Celična linija HT22
HT22 je mišja nevronska celična linija, ki se pogosto uporablja v nevroznanstvenih raziskavah. Uporabna je za preučevanje nevrogenerativnih motenj in testiranje morebitnih nevroprotektivnih terapij ali zdravljenj. Poleg tega so celice HT22 občutljive na glutamat, zato se uporabljajo za preučevanje glutamatne toksičnosti ali poškodb nevronov.
V tem članku so poudarjeni nujni vidiki celic HT22, ki vam lahko pomagajo pri vašem raziskovalnem delu. Obravnaval bo predvsem:
- Splošne lastnosti in izvor celic HT22
- Informacije o gojenju celične linije HT22
- Prednosti in slabosti celične linije HT22
- Raziskovalne aplikacije celične linije HT22
- Raziskovalne publikacije, v katerih so predstavljene celice HT22
- Viri za celice HT22: Protokoli, videoposnetki in drugo Gradivo za HT22 HT22: Viri, protokoli, videoposnetki in drugo
1. Splošne lastnosti in izvor celic HT22
V tem poglavju članka so predstavljeni izvor in splošne značilnosti celic HT22. Te informacije o celični liniji je treba poznati pred začetkom dela z njo. V tem poglavju boste izvedeli: Kaj so celice HT22? Kakšna je morfologija hipokampalnih celic HT22? Kakšna je velikost celic HT22?
HT22 je neprekinjena celična linija, pridobljena iz hipokampusa v mišjih možganih. Je podklon starševske celične linije HT-4, razvite z imortalizacijo mišjih nevronskih tkiv prek temperaturno občutljivega poliomavirusnega antigena T simijanskega virusa 40 (SV40).
Te celice se razlikujejo od zrelih hipokampalnih celic, saj nimajo glutamatnih in holinergičnih receptorjev kot zreli nevroni hipokampalnega izvora. Zato niso primerne za raziskave, povezane s spominom [1].
Celice HT22 so podobne epitelijskim celicam.
2. Informacije o gojenju celične linije HT22
Celice HT22 se uporabljajo v nevroznanstvenih raziskovalnih laboratorijih. Pred gojenjem teh celic raziskovalci poiščejo bistvene informacije o celičnih kulturah, ki jim olajšajo in povečajo učinkovitost dela. V tem razdelku so zajete vse ključne točke za gojenje celic HT22. Spoznali boste: Kakšen je čas podvojitve celic HT22? Kako gojite celice HT22? Kakšen je protokol gojenja celic HT22? Kaj je gojišče za celice HT22?
Ključne točke za gojenje celic HT22
|
Čas podvojitve: |
Čas podvojitve celic HT22 je približno 15 ur. |
|
Prilepljene ali v suspenziji: |
Celice HT22 so adherentne. |
|
Razmerje subkultiviranja: |
Razmerje subkultiviranja za hipokampalne celice HT22 je 1:3 do 1:6. Na kratko odstranimo medij in adherentne celice speremo z 1 x PBS. V erlenmajerico se doda raztopina za disociacijo akutaze in celice se inkubirajo 8 do 10 minut pri sobni temperaturi. Nato se doda sveže gojišče in celice se zberejo v stekleničko za centrifugiranje. Dobljeno celično peleto previdno resuspendiramo in celice razporedimo v bučko za gojenje. |
|
Gojišče za rast: |
Za gojenje celic HT22 se uporablja gojišče DMEM. Za optimalno rast celic mu dodamo 10 % FBS, 4,5 g/L glukoze, 4 mM L-glutamina, 1,5 g/L NaHCO3 in 1,0 mM natrijevega piruvata. |
|
Pogoji rasti: |
HT22 celične kulture hranimo v vlažnem inkubatorju (temperatura 37 °C) s 5-odstotnimdovajanjem CO2 . |
|
Shranjevanje: |
Zamrznjene celice HT22 lahko dolgoročno hranimo pri temperaturi pod -150 °C v parni fazi tekočega dušika ali v električnem zamrzovalniku z zelo nizko temperaturo. |
|
Postopek zamrzovanja in medij: |
Celice HT22 lahko zamrznemo v mediju CM-1 ali CM-ACF z uporabo metode počasnega zamrzovanja. Ta postopek omogoča znižanje temperature vzorca le za 1 °C na minuto, ščiti celice pred šokom in pomaga ohranjati njihovo vitalnost. |
|
Postopek odtaljevanja: |
Celice odtaljujemo v vodni kopeli pri 37 °C 40 do 60 sekund, dokler ne ostane majhen ledeni skupek. Nato celicam dodamo gojišče in jih centrifugiramo, da odstranimo sestavine zamrzovalnega gojišča. Celični pelet ponovno suspendiramo in celice prelijemo v novo erlenmajerico z gojiščem. Nato se celice vsaj 24 ur inkubirajo pri 37 °C v inkubatorju. |
|
Raven biološke varnosti: |
Za gojenje celic HT22 je obvezno laboratorijsko okolje na ravni biološke varnosti 1. |
3. Prednosti in slabosti celične linije HT22
Hipokampalne celice HT22 so povezane z nekaterimi prednostmi in slabostmi, ki jih razlikujejo od drugih nevronskih celičnih linij. Tu so navedene nekatere pomembne prednosti in slabosti celične linije.
