Клітини ARPE-19 — спеціальний огляд досліджень клітин пігментного епітелію сітківки з використанням ARPE-19
ARPE-19 — це спонтанно виниклі клітини пігментного епітелію сітківки, отримані з людського організму. Вони використовуються для вивчення різних аспектів біології сітківки, патологічних станів та терапевтичних втручань (фармакології). Ця стаття має на меті надати вичерпну інформацію про безсмертні клітини ARPE-19. В основному, будуть розглянуті загальні характеристики, умови культивування та різноманітні дослідницькі застосування клітинної лінії. Отже, прочитавши цю статтю, ви отримаєте глибоке розуміння:
- Середовище для культивування
- Для культивування клітинної лінії ARPE-19 використовується середовище DMEM або Ham’s F12. Середовище ARPE-19 доповнюється 5% FBS, 3,1 г/л глюкози, 15 мМ HEPES, 1,6 мМ L-глутаміну, 1,0 мМ пірувату натрію та 1,2 г/л NaHCO3. Середовище замінюють 2–3 рази на тиждень.
- Час подвоєння
- Час подвоєння ARPE-19 становить приблизно 55–65 годин. Клітини можуть пройти до 48 подвоєнь популяції.
- Тип росту
- ARPE-19 — це адгезивна клітинна лінія.
- Рівень біобезпеки
- BSL-1
- Доступно у
- Cytion — Замовити ARPE-19
- Клітини ARPE-19: походження та загальні характеристики
- Клітинна лінія ARPE-19: інформація щодо культивування
- Переваги та обмеження клітин ARPE-19
- Застосування клітинної лінії ARPE-19 у наукових дослідженнях
- Клітини ARPE-19: Наукові публікації
- Ресурси для клітинної лінії ARPE-19: протоколи, відео та інше
- Клітини ARPE-19: походження та загальні характеристики
- Клітинна лінія ARPE-19: інформація про культивування
- Переваги та обмеження клітин ARPE-19
- Застосування клітинної лінії ARPE-19 у наукових дослідженнях
- 5. Клітини ARPE-19: Наукові публікації
- Ресурси для клітинної лінії ARPE-19: протоколи, відео та інше
- Поширені запитання
Клітини ARPE-19: походження та загальні характеристики
Знання походження та загальних характеристик клітинної лінії є обов'язковим для її ефективного використання в дослідженнях. У цьому розділі статті ви знайдете всю інформацію про клітинну лінію ARPE. Наприклад: Що таке клітинна лінія ARPE-19? Чому варто використовувати клітини ARPE-19? Що таке клітинна лінія ARPE-19/HPV-16? Чи є клітини ARPE-19 безсмертними? Яка морфологія та розмір клітин ARPE 19?
- Лінія безсмертних клітин пігментного епітелію сітківки, ARPE-19, була отримана з очей 19-річного чоловіка, який помер від травми голови в результаті нещасного випадку. Вона була створена Емі Аотакі-Кін у 1986 році.
- Ці клітини експресують маркери клітин пігментного епітелію сітківки, а саме CRALBP та RPE-65, що свідчить про їхню здатність утворювати стабільні моношари, які характеризуються морфологічною та функціональною полярністю.
- Клітини ARPE-19 мають морфологію, схожу на епітеліальні клітини.
- Клітини ARPE-19 здебільшого мають нормальний каріотип, за винятком однієї делеції та додавання у довгій плечі хромосом 9 та 19 відповідно. Крім того, також спостерігаються деякі анеуплоїдії [1].
Клітинна лінія ARPE-19: інформація щодо культивування
Базова інформація про культивування клітин є надзвичайно важливою для правильного поводження з клітинною лінією та її утримання. Цей розділ допоможе вам дізнатися про ключові моменти культивування клітинної лінії ARPE-19. Ви дізнаєтеся: що таке час подвоєння ARPE-19? Яка щільність висівання ARPE-19? Яка щільність клітин ARPE-19? Що таке середовище для заморожування ARPE-19? Як культивувати клітинну лінію ARPE-19?
Ключові моменти культивування клітин ARPE-19
Час подвоєння популяції:
Час подвоєння ARPE-19 становить приблизно 55–65 годин. Клітини можуть пройти до 48 подвоєнь популяції.
