Celična linija HT-29

HT-29 je celična linija človeškega raka debelega črevesa in danke, ki se pogosto uporablja v raziskavah raka in toksikologiji. Te celice so občutljive na standardna kemoterapevtska zdravljenja kolorektalnega raka. Poleg tega je celična linija HT-29 dobro opisan in vitro model za preučevanje odziva črevesnega epitelija na bakterijsko okužbo. Celice HT-29 posnemajo značilnosti zrelih črevesnih celic, tj. enterocitov, in so zato primerne za študije pritrditve in mehanične študije.

Ta članek obravnava vse vidike celične linije HT-29, ki jih morate poznati, preden začnete delati z njo. Predvsem bo vključeval:

  1. Celice HT-29: Izvor in splošne informacije
  2. Informacije o celični kulturi celične linije HT-29
  3. Celice HT-29: Prednosti in omejitve
  4. Celice HT-29: Uporaba
  5. Raziskovalne publikacije o celicah HT-29
  6. HT-29 celice Viri: Viri: protokoli, videoposnetki in drugo

1. Celice HT-29: HT-29: izvor in splošne informacije

Pred uporabo katere koli celične linije morate poznati splošne značilnosti in izvor celične linije. V tem poglavju boste izvedeli naslednje: Kaj so celice HT-29? Ali je HT-29 celična linija kolorektalnega raka? Kakšna je morfologija celic HT-29?

Kaj je celična linija HT-29? HT-29 je celična linija kolorektalnega adenokarcinoma, ki sta jo leta 1964 ustvarila Trempe in Fogh. Celice so bile prvotno pridobljene iz primarnega tumorja kavkaške ženske (44 let) z adenokarcinomom debelega črevesa in danke [1]. Od ustanovitve se ta celična linija uporablja za preučevanje biologije raka.

Morfologija celic HT-29: HT-29 ima na splošno epitelijsko morfologijo. Diferencirane celice rastejo v monoslojih, tvorijo tesne celične spoje in imajo apikalno krtačno mejo. Če te celice gojimo v gojišču s pomanjkanjem glukoze ali jim dajemo induktorje, kot sta butirat ali kislina, imajo lastnosti, podobne enterocitom.

Velikost celic: Premer celične linije HT-29 kolorektalnega raka je 11 μm.

Genom in ploidnost: Celica HT-29 ima 71 kromosomov. Lahko se giblje med 68 in 72. Poleg tega je poenostavljeno število kromosomov za celice HT-29 hipertriploidno, pri čemer se komponenta 2S pojavlja v 2,4 %.

Kaj je HT29 MTX? HT29 MTX je na metotreksat odporna celična linija, izolirana iz prvotne celične linije HT-29 človeškega raka debelega črevesa s prilagoditvijo na 10 µM metotreksata. Te celice imajo značilnosti zrelih gobličnih celic, ki izločajo sluz.

Delitev in gibanje celic kolorektalnega raka pod mikroskopom.

2. Podatki o celični kulturi celične linije HT-29

Poznavanje osnovnih zahtev za gojenje celične linije vam lahko olajša delo z njo. Vedeti morate: kakšen je čas podvojitve celične linije HT-29? Kakšna je gostota naselitve celic HT-29? Katera gojišča so primerna za celice HT-29?

Čas podvojitve

Povprečni čas podvojitve celične linije HT-29 je 24 ur.

Adherentne/suspenzije

HT-29 je adherentna celična linija.

Gostota naselitve

Priporočena gostota setve za celice HT-29 je 3 x104 celic/cm2. Gojene celice speremo z 1 X PBS in jih po 8-10 minutah inkubacije z akutazo odcepimo. Dodamo sveže gojišče in celice centrifugiramo. Celični pelet ponovno suspendiramo in celice razporedimo v nove erlenmajerice s priporočeno gostoto celic.

Rastno gojišče

Za optimalno gojenje celic HT-29 se uporablja Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM), dopolnjeno z 2,5 mM L-glutaminom in 10 % FBS. Gojišče je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.

Pogoji rasti

Celice HT-29 za rast potrebujejo humificiran inkubator s temperaturo 37 °C in 5 %CO2.

Shranjevanje

Te celice shranjujemo v parni fazi tekočega dušika pri temperaturi pod -195 °C.

Gojišče za zamrzovanje in postopek

Gojišče za zamrzovanje, ki se uporablja za celično linijo HT-29, je CM-1 ali CM-ACF. Celice se zamrznejo s počasnim postopkom zamrzovanja, ki povzroči padec temperature za 1 °C in učinkovito zaščiti vitalnost celic.

