Celice Hep3B: raziskave in odkritja na področju hepatoceličnega karcinoma
HEP3B je imortalizirana celična linija hepatoceličnega karcinoma človeškega izvora. Široko se uporablja v raziskavah hepatotoksičnosti in metabolizma zdravil. Učinkovitost transfekcije HEP3B je znatna, zato se te celice pogosto uporabljajo za preučevanje razvoja, napredovanja in terapevtskih posegov pri raku jeter. Ta članek zajema vse potrebne informacije o celični liniji HEP3B, da vam olajša delo z njo. Vključuje predvsem:
- Rastno gojišče
- Za gojenje celic HEP3B se uporablja gojišče EMEM, ki vsebuje 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamina in Earleovo uravnoteženo solno raztopino (EBSS).
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve celic HEP3B je približno 36 ur.
- Vrsta rasti
- Ta celična linija hepatoma je adhezivna.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči HEP3B
- Splošne značilnosti in izvor celic HEP3B
- Informacije o gojenju celične linije HEP3B
- Celična linija HEP3B: prednosti in omejitve
- Uporaba celic HEP3B v raziskavah
- Objave o celični liniji HEP3B
- Viri za celično linijo HEP3B: protokoli, videi in več
Splošne značilnosti in izvor celic HEP3B
Osnovne informacije, ki jih potrebujete o celični liniji, so njen izvor in splošne značilnosti. To vam lahko pomaga pri odločitvi o njeni uporabi v raziskavah in pri delu z njo. Ta del članka zajema vse bistvene informacije o izvoru in značilnostih HEP3B. Tukaj boste izvedeli: Kaj so celične linije Hep 3B? Kakšen je izvor celic Hep3B? Kakšna je morfologija celic HEP3B?
- HEP3B, neprekinjena človeška celična linija hepatoma, izvira iz jetrnega tkiva 8-letnega afriškega dečka z hepatoceličnim karcinomom (HCC). Ustanovili so jo Aden in sodelavci leta 1979 v laboratoriju Barbara B. Knowles v Wistar Institute v Philadelphii, ZDA [1].
- Celice HEP3B imajo v svojih kromosomih integriran genom virusa hepatitisa B (HBV).
- Te celice hepatocitnega karcinoma kažejo epitelijsko morfologijo.
- Celi HEP3B imajo modalno število kromosomov 60. Za razliko od HepG2 nimajo preurejenega kromosoma 1.
Kakšna je razlika med HepG2 in Hep3B?
HepG2 in HEP3B se razlikujeta v številu kromosomov na celico. HEP3B vsebuje 60 kromosomov, medtem ko imajo celice HepG2 povprečno 55 kromosomov. Poleg tega je HepG2 netumorigen in negativen na hepatitis B, medtem ko je HEP3B tumorigen in pozitiven na HBV.
Podatki o gojenju celične linije HEP3B
Znanje o gojenju celične linije vam lahko olajša delo. Ta poglavje zajema vse ključne točke za gojenje celične linije HEP3B HBV, vključno z: Kakšen je čas podvojitve celic Hep3B? Kakšni so pogoji za gojenje HEP3B? Kako gojiti celice HEP3B HCC?
Ključne točke za gojenje celic HEP3B
Čas podvojitve:
Čas podvojitve celic HEP3B je približno 36 ur.
Adherentne ali v suspenziji:
Ta celična linija hepatoma je adhezivna.
Razmerje delitve:
Celice HEP3B se subkultivirajo v razmerju 1:2 do 1:4. Adherentne celice HEP3B se speremo z 1 x PBS in nato inkubiramo z raztopino za disociacijo Accutase. Po 8 do 10 minutah se doda svež medij in celice se centrifugirajo. Pridobljene celice se nato previdno ponovno suspendirajo in vlijejo v kolbe, ki vsebujejo gojišče v priporočenem razmerju delitve.
Rastno gojišče:
Za gojenje celic HEP3B se uporablja gojišče EMEM, ki vsebuje 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamina in Earleovo uravnoteženo solno raztopino (EBSS).
Pogoji rasti:
Celice HEP3B se gojijo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C z neprekinjenim dovajanjem 5 % CO2.