Адгезивні або в суспензії:
ARPE-19 — це адгезивна клітинна лінія.
Коефіцієнт субкультури:
Коефіцієнт субкультури ARPE-19 становить від 1:3 до 1:5. Адгезивні клітини промивають 1x PBS та інкубують з розчином для дисоціації, аккутазою, протягом 8–10 хвилин. Відокремлені клітини додають до свіжого середовища та центрифугують. Осад клітин знову ресуспендують і переливають у культуральну колбу, що містить свіже середовище.
Середовище для культивування:
Для культивування клітинної лінії ARPE-19 використовують середовище DMEM або Ham’s F12. Середовище ARPE-19 доповнюють 5% FBS, 3,1 г/л глюкози, 15 мМ HEPES, 1,6 мМ L-глутаміну, 1,0 мМ пірувату натрію та 1,2 г/л NaHCO3. Середовище замінюють 2–3 рази на тиждень.
Умови культивування:
Клітини ARPE-19 утримують у зволоженому інкубаторі при температурі 37 °C з подачею 5% CO2.
Зберігання:
Клітинну лінію можна зберігати у паровій фазі рідкого азоту або при температурі нижче -150 °C для забезпечення життєздатності клітин протягом тривалого часу.
Процес заморожування та середовище:
В якості середовища для заморожування ARPE-19 використовують CM-1 або CM-ACF. Коротко кажучи, клітини заморожують методом повільного заморожування, який дозволяє знижувати температуру лише на 1 °C за хвилину та захищає клітини від шоку.
Процес розморожування:
Клітини розморожують у водяній бані, попередньо нагрітій до 37 °C. Після того, як залишається невеликий шматок льоду, клітини додають до свіжого культурального середовища та центрифугують. Це дозволяє видалити елементи середовища для заморожування. Далі осад клітин ресуспендують, а клітини переносять у колбу для культивування.
Рівень біобезпеки:
З клітинами ARPE-19 працюють у лабораторіях 1-го рівня біобезпеки.
Переваги та обмеження клітин ARPE-19
Клітини ARPE-19 широко використовуються в дослідженнях біології клітин сітківки. Як і інші клітини, вони також мають певні переваги та обмеження. Деякі з них перелічені в цьому розділі:
Переваги
Основні переваги клітинної лінії ARPE-19 включають:
Модель клітин сітківки
Клітини ARPE-19 дуже схожі на клітини пігментного епітелію сітківки людини, що робить їх ідеальними для дослідження захворювань сітківки та тестування лікарських препаратів.
Стабільна швидкість росту
Ці клітини демонструють стабільний ріст і можуть підтримуватися протягом тривалого часу, що полегшує проведення довгострокових експериментів.
Придатність до трансфекції
Клітинна лінія ARPE-19 є чудовим носієм для трансфекції, який широко використовується як у дослідженнях тимчасової, так і стабільної експресії.
Обмеження
Ось деякі обмеження, пов'язані з клітинною лінією ARPE-19:
Обмежена диференціація
Диференціація ARPE-19 є обмеженою порівняно з первинними клітинами сітківки. Це може потенційно вплинути на певні дослідження, пов’язані з диференціацією.
Застосування клітинної лінії ARPE-19 у дослідженнях
Клітинна лінія ARPE-19 має численні застосування в дослідженнях сітківки. Тут ми розповіли про деякі конкретні та значущі наукові застосування цієї клітинної лінії пігментного епітелію сітківки.
- Дослідження захворювань сітківки: клітини ARPE-19 дають цінну інформацію про патогенез захворювань сітківки. Дослідники використовують клітини для вивчення механізмів захворювань та потенційних методів лікування. Дослідження, проведене у 2020 році, виявило, що циркулярна РНК hsa_circ_0041795 взаємодіє з miRNA-646 та VEGFC, сприяючи ушкодженню клітин пігментного епітелію сітківки людини ARPE-19, спричиненому високим рівнем глюкози. Тому в дослідженні пропонується використовувати цю циркулярну РНК як ефективну терапевтичну та діагностичну мішень для боротьби з діабетичною ретинопатією [2]. Аналогічно, Цзин Ян та колеги використовували клітини ARPE-19 і надали інформацію щодо патогенезу діабетичної ретинопатії. Вони виявили, що інгібування lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) може пригнічувати запальну реакцію та епітеліально-мезенхімальний перехід клітин ARPE-19, оброблених високим рівнем глюкози [3].