Postopek odtaljevanja

Zamrznjene celice HT-29 odtalimo v vodni kopeli, nastavljeni na temperaturo 37 °C. Te celice lahko ponovno suspendiramo in jih neposredno razporedimo v bučko s svežim rastnim gojiščem. V nasprotju s tem lahko odmrznjene celice centrifugiramo, da odstranimo elemente zamrzovalnega gojišča, jih ponovno suspendiramo v svežem gojišču in gojimo v bučkah.

Raven biološke varnosti

Za ravnanje s celično linijo HT-29 in njeno vzdrževanje se uporablja stopnja biološke varnosti 1.

Celice HT-29 pod 10-kratno in 20-kratno povečavo.

3. Celice HT-29: Prednosti in omejitve

Vsaka celična linija ima svoje prednosti in slabosti, po katerih se razlikuje od drugih celičnih linij. V tem razdelku so opisane glavne prednosti in omejitve, povezane s celicami HT-29.

Prednosti

Glavne prednosti celic HT-29 so:

  • Enostavnost gojenja

    Celično linijo HT-29 je enostavno obdelovati in vzdrževati, saj za gojenje ni zahtevnih zahtev. Pogosto se goji v raziskovalnih laboratorijih.

  • In vitro model črevesnih celic

    Celice HT-29 se lahko pod posebnimi pogoji gojenja diferencirajo v zrele črevesne celice (enterocite in celice, ki proizvajajo sluz). Uporabljajo se kot celični model za preučevanje prebave hrane in biološke dostopnosti.

  • Visoka učinkovitost transfekcije

    Celice raka debelega črevesa HT-29 imajo visoko učinkovitost transfekcije, zato so primerne za študije izražanja in regulacije genov. Z različnimi metodami je mogoče izvajati poskuse s prehodno in stabilno transfekcijo.

  • Občutljivost na zdravila

    Celice HT-29 so občutljive na kemoterapevtska zdravila, kot sta fluorouracil in oksaliplatin, ki se pogosto uporabljata pri zdravljenju raka debelega črevesa. Uporabljajo se za preučevanje odpornosti na zdravila in presejanje potencialnih terapevtskih zdravil za kolorektalni karcinom.

Omejitve

  • Heterogenost

    Celice HT-29, tako kot druge celične linije raka, kažejo heterogenost in ne tvorijo enotne celične populacije. To lahko vpliva na ponovljivost rezultatov v nekaterih testih in povzroči manjše razlike v eksperimentalnih rezultatih.

  • Omejena diferenciacija

    Celice HT-29 imajo omejen diferenciacijski potencial. Ne diferencirajo se v celoti v črevesne celice ali celice debelega črevesa, ampak imajo le nekaj značilnih lastnosti. Ta omejitev lahko omejuje njihovo uporabo pri preučevanju kompleksnejših bioloških procesov.

4. celice HT-29:

Celica HT-29 se zaradi širokega spektra uporabe pogosto goji v raziskovalnih laboratorijih. V tem poglavju je zajetih le nekaj pomembnih aplikacij celic HT-29.

Raziskave raka: HT-29 je celična linija kolorektalnega adenokarcinoma, zato se uporablja za preučevanje napredovanja raka, razvoja in osnovnih molekularnih mehanizmov. V študiji, izvedeni leta 2018, je bila celična linija HT-29 uporabljena za raziskovanje celičnih molekul, odgovornih za metastaziranje. V tej študiji je bilo ugotovljeno, da gena vimentin in CXCR4 uravnavata metastaziranje celic. Medtem ko lahko s transfekcijo posnemovalca mikroRNA-193a-5p zmanjšamo ravni mRNA teh genov in uspešno zmanjšamo metastaziranje rakavih celic [2].

Toksikološke raziskave: Celica HT-29 se pogosto uporablja v toksikoloških raziskavah. Te celice kolorektalnega karcinoma se uporabljajo za ocenjevanje toksičnosti različnih kandidatnih zdravil z različnimi testi. V študiji je bil na primer raziskan potencial toksičnosti etanolnega izvlečka rastline Syzygium cumini na celični liniji HT-29. Rezultati so pokazali znatno zaviranje rasti celic HT-29, kar kaže na obetavne protirakave lastnosti izvlečka [3].

Mikrobiologija: HT-29 se lahko uporablja kot gostiteljski celični sistem za raziskovanje patogeneze morebitnih mikrobov, tj. bakterij in virusov. Raziskovalci lahko celice HT-29 okužijo z mikrobi, da bi raziskali njihovo virulenco in odziv gostitelja. V takšni študiji so celice HT-29 uporabili za raziskovanje probiotičnih lastnosti mlečnokislinskih bakterij [4]. V drugi študiji so celice HT-29 uporabili za oceno učinkovitosti in varnosti zdravljenja z bakteriofagi [5].

