Celice Vero: Pionirske poti v virusnih študijah in inovacijah na področju cepiv

Celična linija Vero, imortaliziran model sesalskih celic, ki izhaja iz epitelijskih celic ledvic afriške zelene opice, je v ospredju raziskav na področju virologije, mikrobiologije ter celične in molekularne biologije. Njihova široka uporaba zajema razvoj cepiv, farmacevtske preglede ter raziskovanje biologije virusov in parazitov, imunologije tumorjev in imunoterapevtskih strategij.

Izvor in ključne značilnosti celic Vero

Če se poglobimo v celično linijo, kot je Vero, se vprašamo več stvari: Kaj točno so celice Vero? Kako je bila ustvarjena celična linija Vero? Kakšna zgodba se skriva za imenom "Vero"? Namen tega segmenta je pojasniti nastanek in glavne lastnosti celic Vero.

Celična linija Vero je nastala leta 1962 iz epitelijskih celic ledvic afriške zelene opice. To linijo sta gojila Y. Kawakita in Yasumura na univerzi Chiba na Japonskem. Izraz "Vero" izhaja iz "Verda reno" v esperantu, kar pomeni "zelena ledvica", čeprav se "Vero" ujema tudi s pojmom "resnica"

Celice Vero običajno tvorijo monosloje, vendar se lahko prilagodijo suspenzijskim kulturam in imajo epitelijsko strukturo. Za te celice je značilna zaobljena do podolgovata oblika in povprečni premer približno 17 µm. Celice Vero imajo hipodiploidno število kromosomov, pri čemer je modalno število kromosomov 58 pri približno 66 % celične populacije, čeprav so v majhnem deležu (1,7 %) celic prisotne različice z višjimi ploidnostmi.

Kloni celic Vero in njihove edinstvene lastnosti

Različni kloni, pridobljeni iz linije celic Vero, imajo edinstvene lastnosti, po katerih se razlikujejo od prvotne linije. Med njimi sta dva pomembna klona celic Vero:

• Celična linija Vero E6: Ta klon, znan tudi kot Vero C1008, izhaja iz celic Vero 76 in ga je leta 1979 s tehniko redčenja na mikrotitrskih ploščah izoliral P. J. Price. Celice Vero E6 so posebej primerne za gojenje virusov, ki se počasi razmnožujejo.

• Celice Vero 76: Te celice izvirajo iz ledvic afriške zelene opice iz leta 1968 in ohranjajo epitelijsko morfologijo, značilno za celice Vero.

Te različice celic Vero so poleg starševske linije še vedno pomembne za napredek viroloških raziskav in razvoj medicinskih posegov, kar kaže na njihov pomen v znanstveni skupnosti.

Informacije o gojenju

Pri gojenju celic Vero, opičje celične linije, je treba poznati posebne parametre, kot so čas podvojitve, gostota razmnoževanja in ustrezno gojišče.

• Čas podvojitve populacije: čas podvojitve celic Vero je približno 24 ur.

• Prijemljivost: Celice Vero se oprimejo površin in pri gojenju običajno tvorijo enovrstne plasti.

• Gostota naselitve: Priporočljivo je začeti z gostoto naselitve 1 x 10^4 celic/cm^2. Če želite gojiti lepljive celice Vero, jih sperite s PBS in jih obdelujte z Accutase, da se odcepijo. Po ločitvi celice centrifugirajte, jih ponovno suspendirajte v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke za gojenje.

• Rastno gojišče: Za gojenje celic Vero sta primerna gojišča Ham's F12 in DMEM. Za optimalno rast ju je treba dopolniti z 2,5 mM L-glutamina in 5 % fetalnega govejega seruma (FBS). Gojišče je treba osvežiti dva- do trikrat na teden.

• Pogoji rasti: Celice Vero uspevajo pri temperaturi 37 °C v vlažnem okolju s 5 % CO2.

• Shranjevanje: Za dolgoročno shranjevanje je treba celice Vero hraniti pri temperaturi pod -150 °C, bodisi v zamrzovalniku z zelo nizko temperaturo bodisi v parni fazi tekočega dušika.

• Postopek zamrzovanja in medij: Za kriokonzervacijo kot gojišče za zamrzovanje uporabite CM-1 ali CM-ACF ali gojišče s FBS in DMSO. Uporabite tehniko počasnega zamrzovanja s postopnim zniževanjem temperature za 1 °C na minuto.

• Postopek odmrzovanja: Celice Vero odmrznite tako, da posodo potopite v vodno kopel s temperaturo 37 °C in jo 40-60 sekund nežno mešajte. Nato celice razredčite v svežem gojišču, centrifugirajte, da odstranite krioprotektant, jih ponovno suspendirajte v svežem gojišču in jih dajte v novo bučko, da se obnovijo in rastejo.

• Raven biološke varnosti: S celicami Vero je treba ravnati v laboratoriju, ki izpolnjuje zahteve za 1. stopnjo biološke varnosti.

Uporaba celične linije Vero v raziskavah

Celična linija Vero ima številne raziskovalne aplikacije na področju celične biologije in virologije. V nadaljevanju smo obravnavali nekatere posebne.

Celice Vero pri raziskavah virusov in proizvodnji cepiv

Celice Vero, pridobljene iz celic afriške zelene opice, so postale osnovni element pri razvoju bioprocesov cepiv za različne viruse, vključno s poliovirusom in virusom japonskega encefalitisa. Njihova prilagodljivost v adherentnih in suspenzijskih kulturah ter široka sposobnost podpore virusov, vključno s patogeni, kot je virus des petits ruminants, poudarjajo njihov pomen pri izolaciji virusov in razvoju cepiv.

