Клітинна лінія A375 — посібник з дослідження меланоми

A375 — це клітинна лінія людської меланоми, яка широко використовується в токсикологічних та імуноонкологічних дослідженнях. Дослідники використовують цю клітинну лінію для вивчення біології раку та сигнальних шляхів, тестування або скринінгу потенційних протиракових препаратів, а також для розробки нових ефективних засобів лікування.

Походження та загальні характеристики клітин A375

Знання про походження та загальні характеристики клітинної лінії може допомогти вам спланувати її використання в дослідженнях. У цьому розділі статті розглядаються походження та особливості клітинної лінії A375. Наприклад, що таке клітинна лінія A375? Які характеристики має клітинна лінія A375? Звідки походять клітини A375? Яка морфологія клітин меланоми A375? Який розмір клітин A375?

• Клітинна лінія раку шкіри A375 походить з експлантатної культури солідної пухлини 54-річної жінки зі злоякісною меланомою [1].
• Клітини A375 мають епітеліоподібну морфологію.
• Розмір клітин A375 відносно менший порівняно з іншими клітинними лініями. Їх діаметр становить приблизно 12 мкм.
• Клітини меланоми A375 є гіпотриплоїдними. Модальна кількість хромосом для цієї клітинної лінії становить 62. Зазвичай кожна клітина має дев'ять маркерних хромосом та по одній копії нормальних хромосом N2, N6 та N22.

Клітини A375: інформація про культивування клітин

Культури клітин A375 легко утримувати. Вони не мають жодних вибагливих вимог до культивування. Цей розділ допоможе вам дізнатися необхідну інформацію про культивування клітин. Наприклад, який час подвоєння клітин A375. Яке середовище для клітинної лінії A375? Яка щільність висівання A375? Чи є клітини меланоми A375 адгезивними?

Ключові моменти культивування клітин A375

Час подвоєння популяції:

Час подвоєння A375 становить 20 годин.

Адгезивні або у суспензії:

A375 — це адгезивна лінія клітин меланоми людини.

Щільність висівання:

Ідеальна щільність клітин для культивування A375 становить 1 × 10⁴ клітин/^см2. Адгезивні клітини промивають 1 × фосфатно-буферним сольовим розчином (PBS) та інкубують з розчином для пасажування (Accutase). Після цього до клітин додають культуральне середовище та центрифугують. Зібрані клітини ресуспендують у культуральному середовищі та розливають у нові колби для росту.

Середовище для росту:

DMEM рекомендується як ідеальне середовище для A375 при додаванні 10% ембріональної сироватки бика (FBS), 4,5 г/л глюкози, 1,5 г/л NaHCO3, 4 мМ L-глутаміну та 1,0 мМ пірувату натрію. Середовище для A375 слід оновлювати 2-3 рази на тиждень.

Умови культивування:

Клітини меланоми A375 вирощують у зволоженому інкубаторі (37 °C) з подачею 5% CO2.

Зберігання:

Заморожені клітини A375 слід зберігати при температурі нижче -150 °C у паровій фазі рідкого азоту або в електричній морозильній камері.

Процес заморожування та середовище:

Для заморожування клітинної лінії A375 використовують середовища CM-1 або CM-ACF. Для збереження життєздатності клітин обрано процес повільного заморожування, що забезпечує поступове зниження температури на 1 °C.

Процес розморожування:

Флакон із замороженими клітинами меланоми A375 швидко струшують у водяній бані протягом 40–60 секунд, доки не залишиться лише невеликий шматок льоду. До клітин додають свіже середовище та центрифугують для видалення елементів середовища для заморожування. Отриманий осад клітин знову суспендують та переливають у нові колби.

Рівень біобезпеки:

Культури A375 обробляються та зберігаються в лабораторних умовах рівня біобезпеки 1.

Наукові застосування клітинної лінії A375

Клітинна лінія A375 має широке застосування в дослідженнях раку. Ось деякі з найпоширеніших областей, де використовуються клітини A375.