Shranjevanje:
Zamrznjene celice HEP3B se shranjujejo pri temperaturi pod -150 °C v električnem zamrzovalniku ali v plinski fazi tekočega dušika.
Postopek zamrzovanja in medij:
Za celice HEP3B se kot medij za zamrzovanje priporoča CM-1 ali CM-ACF. Celice se zamrzujejo s postopkom počasnega zamrzovanja, ki omogoča le 1 °C padec temperature na minuto, da se ohrani vitalnost celic.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice se odmrzujejo v vodni kopeli, nastavljeni na 37 °C, 40 do 60 sekund. Nato se te celice dodajo v svež gojišče in centrifugirajo, da se odstranijo elementi sredstva za zamrzovanje. Zbrane celice se ponovno suspendirajo in razdelijo v nove kolbe za rast.
Raven biološke varnosti:
Za gojenje celic HEP3B je potreben laboratorij z ravnjo biološke varnosti 1.
Celična linija HEP3B: prednosti in omejitve
HEP3B je široko uporabljena celična linija hepatoceličnega karcinoma. V tem poglavju se bomo osredotočili na nekatere ključne prednosti in omejitve teh hepatomskih celic.
Prednosti
Glavne prednosti celic HEP3B so:
Enostavna gojitev
Celice HEP3B nimajo zahtevnih pogojev za gojenje, zato jih je v raziskovalnem laboratoriju enostavno obdelovati in vzdrževati. To poenostavi eksperimentalne postopke.
Visoka učinkovitost transfekcije
Celice HEP3B kažejo izjemno učinkovitost transfekcije, zaradi česar se pogosto uporabljajo v genetskih manipulacijah in študijah, povezanih z izražanjem genov.
Tumorigenost
HEP3B je tumorigena celična linija hepatoceličnega karcinoma, ki je sposobna tvoriti tumorje, ko se injicira v imunsko oslabljeno miško. To pomaga pri preučevanju napredovanja in razvoja raka z uporabo modelov ksenotransplantatov HEP3B.
Status P53 pri HEP3B
Celice HEP3B imajo mutacijo gena P53, podobno kot hepatocelični karcinom (HCC) in drugi raki, zaradi česar so primerne za preučevanje učinkov mutacije P53 na rast, razvoj in napredovanje raka.
Omejitve
Omejitev, povezana s celično linijo HEP3B, je:
In vitro celični model
Celična linija HEP3B služi kot in vitro model celic hepatoceličnega karcinoma (HCC). Vendar pa morda ne odraža v celoti kompleksnosti HCC, kot ga najdemo v živih organizmih. Posledično se lahko eksperimentalni rezultati in vitro razlikujejo od tistih, opazovanih in vivo.
Uporaba celic HEP3B v raziskavah
Celična linija HEP3B ponuja več raziskovalnih uporab v biomedicinskih raziskavah. Nekatere ključne raziskovalne uporabe celic HEP3B vključujejo:
- Biologija raka: HEP3B je človeška celična linija hepatoceličnega karcinoma. Je neprecenljiv celični model za preučevanje celičnih in molekularnih mehanizmov, ki so podlaga za razvoj in napredovanje HCC. Raziskovalci te celice uporabljajo za preučevanje genetskih mutacij, celičnih procesov in celičnih signalnih poti, povezanih z rakom jeter. V eni od študij so uporabili celice HEP3B in ugotovili, da mikroRNA-223-3p regulira komponente inflammasoma NLRP3, zavira proliferacijo in poveča apoptozo celic hepatokarcinoma HEP3B [2].
- Preizkušanje in razvoj zdravil: Celična linija HEP3B se uporablja tudi za testiranje, preizkušanje in razvoj novih terapij proti jetrnemu karcinomu. Poleg tega se uporablja za ocenjevanje toksičnosti in učinkovitosti različnih zdravil proti raku in zdravljenj. Raziskovalci so te hepatomne celice uporabili tudi za preučevanje presnove zdravil. Raziskovalci so uporabili celice HEP3B in ocenili citotoksični potencial rastlinskega izvlečka Cotinus coggygria na celicah hepatocitnega karcinoma HEP3B [3].
