Celična linija Jurkat E6.1

Jurkat E6.1 je klon celične linije Jurkat, imortalizirane celične linije človeških limfocitov T, pridobljene iz periferne krvi. Prvič so bile vzpostavljene leta 1977 in se uporabljajo v raziskavah, povezanih s signalizacijo celičnih receptorjev T, adoptivnimi terapijami celic T in drugih limfocitov proti raku, raziskavami protoonkogenov, povezanih s krvjo, preživetjem in diferenciacijo celic.

V tem članku bomo vključili vse informacije in predpogoje, ki jih morate razumeti, preden začnete delati na kloniranih celičnih linijah Jurkat E6.1, ki vključujejo:

1. Izvor, zgodovino in splošne informacije
2. Značilnosti celičnih kultur
3. Uporaba celičnih linij Jurkat E6.1
4. Raziskovalne publikacije
5. Prednosti in omejitve
6. Viri: Protokoli, videoposnetki in drugo

1. Izvor, zgodovina in splošne informacije

Tukaj so vse potrebne informacije, povezane z zgodovino, izvorom in splošnimi značilnostmi celične linije Jurkat E6.1 ter ravnanjem z njimi v celični kulturi.

• Jurkat E6.1 je imortalizirana celična linija človeških limfocitov T. Ta klonirana celična linija je derivat celične linije Jurkat, pridobljene iz periferne krvi 14-letnega dečka, ki je leta 1976 zbolel za akutno limfoblastno levkemijo. Po izolaciji iz krvi je bila ta celična linija sprva poimenovana JM, saj JM in Jurkat označujeta, da sta ti celični liniji izolirani od istega bolnika. Celična linija Jurkat E6.1 je bila klonirana iz celičnih derivatov, znanih kot Jurkat-FHCRC.
• Celične linije E6.1 so pridobljene iz levkemije; te celične linije se uporabljajo za povečanje izražanja IL-2 s simulacijo z monoklonskimi protitelesi ali lektinom. Izražajo T-celične antigenske receptorje; zato se te celične linije lahko uporabljajo pri preučevanju motenj imunskega sistema in imunološko-onkoloških raziskavah.
• Morfologija celic Jurkat E6.1: Celice Jurkat E6.1 so bile izolirane od bolnika z levkemijo in imajo v primerjavi z limfociti T spremenjeno morfologijo, zaradi česar so nesmrtne celične linije. Limfoblastna celica nastane, ko se naivni limfociti aktivirajo s predstavitvijo antigena s strani celic, ki predstavljajo antigen. To povzroči povečano rast jedra, citoplazme, mRNA in beljakovin.
• Velikost celic: Premer celic Jurkat E6.1 je običajno od 10 do 16 μm (premer se lahko razlikuje glede na vrsto suspenzije). Te celične linije imajo zelo sferično obliko celic.
• Genom in število kromosomov: Te celične linije so psevdodiploidne celične linije človeških limfocitov T z modelnim kromosomom 46. Tudi te kažejo, da je modalni kromosom prisoten v približno 74 %, stopnja poliploidije pa je približno 5,3 %. Kariotipske študije so pokazale kariotip s 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Kromosoma X in Y imata v večini celičnih linij praviloma po eno kopijo.
• Celične linije Jurkat proti celičnim linijam E6.1 Jurkat: Celične linije Jurkat so primarne matične celične linije, ki so bile prvič izolirane iz bolnika z akutno limfoblastno levkemijo. Vendar so celične linije E6.1 Jurkat klonirani derivati celičnih linij Jurkat-FHCRC.

3. uporaba celičnih linij Jurkat E6.1

Celična linija Jurkat E6.1 se najpogosteje uporablja pri raziskavah in preučevanju motenj, povezanih z imunskim sistemom in z njim povezanimi rakavimi obolenji. Poleg tega je bila primerna za preučevanje nekaterih zapletov, povezanih z okužbo s HIV, saj je celični receptor CD4 T potreben za vstop retrovirusov.

