Celična linija HT22
HT22 je mišja nevronska celična linija, ki se pogosto uporablja v nevroznanstvenih raziskavah. Je dragocena za preučevanje nevrodegenerativnih motenj in testiranje potencialnih nevroprotektivnih terapij ali zdravljenj. Poleg tega so celice HT22 občutljive na glutamat, zato se uporabljajo za preučevanje toksičnosti ali nevronske poškodbe, ki jo povzroča glutamat.
- Rastno gojišče
- Za gojenje celic HT22 se uporablja gojišče DMEM. Za optimalno rast celic je dopolnjeno z 10 % FBS, 4,5 g/l glukoze, 4 mM L-glutamina, 1,5 g/l NaHCO3 in 1,0 mM natrijevega piruvata.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve celic HT22 je približno 15 ur.
- Vrsta rasti
- Celice HT22 so adhezivne.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči HT22
Ta članek poudarja ključne lastnosti celic HT22, ki vam lahko pomagajo pri raziskovalnem delu. Obravnava predvsem:
- Splošne lastnosti in izvor celic HT22
- Informacije o gojenju celične linije HT22
- Prednosti in slabosti celične linije HT22
- Raziskovalne aplikacije celične linije HT22
- Raziskovalne publikacije o celicah HT22
- Viri za celice HT22: protokoli, videi in več
Splošne lastnosti in izvor celic HT22
Ta del članka bo osvetlil izvor in splošne značilnosti celic HT22. Pred začetkom dela s celično linijo je nujno poznati te informacije. Tukaj boste izvedeli: Kaj so celice HT22? Kakšna je morfologija hipokampalnih celic HT22? Kakšna je velikost celic HT22?
HT22 je neprekinjena celična linija, pridobljena iz hipokampusa mišjega možganov. Je podklon starševske celične linije HT-4, razvite z imortalizacijo mišjih nevronskih tkiv prek temperaturno občutljivega poliomavirusa simian virus 40 (SV40) T antigena.
Te celice se razlikujejo od zrelih hipokampalnih celic, saj nimajo glutamatnih in holinergičnih receptorjev, kot jih imajo zrele nevrone hipokampalnega izvora. Zato niso primerne za raziskave, povezane s spominom [1].
Celice HT22 imajo videz, podoben epitelijskim celicam.
Podatki o gojenju celic linije HT22
Celice HT22 se uporabljajo v raziskovalnih laboratorijih za nevroznanost. Pred gojenjem teh celic raziskovalci poiščejo bistvene informacije o gojenju celic, ki jim olajšajo delo in ga naredijo učinkovitejše. Ta poglavje zajema vse ključne točke za gojenje celic HT22. Spoznali boste: Kakšen je čas podvojitve celic HT22? Kako gojiti celice HT22? Kakšen je protokol za gojenje celic HT22? Kakšno je gojišče za celice HT22?
Ključne točke za gojenje celic HT22
Čas podvojitve:
Čas podvojitve celic HT22 je približno 15 ur.
Adherentne ali v suspenziji:
Celice HT22 so adhezivne.
Razmerje pri subkultivaciji:
Razmerje subkultivacije za hipokampalne celice HT22 je 1:3 do 1:6. Na kratko, medij se odstrani, adhezivne celice pa se speremo z 1 x PBS. V kolbo se doda raztopina za disociacijo Accutase, celice pa se inkubirajo 8 do 10 minut pri sobni temperaturi. Nato se doda svež gojišče, celice pa se zbirajo v viali za centrifugiranje. Dobljeni celični pelet se previdno ponovno suspendira, celice pa se razporedijo v kolbo za gojenje.
Gojilno gojišče:
Za gojenje celic HT22 se uporablja gojišče DMEM. Za optimalno rast celic se mu doda 10 % FBS, 4,5 g/l glukoze, 4 mM L-glutamina, 1,5 g/l NaHCO3 in 1,0 mM natrijevega piruvata.
Pogoji rasti:
Kulture celic HT22 se hranijo v vlažnem inkubatorju (temperatura 37 °C) z dovodom 5 % CO2.
Shranjevanje:
Zamrznjene celice HT22 se lahko dolgoročno shranjujejo pri temperaturi pod -150 °C bodisi v plinski fazi tekočega dušika bodisi v električnem zamrzovalniku z izredno nizko temperaturo.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
Celice HT22 se lahko zamrznejo v gojiščih CM-1 ali CM-ACF z uporabo metode počasnega zamrzovanja. Ta postopek omogoča znižanje temperature vzorca za le 1 °C na minuto, ščiti celice pred šokom in pomaga ohraniti njihovo vitalnost.
Postopek odmrzovanja:
Celice se odmrzujejo v vodni kopeli pri 37 °C 40 do 60 sekund, dokler ne ostane le majhen kepec ledu. Nato se v celice doda gojišče in se centrifugirajo, da se odstranijo sestavine sredstva za zamrzovanje. Pelet celic se ponovno suspendira in celice se prelijejo v novo bučko, ki vsebuje gojišče. Nato se celice inkubirajo pri 37 °C v inkubatorju vsaj 24 ur.
Raven biološke varnosti:
Za gojenje celic HT22 so obvezne laboratorijske razmere ravni biološke varnosti 1.
Prednosti in slabosti celične linije HT22
Hipokampalne celice HT22 imajo nekaj prednosti in slabosti, ki jih ločujejo od drugih nevronskih celičnih linij. Tukaj so navedene nekatere pomembne prednosti in slabosti te celične linije.