- Virusne okužbe: HEP3B je celična linija, pozitivna na virus hepatitisa B; zato se uporablja za preučevanje virusnih okužb, ki lahko vodijo k razvoju raka jeter, tj. HBV in HCV. To lahko pomaga bolje razumeti virusne okužbe in razviti potencialna protivirusna zdravljenja. Na primer, v eni od študij so uporabili rakave celice hepatocitov HEP3B in preučili pomen ubikvinacije za širjenje virusa hepatitisa C. Ugotovitve so nakazovale, da je ubikvitin-specifična proteaza 15 (USP15) vključena v širjenje HCV prek uravnavanja funkcij, specifičnih za hepatocite, vključno z nastajanjem lipidnih kapljic in translacijo HCV RNA [4].
5. Objave o celični liniji HEP3B
V tem delu članka bomo obravnavali nekaj zanimivih raziskovalnih publikacij o celicah HEP3B.
Regulacija apoptoze in avtofagije z luteolinom v celicah Hep3B pri raku jeter pri človeku
Ta publikacija v reviji Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) predlaga, da lahko stres endoplazmatskega retikuluma, ki ga povzroča luteolin, deluje protitumorsko na celicah HEP3B brez P53 na način, ki je neodvisen od P53.
Možno ciljanje celic raka jeter Hep3B z lupeolom, izoliranim iz Avicennia marina
Ta študija v reviji Archiv der Pharmazie (2021) predlaga pentaciklični triterpenoid, lupeol, kot potencialno protirakovo sredstvo proti celicam HEP3B.
Ta članek je objavljen v reviji Molecular Medicine Reports (2017). Ugotovitve študije navajajo, da etanolni ekstrakt Cnidium monnieri (L.) Cusson inducira celično smrt (apoptozo) in zaustavitev celičnega cikla v celicah hepatokarcinoma HepG2 in HEP3B prek regulacije signalne poti p53 in Akt/GSK-3β.
Ta raziskava, objavljena v reviji Biomolecules and Therapeutics (2020), je pokazala, da auranofin kaže sinergistično aktivnost in spodbuja sulforafanom posredovano apoptozo celic HEP3B prek aktivacije poti PI3K/AKT.
Circular RNA-0072309 ima protitumorski vpliv na celično linijo Hep3B z usmerjanjem na mikroRNA-665
Ta raziskovalni članek v reviji BioFactors (2023) predlaga, da krožna RNA-0072309 izvaja protitumorske učinke v celicah hepatoceličnega karcinoma HEP3B prek ciljanja miRNA-665.
Viri za celično linijo HEP3B: protokoli, videi in več
Spodaj je navedenih nekaj virov, ki so na voljo za celice HEP3B:
- Transfekcija HEP3B: Ta video posnetek pojasnjuje protokol transfekcije za celice HEP3B.
- Učinkovitost transfekcije HEP3B: Ta povezava vam bo pomagala spoznati sestavo gojišča HEP3B DMEM, pasiranje celic in protokol transfekcije za celice HEP3B. Poleg tega ponuja informacije za optimizacijo reagenta HEP3B lipofectamine 3000 v vašem protokolu transfekcije.
Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic HEP3B:
- Pogoji za gojenje HEP3B: Ta povezava vam bo pomagala spoznati protokol za ravnanje in vzdrževanje kultur Huh7 in HEP3B.
- Celice HEP3B: Ta spletna stran vsebuje veliko informacij o celicah HEP3B, vključno s HEP3B mediji, protokolom za delitev celic, odmrzovanje in ravnanje s proliferativnimi in krioprezerviranimi kulturami.
Sklici
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Izvor in lastnosti celičnih linij hepatoceličnega karcinoma. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): str. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p regulira NLRP3, da spodbuja apoptozo in zavira proliferacijo celic Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): str. 2429–2435.
- Danjolli-Hashani, D. in S. Selen-Isbilir, Citotoksični učinek izvlečka Cotinus coggygria na rakovno celično linijo Hep3B. Natural Product Research, 2022: str. 1–4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 sodeluje pri razmnoževanju virusa hepatitisa C prek regulacije prevajanja virusne RNK in nastajanja lipidnih kapljic. Journal of Virology, 2019. 93(6): str. 10.1128/jvi. 01708-18.