V nadaljevanju so obravnavana nekatera ključna področja, na katerih se uporabljajo te celične linije:

Modelni sistem za signalizacijo celic T in apoptotične poti: Ta celična linija, pridobljena iz levkemije celic T, se pogosto uporablja v raziskavah, ki vključujejo signalno kaskado TCR. Jurkat E6.1 sprošča več IL-2 in IL-8, ki nato pomagata pri aktivaciji celic T in sprožata vnetne poti. Ta celična linija je znana tudi po hiperfosforiliranem Pyk2 in povečani proizvodnji Vav1, ki ključno vpliva na preurejanje aktinskega citoskeleta v celicah T. Segregacijo TCR v celični liniji Jurkat E6-1 je mogoče izboljšati tudi z močnim izražanjem LFA-1, ki posledično okrepi signalizacijo TCR in izražanje IL-2 . Na celičnih linijah Jurkat E6.1 se izvajajo tudi študije celične proliferacije in celičnega cikla. Znjimi se prednostno preučujejo apoptotične poti in indukcija poškodb DNK s spojinami, pridobljenimi iz morskih in rastlinskih virov. V študiji iz leta 2013 je bil z uporabo teh celičnih linij ocenjen vpliv epigonalnega pogojenega medija morskega psa na človeške celice. Podobno so v celičnih linijah Jurkat E6.1 preučevali represivni vpliv hirsutina rastlinskega izvora na proliferacijo celic. V študijah proti raku se za oceno izbranih tarč pogosto uporabljajo tudi celice Jurkat E6.1. V teh celičnih linijah so preučevali tudi vpliv morskih nevrotoksinov, kot so brevetoksini (PbTx).

Študije o virusu HIV: Ena najpomembnejših aplikacij celičnih linij Jurkat E6.1 je njihova sposobnost, da služijo kot primeren model za študije HIV zaradi njihove lastnosti izbire različnih signalnih dogodkov, ki povzročajo TCA. Celične linije Jurkat E6.1 se ne uporabljajo le za razumevanje aktivacije HIV, temveč tudi za razčlenjevanje mehanizmov latence HIV. Replikacija in okužba s HIV sta bili v veliki meri raziskani v teh celičnih linijah, v katerih je mogoče izvajati gensko urejanje in izločanje genov, kot je bilo storjeno v študiji iz leta 2021. Vpliv dostave zdravil na okužbo z virusom HIV, kot so dolgodelujoči polimerno-lipidni hibridni nanodelci (PLN) z dolgim delovanjem efavirenz (Efa)-enfuvirtid (Enf), na vstop virusa so uporabile celične linije Jurkat E6.1. S CRISPR/Cas9 predelana Jurkat E6.1 je bila večkrat uporabljena za preučevanje mehanizmov, ki sodelujejo pri vstopu, razmnoževanju in okužbi virusa HIV.

4. raziskovalne publikacije

Tukaj je nekaj pomembnih primerov iz obsežne zbirke raziskav, ki vključujejo celične linije Jurkat E6.1.

Selenov metabolit metilselenol uravnava izražanje ligandov, ki sprožijo imunsko aktivacijo prek limfocitnega receptorja NKG2D

Z uporabo celic Jurkat E6.1, inkubiranih v različnih spojinah selena, za preučevanje izražanja ligandov in površinskega izražanja MICA/B.

Karakazinska kislina, ent-3,4-seko-kavren, spodbuja apoptozo in diferenciacijo celic z zaviranjem signalne poti NFkB v levkemičnih celicah.

Razumevanje citotoksičnosti, ki jo povzroča karakasinska kislina, v človeških celičnih linijah T, kot sta Jurkat E6.1 in HL-60.

Dokazi o razvoju odpornosti na azidotimidin pri celičnih linijah limfocitne levkemije T (Jurkat E6-1/AZT-100) in pediatričnih bolnikih z okužbo s HIV-1 in vitro

Uporabili smo Jurkat E6.1, ki smo jo dolgotrajno inkubirali z zdravilom AZT, za preučevanje odpornosti na azidotimidin (AZT) pri bolnikih, okuženih s HIV-1.

Študije celične linije Jurkat E6.1 glede učinkov nekaterih bioloških indolov na tekočnost membrane

V tej raziskavi je bil uporabljen sistem polarizirane fluorescenčne analize za razumevanje vpliva bioindolov, vključno s serotoninom, triptofanom in melatoninom, na fluidnost celične membrane v celičnih linijah Jurkat E6.1.

Molekularni mehanizem indukcije apoptoze v celicah Jurkat E6-1 z izvlečkom alkaloidov Tribulus terrestris

Izvleček alkaloidov, pridobljenih iz Tribulus terristris, je povzročil apoptozo v celicah Jurkat E6.1, da bi razumeli osnovni mehanizem delovanja.

Povečanje izražanja LFA-1 izboljša arhitekturo imunske sinapse in signalizacijo receptorjev T celic v celicah Jurkat E6.1

Signalizacija receptorjev celic T v celicah Jurkat E6.1 se je okrepila z močnim povečanjem izražanja LFA-1.

5. prednosti in omejitve

Tako kot druge celične linije ima tudi Jurkat E6.1 svoje prednosti in omejitve.