5. Raziskovalne objave o celicah HT-29

V tem razdelku so predstavljene nekatere pomembne publikacije o celicah HT-29, ki vam bodo v pomoč pri pripravi vaše raziskovalne študije.

Ocena protirakavega učinka etanolnega izvlečka Syzygium cumini na kolorektalno celično linijo HT-29

Ta študija predlaga etanolni izvleček Syzygium cumini kot potencialno protirakavo sredstvo proti celični liniji kolorektalnega raka HT-29. Izvleček je znatno zaviral rast rakavih celic.

Tetrandrin zavira rast celic karcinoma debelega črevesa HT-29 prek poti Bcl-2/Caspaza 3/PARP in faze G1/S

V tej publikaciji v reviji Bioscience Reports je bilo preizkušeno protirakavo delovanje spojine tetradrin na celicah HT-29. Rezultati so pokazali, da tetradrin zavira proliferacijo in rast rakavih celic z uravnavanjem celičnih signalnih poti.

mikroRNA-193a-5p zavira migracijo človeških celic raka debelega črevesa HT-29 z zaviranjem poti metastaziranja

Ta študija predlaga, da lahko miRNA-193a-5p potencialno uravnava metastaziranje celic HT-29 z uravnavanjem genov, povezanih z metastaziranjem.

Bakteriofagi so bolj virulentni za bakterije s človeškimi celicami kot v bakterijski kulturi; spoznanja iz celic HT-29

Ta članek je bil objavljen v reviji Nature Scientific Reports leta 2018. V tej študiji je bila uporabljena tumorska celična linija HT-29 kot model črevesnih celic za oceno učinkovitosti predlaganega zdravljenja z bakteriofagi.

Probiotične lastnosti laktobacilov in njihova sposobnost zaviranja adhezije enteropatogenih bakterij na celice Caco-2 in HT-29

V tej študiji so raziskovalci uporabili celice HT-29, da bi raziskali probiotično delovanje mlečnokislinskih bakterij. Zanimivo je, da je študija pokazala, da bakterije laktobacili preprečujejo adhezijo patogenih bakterij na celice debelega črevesa.

6. Celice HT-29 Viri: Viri: protokoli, videoposnetki in drugo

V tem razdelku so predstavljeni nekateri spletni viri, ki so na voljo o celicah HT-29 in pomagajo pri učenju protokolov za njihovo vzdrževanje, gojenje in transfekcijo.

Protokoli za gojenje celic

Naslednji viri vam bodo pomagali pri subkultiviranju celic HT-29.

Protokoli za transfekcijo

Celična linija HT-29 ima veliko učinkovitost transfekcije in se pogosto uporablja v študijah izražanja genov. Naslednji viri opisujejo možne protokole transfekcije za te celice.

Videoposnetki, povezani s celično linijo HT-29

Tukaj je nekaj videoposnetkov o gojenju in vzdrževanju te tumorske celične linije.

  • Pasažiranje celic: V tem videoposnetku je prikazan protokol prehoda celic za adherentne celične linije.
  • Transfekcija celic HT-29: Ta videoposnetek vas bo seznanil z metodo transfekcije, ki se uporablja za celice HT-29.

Pričakujemo, da so informacije v tem članku dragocene in zadostne za obvladovanje in vzdrževanje celičnih linij HT-29. Če nameravate v svoji študiji uporabiti celice HT-29, jih naročite pri nas.

Reference

  1. Martínez-Maqueda, D., B. Miralles in I. Recio, celična linija HT29. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: str. 113-124.
  2. Shirafkan, N., et al. mikroRNA-193a-5p zavira migracijo človeških celic raka debelega črevesa HT-29 prek zaviranja poti metastaziranja. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
  3. Khodavirdipour, A., R. Zarean in R. Safaralizadeh, Evaluation of the anti-cancer effect of Syzygium cumini ethanolic extract on HT-29 colorectal cell line (Vrednotenje protirakavega učinka etanolnega izvlečka Syzygium cumini na celično linijo HT-29 debelega črevesa ). Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
  4. Fonseca, H.C., et al., Probiotične lastnosti laktobacilov in njihova sposobnost zaviranja adhezije enteropatogenih bakterij na celice Caco-2 in HT-29. Probiotiki in protimikrobni proteini, 2021. 13: p. 102-112.
  5. Shan, J., et al., Bakteriofagi so bolj virulentni za bakterije s človeškimi celicami kot v bakterijski kulturi; spoznanja iz celic HT-29. Znanstvena poročila, 2018. 8(1): p. 5091.

Ugotovili smo, da ste v drugi državi ali uporabljate drug jezik brskalnika, kot je trenutno izbran. Ali želite sprejeti predlagane nastavitve?

Zapri