V številnih študijah so bile celice Vero uporabljene za proizvodnjo cepiv za ljudi. Na primer, pomembna študija, objavljena leta 2019, je pokazala uporabo celic Vero pri razvoju inaktiviranega cepiva za virus rumene mrzlice [2].

Celice Vero se pogosto uporabljajo v študijah virusnih okužb, na primer v študiji iz leta 2020, v kateri so bile celice Vero okužene z različnimi izolati virusa SARS-CoV-2 za preučevanje lastnosti rasti virusa [4]. Podobno so v drugi študiji preučevali celične odzive na okužbo z virusom SARS-CoV-2 z uporabo celične kulture Vero [5].

Vloga celic Vero pri tkivnem inženirstvu in razvoju bioprocesov

Poleg proizvodnje cepiva celice Vero prispevajo k tkivnemu inženirstvu in širšemu področju razvoja bioprocesov, kar poudarja potrebo po stalnih raziskavah njihovih lastnosti in uporabe. Izbira ustreznih podlinij celic Vero je ključna za čim večje izkoriščanje njihovega potenciala v biotehnološki in farmacevtski industriji.

Uporaba celic Vero pri preskušanju učinkovitosti in varnosti zdravil

Celice Vero se pogosto uporabljajo pri testiranju zdravil za ocenjevanje učinkovitosti in varnosti farmacevtskih spojin. Te celice pogosto veljajo za standardni model za normalne ledvične celice v študijah, ki preučujejo citotoksične učinke različnih zdravil in terapevtskih sredstev. V raziskavi, v kateri so na primer primerjali vpliv izvlečkov korenin rastline Terminalia avicennioides na HepG2, celično linijo jetrnega raka, in celice Vero, pridobljene iz epitelija opičjih ledvic, so ugotovili, da so bili izvlečki bolj škodljivi za rakave kot za normalne celice.

Omejitve celic Vero

Čeprav se celice Vero pogosto uporabljajo, imajo svoje omejitve, kot sta proizvodnja toksina Vero in genomske spremembe, ki lahko vplivajo na nekatere aplikacije. Razumevanje posebnih podlinij in genomskih značilnosti celic Vero, vključno z linijo Vero F6, je bistveno za optimizacijo njihove uporabe v različnih bioprocesih.

Raziščite naše celice in derivate Vero za prelomne raziskovalne aplikacije

Raziskovalne publikacije

V nadaljevanju je navedenih nekaj nedavnih in najpogosteje citiranih raziskovalnih publikacij, ki vključujejo celice Vero.

Prilagoditev celic Vero na suspenzijsko rast za proizvodnjo virusa stekline v različnih medijih brez seruma

Ta študija, objavljena v reviji Vaccine Journal (2019), je prilagodila celice Vero za rast v suspenzijskih kulturah za proizvodnjo virusa stekline v visokem titru z uporabo različnih medijev brez seruma.

Občutljivost Toxoplasma gondii na etanolni izvleček Tinospora crispa v celicah Vero

Ta članek je bil objavljen v reviji Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine leta 2019. V študiji je bilo predlagano, da etanolni izvleček rastline Tinospora crispa škodljivo vpliva na parazita Toxoplasma gondii. Vendar je varen za gostiteljske celice (celično linijo Vero).

Vpliv izvlečka listov Colchicum baytopiorum na citotoksičnost in poti celične smrti v celičnih linijah C-4 I in Vero

Članek je bil objavljen v reviji Journal of the Balkan Union of Oncology leta 2021. V tem stidu sta Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez in Gul Ozcan raziskovala citotoksični učinek izvlečka listov Colchicum baytopiorum na celični liniji C-4I in Vero.

Resveratrol zavira razmnoževanje koronavirusa 2 hudega akutnega respiratornega sindroma (SARS-CoV-2) v gojenih celicah Vero

V tej študiji v reviji Phytotherapy Research (2021) so uporabili celice Vero, okužene s SARS-CoV-2, da bi raziskali terapevtski učinek resveratrola na replikacijo virusa.

Lipofilni statini zavirajo nastajanje virusa Zika v celicah Vero

Ta članek v reviji Nature Scientific Reports (2019) predlaga, da lahko lipofilni statini, tj. cerivastatin, lovastatin, fuvastatin, simvastatin in mevastatin, ovirajo proizvodnjo virusa Zika v celicah Vero.

Viri za celice Vero: Viri : protokoli, videoposnetki in drugo

• Transfekcija celic Vero: Ta povezava vas bo vodila skozi protokol transfekcije celic Vero.
• Transfekcija celične linije Vero: Ta videoposnetek pojasnjuje protokol transfekcije za celično linijo Vero.
• Subkultura celic Vero: Ta videoposnetek opisuje splošna priporočila za subkulturacijo adherentnih celičnih linij.

Protokoli za gojenje celic

• Kultivacija celic Vero: Ta spletna stran vsebuje dobro razložen protokol za gojenje celic Vero.
• Kultivacija celic Vero: Ta dokument vam lahko pomaga pri učenju protokola za razmnoževanje, vzdrževanje in zamrzovanje celic Vero.

Reference

1. Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton in A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): str. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Purification of yellow fever virus produced in Vero cells for inactivated vaccine manufacture. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferativni učinek izvlečkov in frakcij korenine Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill in Perr. na celične linije HepG2 in Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): str. 1-7.
4. Yao, P., et al., Izolacija in značilnosti rasti SARS-CoV-2 v celicah Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Park, B.K., et al., Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection (Različno signaliziranje in proizvodnja virusa v celicah Calu-3 in celicah Vero ob okužbi s SARS-CoV-2 ). Biomolekule in terapija, 2021. 29(3): p. 273.