях раку шкіри. Дослідники використовують ці клітини для вивчення розвитку та прогресування пухлин, а також терапевтичних втручань. У цій статті розглядаються основні аспекти клітин меланоми B16-F10. Зокрема, вона включатиме:
- Середовище для культивування
- Клітини B16-F10 культивують у середовищі DMEM. Для забезпечення ідеального росту клітин середовище доповнюють 10% FBS, 4 мМ L-глутаміном, 1,5 г/л NaHCO3, 4,5 г/л глюкозою та 1,0 мМ піруватом натрію. Середовище слід замінювати 2–3 рази на тиждень.
- Час подвоєння
- Час подвоєння клітин B16-F10 становить приблизно 20,1 години. Він може коливатися від 17 до 21 години, залежно від умов культивування.
- Тип росту
- B16-F10 — це адгезивна клітинна лінія. Клітини швидко ростуть і утворюють моношари.
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступно у
- Cytion — Замовити B16-F10
- Походження та загальні характеристики клітинної лінії B16-F10
- Інформація про культивування клітин B16-F10
- Клітини B16-F10: переваги та недоліки
- Дослідницькі застосування клітин B16-F10
- Публікації, присвячені клітинній лінії B16-F10
- Ресурси щодо клітинної лінії B16-F10: протоколи, відео та інше
- Походження та загальні характеристики клітинної лінії B16-F10
- Інформація про культивування клітин B16-F10
- Клітини B16-F10: переваги та недоліки
- Застосування клітин B16-F10 у наукових дослідженнях
- 5. Публікації, присвячені клітинній лінії B16-F10
- Ресурси щодо клітинної лінії B16-F10: протоколи, відео та інше
- Поширені запитання
Походження та загальні характеристики клітинної лінії B16-F10
Цей розділ надасть вам інформацію про походження та характерні особливості клітин меланоми B16F10. Це допоможе вам ефективно використовувати клітинну лінію у вашій дослідницькій роботі. В основному, ви дізнаєтеся: Що таке клітини B16-F10? З чого походить B16F10? Яка морфологія клітинної лінії B16F12? Який розмір клітин B16F10?
- B16-F10 — це субклон лінії пухлинних клітин B16, отриманий із шкірної тканини мишей C57BL/6J. У даному випадку клітини меланоми B16F10 були отримані після внутрішньовенного введення лінії B16 імунокомпрометованим або сингенним мишам. Ці клітини були відібрані за їхнім потенціалом до утворення метастазованих колоній у легенях in vivo, а потім встановлені після десяти циклів утворення колоній у легенях in vitro [1]. Вона була розроблена Фідлером та колегами у 1976 році.
- Клітинні лінії B16-F10 мають епітеліоподібний та веретеноподібний вигляд.
- Приблизний розмір клітин B16-F10 становить 15,4 ± 1,4 мкм [2].
Клітини B16-F1 та B16-F10
Клітини B16-F1 та B16-F10 були отримані з батьківської клітинної лінії B16. Обидві походять з одного джерела та мають майже однакові характеристики. Однак основною відмінністю є їхня здатність до метастазування. Клітини B16-F10 мають високий метастатичний потенціал, тоді як клітини B16-F1 — низький [3].
Інформація щодо культивування клітин B16-F10
Перед початком роботи з клітинною лінією та її культивуванням необхідно знати про час подвоєння, середовища для росту, умови та протоколи культивування клітин. У цьому розділі буде розглянуто: Який час подвоєння клітин B16-F10? Як культивувати клітини B16-F10? Що таке середовища для клітин B16-F10? Які умови культивування рекомендуються для клітин B16-F10?
Ключові моменти культивування клітин B16-F10
Час подвоєння:
Час подвоєння клітин B16-F10 становить приблизно 20,1 години. Він може коливатися від 17 до 21 години, залежно від умов культивування.
Адгезивні або в суспензії:
B16-F10 — це адгезивна клітинна лінія. Клітини швидко ростуть і утворюють моношари.