Prednosti
Prednosti mišje nevronske celične linije HT22 so:
-
Hitra rast
Celice HT22 imajo čas podvojitve 15 ur, kar omogoča hitro in učinkovito eksperimentiranje ter pomaga pri pravočasnih raziskovalnih rezultatih.
-
Imortalizacija
HT22 je imortalizirana celična linija, ki zagotavlja neprekinjeno rast za daljša obdobja. To zagotavlja stalno razpoložljivost celic, zmanjšuje čas in stroške ter olajšuje dolgoročne poskuse z doslednimi rezultati.
Pomanjkljivosti
Pomanjkljivosti celic HT22 so:
-
Mišji izvor
Celična linija HT22 izhaja iz tkiva hipokampusa mišjega možganov, kar morda ne odraža v celoti kompleksnosti fiziologije in vedenja človeških nevronskih celic, kar omejuje njihovo translacijsko relevantnost.
4. Raziskovalne aplikacije celične linije HT22
Celice HT22 se pogosto uporabljajo v nevrobioloških raziskavah. V tem delu članka obravnavamo nekaj obetavnih uporab te celične linije:
- Nevroznanstvene raziskave: Celice HT22 se široko uporabljajo v raziskavah nevrodegenerativnih bolezni, npr. Alzheimerjeve in Parkinsonove bolezni. Veljajo za dragoceno raziskovalno orodje za preučevanje nevrotoksičnosti in mehanizmov oksidativnega stresa, povezanih s temi boleznimi. Raziskava, izvedena leta 2020, je pokazala, da je pot PI3K/AKT/CREB vključena v nevrotoksičnost, ki jo povzroča hiperglikemija v celicah HT22 [2]. Podobno je nedavna študija predlagala, da pot Nrf2/HO-1 in signalna os NF-κB igrata pomembno vlogo pri toksičnosti amiloidnega beta v celicah HT22 [3].
- Preskušanje zdravil: Celice HT22 se široko uporabljajo za testiranje in preskušanje zdravil. Raziskovalcem pomagajo identificirati potencialna terapevtska sredstva z nevroprotektivnimi učinki za boj proti nevrodegenerativnim boleznim. Študija, izvedena leta 2019, je raziskovala nevroprotektivni potencial tetrahidrokurkumina v celicah hipokampusa HT22, obdelanih z glutamatom. V tem primeru glutamat povzroča oksidativni stres v celicah HT22 in povzroča celično smrt z aktiviranjem mitogen-aktiviranih proteinskih kinaz [4].
5. Raziskovalne publikacije, ki obravnavajo celice HT22
Tukaj je nekaj zanimivih raziskovalnih člankov o celični liniji HT22:
Ta študija, objavljena v reviji International Journal of Molecular Medicine (2019), je predlagala nevroprotektivni potencial krokin, spojine, izolirane iz Crocus sativus L., v celicah HT22, poškodovanih z L-glutamatom.
Ta publikacija v reviji Neuropharmacology (2018) poroča, da derivati oksindola ščitijo pred smrtjo celic HT22, ki jo povzroča oksidativni stres.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen v reviji Journal of Ginseng Research leta 2019. Ta študija je raziskovala nevroprotektivne učinke naravnega proizvoda, ginsenosida Rb2, z uporabo celične linije HT22. Študija je ugotovila, da je ginsenosid Rb2 učinkovito zmanjšal glutamatno povzročen oksidativni stres in celično smrt v mišjih hipokampalnih celicah HT22.
Ta študija v reviji Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) je ocenila citotoksični potencial srebrnih nanodelcev v celični liniji HT22.
Ferrostatin-1 ščiti celice HT-22 pred oksidativno toksičnostjo
Ta raziskovalni članek je bil objavljen leta 2020 v reviji Neural regeneration research. V njem je bilo predlagano, da ferrostatin-1, zaviralec ferroptoze, preprečuje oksidativno toksičnost v hipokampalnih celicah HT22.
Viri za celice HT22: protokoli, videi in več
Nekateri spletni viri o celicah HT22 pojasnjujejo protokole za njihovo transfekcijo, diferenciacijo in celično kulturo:
- Transfekcija HT22: Ta dokument vsebuje optimiziran protokol za transfekcijo HT22 v 24- in 96-luknjastih ploščah za celično kulturo.
- Diferenciacija celic HT22: Ta članek vas bo izčrpno vodil skozi protokol diferenciacije HT22.
Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic HT22:
- Subkultiviranje celic HT22: Ta povezava vam bo pomagala spoznati protokol subkultiviranja za celično linijo HT22. Poleg tega vam bo pomagala spoznati protokol za indukcijo nevrotoksičnosti v celicah.
- Hipokampalne celice HT22: Ta spletna stran vsebuje veliko koristnih informacij o času podvojitve celic HT22, gojiščih in protokolih za gojenje celic.
Sklici
- He, M., et al., Diferenciacija povzroča občutljivost na ekscitotoksičnost v nevronih HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): str. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin preprečuje nevrotoksičnost celic HT22, ki jo povzroča visoka raven glukoze, prek signalne poti PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: str. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Zaščitni učinki berberina proti nevrotoksičnosti, ki jo povzroča β-amiloid v celicah HT22 prek poti Nrf2/HO‐1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: str. 106–210.
- Park, C.-H., et al., Nevroprotektivni učinki tetrahidrokurkumina proti glutamatom povzročenemu oksidativnemu stresu v hipokampalnih celicah HT22. Molecules, 2019. 25(1): str. 144.