Prednosti
Prednosti mišje nevronske celične linije HT22 so:
-
Hitra rast
Celice HT22 se podvojijo v 15 urah, kar omogoča hitre in učinkovite poskuse ter pripomore k pravočasnim rezultatom raziskav.
-
Immortalizacija
HT22 je imortalizirana celična linija, ki zagotavlja neprekinjeno rast za daljše obdobje. To zagotavlja stalno razpoložljivost celic, zmanjšuje čas in stroške ter omogoča dolgoročne poskuse z doslednimi rezultati.
Slabosti
Slabosti celic HT22 so:
-
Murino poreklo
Celična linija HT22 je bila pridobljena iz tkiva mišjega možganskega hipokampusa, ki morda ne predstavlja v celoti kompleksnosti fiziologije in vedenja človeških nevronskih celic, kar omejuje njihovo translacijsko pomembnost.
4. Raziskovalne aplikacije celične linije HT22
Celice HT22 se pogosto uporabljajo v nevrobioloških raziskavah. V tem delu članka je obravnavanih nekaj obetavnih aplikacij te celične linije:
- Nevroznanstvene raziskave: Celice HT22 se pogosto uporabljajo pri raziskavah nevrodegenerativnih bolezni, tj. Alzheimerjeve in Parkinsonove bolezni. Veljajo za dragoceno raziskovalno orodje za preučevanje nevrotoksičnosti in mehanizmov oksidativnega stresa, povezanih s temi boleznimi. Raziskave, opravljene leta 2020, so pokazale, da je pot PI3K/AKT/CREB vpletena v nevrotoksičnost, ki jo povzroča hiperglikemija v celicah HT22 [2]. Podobno je nedavna študija predlagala, da imata pot Nrf2/HO-1 in signalna os NF- κB pomembno vlogo pri toksičnosti amiloida beta celic HT22 [3].
- Pregledovanje zdravil: Celice HT22 se pogosto uporabljajo za testiranje in pregledovanje zdravil. Raziskovalcem pomagajo opredeliti potencialna terapevtska sredstva z nevroprotektivnimi učinki za boj proti nevrodegenerativnim boleznim. V študiji, izvedeni leta 2019, je bil raziskan nevroprotektivni potencial spojine tetrahidrokurkumin v hipokampalnih celicah HT22, obdelanih z glutamatom. Pri tem glutamat povzroči oksidativni stres v celicah HT22 in povzroči celično smrt z aktiviranjem mitogensko aktiviranih proteinskih kinaz [4].
5. Raziskovalne objave s celicami HT22
Tukaj je nekaj zanimivih raziskovalnih člankov, v katerih je uporabljena celična linija HT22:
Ta študija v reviji International Journal of Molecular Medicine (2019) je predlagala nevroprotektivni potencial krokina, spojine, izolirane iz Crocus sativus L., vcelicah HT22,poškodovanih zL-glutamatom.
V tej objavi v reviji Neuropharmacology (2018) so poročali, da derivati oksindola ščitijo pred smrtjo celic HT22, ki jo povzroči oksidativni stres.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen v reviji Journal of Ginseng Research leta 2019. V tej študiji so bili raziskani nevroprotektivni učinki naravnega izdelka, ginsenozida Rb2, z uporabo celične linije HT22. Študija je pokazala, da ginsenozid rb2 učinkovito zmanjša oksidativni stres in celično smrt, povzročeno z glutamatom, v mišjih hipokampalnih celicah HT22.
V tej študiji v reviji Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) je bil ocenjen citotoksični potencial srebrovih nanodelcev v celični liniji HT22.
Ferostatin-1 ščiti celice HT-22 pred oksidativno toksičnostjo
Ta raziskovalni članek je bil objavljen leta 2020 v reviji Neural regeneration research. V njem je bilo predlagano, da ferrostatin-1, inhibitor feroptoze, preprečuje oksidativno toksičnost v hipokampalnih celicah HT22.
6. Viri za celice HT22: Viri: protokoli, videoposnetki in drugo
Nekateri spletni viri o celicah HT22 pojasnjujejo njihovo transfekcijo, diferenciacijo in protokole celičnih kultur:
- HT22 transfekcija: Ta dokument vsebuje optimiziran protokol za transfekcijo HT22 v 24- in 96-delčnih ploščah za celične kulture.
- Diferenciacija celic HT22: Ta članek vas bo izčrpno seznanil s protokolom diferenciacije celic HT22.
Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic HT22:
- HT22 celice subkultivacija: Ta povezava vam bo pomagala spoznati protokol subkultiviranja za celično linijo HT22. Poleg tega vam bo pomagala pri učenju protokola za indukcijo nevrotoksičnosti v celicah.
- HT22 hipokampalne celice: Ta spletna stran vsebuje veliko koristnih informacij o času podvojitve celic HT22, medijih in protokolih za gojenje celic.
Reference
- He, M., et al., Differentiation renders susceptibility to excitotoxicity in HT22 neurons (Diferenciacija vpliva na občutljivost za ekscitotoksičnost nevronov HT22). Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin preprečuje nevrotoksičnost celic HT22 zaradi visoke glukoze prek signalne poti PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Protective effects of berberine against β-amyloid-induced neurotoxicity in HT22 cells via the Nrf2/HO-1 pathway. Bioorganska kemija, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Nevroprotektivni učinki tetrahidrokurkumina proti oksidativnemu stresu, povzročenemu z glutamatom, v hipokampalnih celicah HT22. Molekule, 2019. 25(1): p. 144.