Prednosti

Obstaja več razlogov, zakaj je v teh aplikacijah prednostna:

• Način rasti

  Jurkat E6.1 je suspenzijska in neadherentna celična linija, kar pomeni, da raste v suspenziji in se ne prilepi na površino kulture.

• Izražanje genov

  Celična linija Jurkat E6.1 izraža gene, ki kodirajo interlevkin-2 (IL-2) in CD3. Po stimulaciji z monoklonskimi protitelesi, lektini ali fosforjevimi estri proti antigenskemu kompleksu T3 so te celice proizvajale okrepljen IL-2.

• Izražanje antigenov

  Celična linija Jurkat E6.1 izraža antigen CD3, povezan z aktivacijo in signalizacijo celic T.

• Označevalci izražanja

  Celična linija izraža označevalce antigenskega receptorja celic T (TCR), ki so ključni pri prepoznavanju celic T in imunskem odzivu.

• Uporabnost za transfekcijo

  Celična linija Jurkat klon E6.1 je primerna za poskuse transfekcije gostitelja, kar omogoča vnos eksogenega genskega materiala v celice za različne raziskovalne namene.

Omejitve

Po prednostih si oglejmo omejitve, povezane z uporabo celičnih linij Jurkat E6.1:

• Transfekcija celic z virusnim vektorjem

  Transfekcija celic Jurkat E6.1 je zaradi njihovega izvora iz celic T zahtevna. Običajno so za gensko spreminjanje potrebni dragi in dolgotrajni virusni vektorji. Nevirusni vektorji so pokazali nizko učinkovitost transfekcije in znatno toksičnost v celicah Jurkat.

• Bakterijska kontaminacija

  Za zagotovitev celovitosti eksperimentalnih rezultatov je treba celične kulture Jurkat E6.1 spremljati glede morebitne bakterijske kontaminacije.

• Virusne kontaminacije

  Celične linije Jurkat E6.1 izražajo različne kemokinske receptorje in nizko raven CD4, kar olajša vstop virusov. Zaradi tega so dovzetne za viruse, ki okužijo celice T, kot sta HTLV in HIV.

6.viri: Protokoli, videoposnetki in drugo

V tem razdelku so opisane metode in protokoli za gojenje celic in transfekcijo ter izobraževalni videoposnetki, povezani s to celično linijo:

Protokoli za gojenje celic

Tukaj je nekaj osnovnih postopkov gojenja za to celično linijo:

• Razmnoževanje Jurkata: SOP za gojenje celic, Razmnoževanje Jurkata: Na Univerzi v Kaliforniji so v svojem brskalniku genomov USCS objavili tudi metodo za gojenje klona Jurkat E6-1.
• Jurkat, klon E6-1, gojenje in ravnanje: Elabscience je na svoji spletni strani z opisom izdelka vključil protokol za ravnanje s kulturo.

Protokoli za transfekcijo

Tukaj je seznam različnih protokolov za transfekcijo, ki so na voljo:

• Jurkat Cells Transfection Protocol Lipofectamine LTX Reagent: Prikaz protokola transfekcije celic Jurkat z reagentom Lipofectamine LTX podjetja ThermoFisher.
• Amaxa™ 4D-Nucleofector™ Protokol za klon Jurkat E6.1 [ATCC®]: Skupina Lonza Group AG je zagotovila protokol transfekcije za klon Jurkat E6.1 iz ATCC z uporabo enote 4D-Nucleofector® X.

Videoposnetki o klonu Jurkat E6.1

Na voljo je več odličnih videoposnetkov, ki zajemajo koncepte celičnih kultur, postopke, razmnoževanje, razmnoževanje in druge teme.

• Pasažiranje celic:Osnove celičnih kultur: To je odličen videoposnetek za osnovno vodenje pasažiranja človeških celičnih linij, ki ga je pripravila družba ThermoFisher.
• Odmrzovanje celic: Osnove celičnih kultur: Ta video vsebuje osnovna navodila za gojenje in odmrzovanje celic podjetja ThermoFisher.
• Protokol za transfekcijo plazmidne DNA: V tem videoposnetku je predstavljen protokol transfekcije plazmidne DNA z reagentoma Lipofectamine® LTX in Plus™ podjetja ThermoFisher.
• Merjenje apoptoze z uporabo suspenzijskih celic Jurkat, obdelanih s 3 mikromolarnim staurosporinom: Ta videoposnetek prikazuje, kako opraviti test apoptoze na slikovnem citometru Celigo z uporabo reagentov Hoechst in kaspaza 3/7 podjetja Nexcelom Bioscience.