• Дослідження раку: Клітини A375 мають широке застосування в дослідженнях меланоми. Дослідники використовували ці клітини для вивчення біології раку шкіри, процесів та основних механізмів клітинної сигналізації, включаючи проліферацію, міграцію та інвазію клітин. Це також може допомогти дослідникам ідентифікувати нові молекулярні терапевтичні мішені. У дослідженні, проведеному Лін Чжу та колегами у 2019 році, використовувалися високоагресивні клітини меланоми A375, і було виявлено роль мікроРНК-3662 у рості та інвазії клітин меланоми A375. Результати дослідження свідчать, що мікроРНК-3662 націлена на ген ZEB1 і регулює ріст клітин меланоми in vitro та in vivo в моделі пухлини A375 [2]. Аналогічно, дослідження, проведене у 2018 році, виявило, що шляхи PI3K/AKT та MAPK/ERK беруть участь у проліферації та метастазуванні клітинної лінії A375 [3].
• Розробка та випробування лікарських засобів: клітинна лінія A375 є корисною in vitro моделлю пухлини для тестування та скринінгу потенційних протиракових засобів. Дослідники оцінюють токсичність та ефективність нових хіміотерапевтичних препаратів, сполук та інших методів лікування, використовуючи ці клітини меланоми A375. Наприклад, у одному дослідженні вивчалися протиракові властивості мікро- та нановезикул, отриманих із грейпфрута, на клітинах людської меланоми A375. Результати показали, що мікро- та нановезикули індукують зупинку клітинного циклу та апоптоз, а також гальмують експресію генів, що відповідають за проліферацію, міграцію та інвазію клітин [4].

Клітини A375: Публікації

Тут згадано деякі важливі наукові публікації, присвячені клітинам A375.

Вітамін D та його аналоги з низьким кальцієвим ефектом модулюють протиракові властивості цисплатину та дакарбазину в клітинній лінії A375 меланоми людини

Це дослідження було опубліковано в журналі «Journal of Oncology» у 2019 році. У дослідженні було висунуто гіпотезу, що сумісне лікування вітаміном D та його аналогами покращує протиракову активність цисплатину та дакарбазину в клітинах меланоми A375.

Оцінка in vitro протимеланомної дії (клітинна лінія A375) гелю та екстрактів цілих листів вибраних видів алое

Це дослідження було опубліковано в журналі «Journal of Herbal Medicine» у 2022 році. У цьому дослідженні вивчалися антимеланомні ефекти гелю алое вера на клітинах меланоми A375.

Член родини фермітинів 2 сприяє прогресуванню меланоми шляхом посилення зв'язування p-α-Pix з Rac1 для активації шляху MAPK

У цьому дослідженні, опублікованому в журналі «Oncogene» (2021), було висунуто гіпотезу, що член родини фермітинів 2 (FERMT2 або kindlin-2) сприяє прогресуванню меланоми шляхом активації MAPK через зв'язування з p-α-Pix та Rac1.

FARP1 сприяє проліферації клітин шляхом модуляції сигнального шляху MAPK у шкірній меланомі

У цьому дослідженні, опублікованому в журналі The American Journal of Dermatopathology (2019), висловлено припущення, що FARP1 може сприяти розвитку та прогресуванню шкірної меланоми. Таким чином, він може бути корисною терапевтичною мішенню.

Цитотоксичний та апоптотичний потенціал екстрактів Phyllodium elegans на лініях ракових клітин людини

Ця наукова стаття була опублікована в журналі Bioengineered (2019). У цьому дослідженні вивчалася цитотоксична та апоптотична активність екстракту рослини Phyllodium elegans на лініях клітин карциноми людини, включаючи A375.

Ресурси для клітинної лінії A375: протоколи, відео та інше

Нижче наведено кілька онлайн-ресурсів, присвячених клітинам A375.

• Трансфекція клітин A375: Цей відеоурок допоможе вам крок за кроком навчитися трансфекції клітин A375.
• Культивування клітин: це відео містить дуже корисну інформацію щодо культивування клітинних ліній.

Протоколи культивування клітин A375 наведені тут.

• Клітинна лінія A375: це посилання містить корисну інформацію про культивування та утримання клітинної лінії A375, включаючи середовища для A375 та роботу з замороженими та проліферуючими культурами A375.

Література

1. Avram, S., et al., Стандартизація моделей людської меланоми A375 на хоріоалантоїльній мембрані курячих ембріонів та голих мишах Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): с. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 націлений на ZEB1 і послаблює інвазію високоагресивної лінії клітин меланоми A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: с. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Оксифадіхалкон C інгібує проліферацію та метастазування клітин меланоми A375 шляхом пригнічення шляхів PI3K/Akt та MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: с. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Мікро- та нановезикули, отримані з грейпфрута, демонструють відмінні метаболомні профілі та протиракові властивості у клітинній лінії A375 людської меланоми. Cells, 2020. 9(12): с. 2722.