Коефіцієнт поділу:
Клітини B16-F10 субкультурують із коефіцієнтом поділу від 1:2 до 1:4. Клітини промивають фосфатно-буферним сольовим розчином (1x), а потім інкубують із розчином для пасажування Accutase протягом 8–10 хвилин при кімнатній температурі. До клітин додають свіже середовище та центрифугують. Зібраний осад клітин знову ресуспендують, а клітини розподіляють у нову колбу, що містить свіже культуральне середовище, відповідно до коефіцієнта поділу.
Середовище для росту:
Клітини B16-F10 культивують у середовищі DMEM. Для забезпечення ідеального росту клітин середовище доповнюють 10% FBS, 4 мМ L-глутаміном, 1,5 г/л NaHCO3, 4,5 г/л глюкози та 1,0 мМ пірувату натрію. Середовище слід замінювати 2–3 рази на тиждень.
Умови вирощування:
Клітини B16-F10 вирощують у зволоженому інкубаторі при температурі 37 °C з подачею 5% CO2.
Зберігання:
Заморожені клітини зберігають при температурі нижче -150 °C в електричному морозильнику з наднизькою температурою або у паровій фазі рідкого азоту для збереження життєздатності клітин.
Процес заморожування та середовище:
Клітини B16-F10 заморожують у середовищах CM-1 або CM-ACF для зберігання. Для цього рекомендується процес повільного заморожування, що дозволяє знижувати температуру лише на 1 °C за хвилину, щоб запобігти шоку клітин.
Процес розморожування:
Заморожені клітини B16-F10 розморожують у водяній бані з попередньо встановленою температурою 37 °C протягом 40–60 секунд. Далі клітини додають до свіжого середовища та центрифугують для видалення компонентів середовища для заморожування. Зібрані клітини ресуспендують у середовищі для росту та переливають у колби для культивування.
Рівень біобезпеки:
Для роботи з клітинною лінією B16-F10 та її утримання необхідна лабораторія рівня біобезпеки 1.
Клітини B16-F10: переваги та недоліки
Як і інші клітинні лінії, B16-F10 також має певні переваги та недоліки. У цьому розділі розглядаються деякі суттєві плюси та мінуси цієї клітинної лінії меланоми шкіри.
Переваги
Клітинна лінія B16-F10 широко використовується в дослідженнях раку. Перевагами клітин B16-F10 є:
Метастатичний потенціал
Клітини B16F10 шкірної меланоми мають високий метастатичний потенціал, що робить їх цінними для вивчення метастазування раку та механізмів, що лежать в його основі.
Модель пухлини in vitro
Клітини B16-F10 слугують in vitro моделлю для вивчення прогресування та росту раку, допомагаючи дослідникам зрозуміти клітинні та молекулярні механізми, що лежать в основі раку.
Недоліки
Недоліки, пов'язані з клітинною лінією B16-F10, такі:
Клітинна лінія, отримана з мишей
B16-F10 — це клітинна лінія, отримана з мишей, що обмежує її застосовність у дослідженнях, специфічних для людини. Результати досліджень цих клітин не завжди можна достовірно перенести на біологію людини.
Дослідницьке застосування клітин B16-F10
Клітинна лінія B16-F10 широко використовується в дослідженнях раку. Тут розглядаються кілька перспективних застосувань цієї клітинної лінії.
- Дослідження раку: Клітинна лінія B16-F10 є цінною моделлю для вивчення процесів у ракових клітинах, включаючи проліферацію, інвазію, міграцію та клітинну смерть або апоптоз. Крім того, вона допомагає дослідникам отримати уявлення про молекулярні механізми та шляхи, що керують цими клітинними процесами. У дослідженні, проведеному в 2018 році, вивчалася роль CCR5 (C-C-хемокінового рецептора типу 5) у переході клітин меланоми з епітеліальних у мезенхімальні та в метастазуванні. Результати показали, що дефіцит CCR5 обмежує ріст пухлини та метастазування, тоді як висока експресія призводить до посиленого росту та метастазування клітин B16-F10. Подальші дослідження показали, що CCR5 регулює експресію TGFβ1, який, у свою чергу, регулює сигнальний шлях PI3K/AKT/GSK3β, сприяючи епітеліально-мезенхімальному переходу та міграції клітин [4].