- Випробування ліків: клітини ARPE-19 використовуються для оцінки ефективності та безпеки ліків і сполук, що допомагає розробляти методи лікування або терапії захворювань сітківки. Наприклад, дослідження, проведене у 2019 році, виявило захисні ефекти біоактивних речовин Syzygium malaccense проти стресу, індукованого перекисом водню, у клітинах пігментного епітелію сітківки людини, ARPE-19 [4]. Після цього в одному дослідженні було виявлено терапевтичну роль екстракту Prunella vulgaris var. L проти пошкодження, спричиненого синім світлом, у клітинах ARPE-19 та на мишачій моделі [5].
5. Клітини ARPE-19: Наукові публікації
Нижче наведено кілька цікавих наукових публікацій, присвячених клітинам пігментного епітелію сітківки ARPE-19.
Оцінка реакції мікроРНК у клітинах ARPE-19 на окислювальний стрес
Ця наукова стаття була опублікована у 2018 році в журналі «Cutaneous and Ocular Toxicology». У цьому дослідженні оцінювали експресію мікроРНК у відповідь на окислювальний стрес, індукований у клітинах пігментного епітелію сітківки людини ARPE-19 шляхом обробки перекисом водню.
У цій публікації в журналі «World Journal of Stem Cells» (2021) висловлено припущення, що кондиціоновані середовища клітин ARPE-19 містять фактори росту, які сприяють нейральній диференціації мезенхімальних стовбурових клітин, отриманих із жирової тканини.
Це дослідження було опубліковано в журналі «International Journal of Molecular Sciences» (2019). У ньому стверджується, що кверцетин захищає від стимульованого IL-1β вивільнення хемокінів у клітинах ARPE-19, запобігаючи активації каскадів MAPK та NF-κB, що покращує запальну реакцію.
Ця наукова стаття була опублікована в International Journal of Molecular Sciences (2018). У цьому дослідженні оцінювали можливий вплив окислювального стресу та запалення на функції SIRT1 (Sirtuin 1) та DNMT (ДНК-метилтрансфераз), а також на метилювання LINE-1 (long interspersed nuclear element-1) у клітинах ARPE-19.
У цій статті, опублікованій у журналі Antioxidants (2022), було виявлено, що екстракти квітів Chrysanthemum boreale чинять захисну дію проти пошкодження сітківки, індукованого N-ретиніліден-N-ретинілетаноламіном (A2E), у клітинах ARPE-19.
Ресурси для клітинної лінії ARPE-19: протоколи, відео та інше
ARPE-19 — це широко використовувана лінія епітеліальних клітин сітківки. Доступні ресурси, що охоплюють протоколи культивування та трансфекції клітин ARPE-19, наведено тут:
- Трансфекція ARPE-19: це відео є покроковим посібником з вивчення протоколу трансфекції для клітинної лінії ARPE-19.
Ось декілька ресурсів, що описують протокол культивування клітин ARPE-19:
- Протокол культивування клітин ARPE-19: Це посилання містить інформацію про культивування та утримання клітин ARPE-19. Воно включає інформацію про середовище ARPE-19, умови культивування, протоколи субкультивування та роботу з проліферативними та кріоконсервованими культурами.
Посилання
- Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. та X. Kang, hsa_circ_0041795 сприяє пошкодженню клітин пігментного епітелію сітківки людини (ARPE 19), спричиненому високим рівнем глюкози, шляхом поглинання miR-646 та активації VEGFC. Gene, 2020. 747: с. 144654.
- Yang, J. та ін., Приглушення SNHG1 інгібувало епітеліально-мезенхімальний перехід та запальну реакцію клітин ARPE-19, індуковану високим рівнем глюкози. J Inflamm Res, 2021. 14: с. 1563–1573.
- Arumugam, B., et al., Захисний ефект похідних мірицетину з Syzygium malaccense проти стресу, індукованого перекисом водню, у клітинах ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25: с. 47.
- Кім, Дж., К. Чо та С.-Й. Чун, Захисний ефект екстракту Prunella vulgaris var. L проти пошкоджень, індукованих синім світлом, у клітинах ARPE-19 та сітківці мишей. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: с. 622–631.