- Випробування та розробка ліків: пухлинні клітини меланоми B16F10 є дуже агресивними і тому підходять для випробування потенційних протипухлинних препаратів та методів лікування. Дослідники використовують ці клітини та оцінюють вплив різних сполук на ріст, проліферацію та метастазування клітин, сприяючи розробці ліків. У дослідженні, проведеному у 2018 році Валентиною Нанні та колегами, вивчалися терапевтичні ефекти водно-спиртового екстракту квітів Spartium junceum. У дослідженні було висунуто гіпотезу, що екстракт квітів є ефективним для індукування старіння клітин B16-F10, що призводить до пригнічення росту клітин та меланогенезу, отже, він може проявляти потенційну протиракову активність [5].
5. Публікації, присвячені клітинній лінії B16-F10
Ось кілька важливих наукових публікацій, присвячених клітинній лінії меланоми B16-F10:
Це дослідження було опубліковано в журналі Nutrients (2020). У ньому висловлено припущення, що етанольний екстракт Sorghum bicolor має антимеланогенний ефект у клітинах меланоми шкіри B16F10.
Кальцитріол пригнічує проліферацію та потенційно індукує апоптоз у клітинах B16–F10
Дослідження, опубліковане в журналі Medical Science Monitor Basic Research (2022), показало, що препарат кальцитріолу чинить протипухлинну дію на клітини меланоми B16-F10 шляхом інгібування проліферації та індукування апоптозу.
Ця стаття опублікована в журналі Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Результати дослідження показали, що кардоли, резорцинові ліпіди, чинять інтенсивну цитотоксичну дію на клітинну лінію B16-F10.
У дослідженні, опублікованому в журналі «Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine» (2018), було досліджено антиметастатичний потенціал екстракту екзокарпу гінкго білоба на клітинах B16-F10.
У цьому дослідженні, опублікованому в журналі World Neurosurgery (2018), було висунуто гіпотезу, що тимохінон може бути ефективним засобом лікування внутрішньомозкових метастатичних уражень, оскільки він пригнічує ріст клітин B16-F10 та індукує апоптоз.
Ресурси для клітинної лінії B16-F10: протоколи, відео та інше
Ендотеліальні клітини B16F10 широко використовуються в дослідженнях раку шкіри. Ось кілька онлайн-ресурсів, що пояснюють протоколи їх культивування та трансфекції:
- Трансфекція клітин меланоми B16F10: цей відеоурок допоможе вам ознайомитися з протоколом трансфекції клітин B16-F10.
- Трансфекція B16-F10: Цей документ пояснює протокол in vitro трансфекції ДНК для клітин меланоми шкіри B16F10.
Наступне посилання містить протокол культивування клітин B16-F10:
- Субкультура B16-F10: Цей веб-сайт містить корисну інформацію про клітини меланоми B16F10. Він включає середовища для росту, час подвоєння, умови культивування та протокол субкультури клітин, а також роботу з кріоконсервованими та проліферативними культурами.
Посилання
- Poste, G., et al., Порівняння метастатичних властивостей клонів меланоми B16, виділених із культивованих клітинних ліній, підшкірних пухлин та окремих метастазів у легенях. Cancer Research, 1982. 42(7): с. 2770–2778.
- Nakamura, M., D. Ono та S. Sugita, Механофенотипування варіантів клітин меланоми B16 для оцінки ефективності лікування (-)-епігалокатехіном галатом за допомогою конічного мікрофлюїдного пристрою. Micromachines, 2019. 10(3): с. 207.
- Данчу, К. та ін., Поведінка чотирьох різних субліній клітин мишачої меланоми B16: шкіра C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): с. 73–80.
- Лю, Дж. та ін., Висока експресія CCR5 у меланомі посилює епітеліально-мезенхімальний перехід та метастазування через TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): с. 481–493.
- Nanni, V., et al., Водно-спиртовий екстракт квітів Spartium junceum L. пригнічує ріст та меланогенез у клітинах B16-F10 шляхом індукції старіння. Phytomedicine, 2018. 46: с. 1-10.