Celice HK-2 – preučevanje delovanja in patologije ledvic s celicami HK-2 v raziskavah ledvic
HK-2 je imortalizirana linija človeških ledvičnih epitelnih celic, ki se pogosto uporablja v toksikoloških raziskavah. Raziskovalci ocenjujejo učinke okoljskih toksinov na te ledvične celice. Poleg tega uporabljajo celice HK-2 tudi za preučevanje ledvičnih bolezni in njihovih osnovnih mehanizmov.
- Rastno gojišče
- Medij za celično linijo keratinocitov, ki vsebuje 10 % fetalnega govejega seruma, 0,05 mg/ml govejega hipofiznega ekstrakta (BPE) in 5 ng/ml epidermalnega rastnega faktorja (EGF), je idealen medij za celice HK-2. Medij je treba zamenjati vsakih 2 do 3 dni na teden.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve za celice HK-2 je med 47,3 in 61,7 urami.
- Vrsta rasti
- Linija ledvičnih epitelnih celic HK-2 je adhezivna.
- Raven biološke varnosti
- BSL-2
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči HK-2
Celice HK-2: Izvor in splošne značilnosti
Za pravilno ravnanje, vzdrževanje in uporabo celične linije je nujno poznati njen izvor in splošne značilnosti. Ta del članka bo obravnaval naslednje: Kaj so celice HK-2 v človeški ledvici 2? Kakšna je vloga HK2? Kaj so celice HK2? Kakšen je izvor celične linije HK-2? Kakšna je velikost in morfologija celic HK-2?
- Celice človeške ledvice 2 (HK-2) so vrsta proksimalnih tubulnih celic, ki izvirajo iz normalnega ledvičnega tkiva odraslega Evropejca. Celična linija HK-2 je bila vzpostavljena s transfekcijo ledvičnih celic z rekombinantnim retrovirusom, ki vsebuje gene E6/E7 človeškega papilomavirusa 16. Ta poskus je povzročil imortalizacijo in vzpostavitev neprekinjeno rastoče celične linije HK-2 ledvičnega epitelija.
- Celice HK-2 imajo epitelijsko morfologijo.
- Velikost celic HK-2 je med 17,4 in 18,6 µm v premeru. Povprečni premer je 18,2 µm [1].
Celična linija HK-2: Podatki o gojenju
Informacije o gojenju celične linije človeških ledvic 2 vam lahko znatno pomagajo, preden začnete z njo delati. V tem delu članka so navedene nujne informacije o gojenju celic HK-2. Izvedeli boste: Ali so celice HK-2 adhezivne? Kakšen je čas podvojitve celic HK-2? Kateri gojišče se uporablja za gojenje celic HK-2?
Ključne točke za gojenje celic HK-2
Čas podvojitve populacije:
Čas podvojitve celic HK-2 je med 47,3 in 61,7 urami.
Adhezivne ali v suspenziji:
Linija ledvičnih epitelnih celic HK-2 je adhezivna.
Razmerje pri subkultiviranju:
Celice HK-2 se subkultivirajo v razmerju 1:2 do 1:4. Adherentne celice HK-2 se speremo z 1 x PBS in inkubiramo pri sobni temperaturi 8 do 10 minut po dodajanju raztopine Accutase. Kultivacijski medij se doda disociiranim celicam in centrifugira. Zbrane celice se previdno ponovno suspendirajo in prelijejo v nove kolbe za kultiviranje.
Rastno gojišče:
Medij za celično linijo keratinocitov, ki vsebuje 10 % fetalnega govejega seruma, 0,05 mg/ml govejega hipofiznega ekstrakta (BPE) in 5 ng/ml epidermalnega rastnega faktorja (EGF), je idealen medij za celice HK-2. Medij je treba zamenjati vsakih 2 do 3 dni na teden.
Pogoji za rast:
Kulture celic človeške ledvice 2 se hranijo v vlažnem inkubatorju z 5 % CO2 pri 37 °C.
Shranjevanje:
Zamrznjene celice se shranjujejo v plinski fazi tekočega dušika ali pri temperaturi pod -150 °C v zamrzovalniku z izredno nizko temperaturo.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
Mediji za zamrzovanje CM-1 ali CM-ACF so idealni za zamrzovanje celic HK-2. Na kratko, izbrana je metoda počasnega zamrzovanja, ki omogoča padec temperature le za 1 stopinjo Celzija na minuto in ščiti celice pred kakršnim koli šokom.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice se odmrzujejo v vodni kopeli, nastavljeni na temperaturo 37 stopinj Celzija. Tem celicam se doda svež gojišče in se ponovno suspendirajo. Nato se celice razporedijo v novo bučko, ki vsebuje gojišče za rast. Po 24 urah se gojišče zamenja, da se odstranijo sestavine sredstva za zamrzovanje.
Raven biološke varnosti:
Celične kulture HK-2 se gojijo v laboratorijih z ravnjo biološke varnosti 1.
Prednosti in omejitve celic HK-2
HK-2 je široko uporabljena linija epitelnih celic proksimalnih tubulov človeka. Tako kot druge celične linije ima tudi ta svoje prednosti in omejitve. V tem poglavju bomo obravnavali nekatere ključne prednosti in slabosti celične linije človeških ledvic 2.
Prednosti
Glavne prednosti celične linije HK-2 so:
Dobro karakterizirana
Celična linija HK-2 je podrobno opisana glede na morfologijo, velikost in genom. Na teh normalnih ledvičnih celicah je bilo opravljenih številnih raziskav.
Imortalizirana
HK-2 je neprekinjena celična linija z daljšo življenjsko dobo, kar omogoča njeno razmnoževanje skozi več pasaz. Ta lastnost zagotavlja neprekinjeno oskrbo s celicami za laboratorijske poskuse.
Značilnosti epitelija proksimalnih tubulov
Celice HK-2 kažejo dobro diferenciran fenotip, značilen za celice proksimalnih tubulov (PTC), ki se nahajajo v človeški ledvici. Ta edinstvena lastnost naredi celice HK-2 dragocen in vitro model za preučevanje ledvične fiziologije, celičnih procesov in odzivov na različne dražljaje.
Omejitve
Tukaj je nekaj omejitev celične linije HK-2:
In vitro model
HK-2 služi kot in vitro model normalnih ledvičnih celic, zlasti pa kaže značilnosti epitelnih celic proksimalnih tubulov. Vendar pa morda ne odraža v celoti kompleksnosti človeškega ledvičnega tkiva in mikrookolja, ki ga najdemo in vivo.
Uporaba celične linije HK-2 v raziskavah
Celična linija HK-2 ima številne uporabe v toksikoloških raziskavah. Tukaj smo obravnavali nekatere specifične in pomembne raziskovalne uporabe te človeške celične linije proksimalnih tubulov.
- Fiziologija ledvic: Celice HK-2 se pogosto uporabljajo za preučevanje normalne fiziologije in funkcij ledvic. Raziskovalci uporabljajo te epitelne celice proksimalnih tubulov za preučevanje ionskih kanalov, transportnih procesov in drugih celičnih mehanizmov, ki uravnavajo homeostazo ledvic. Raziskovalci so na primer preučevali vlogo kanalov Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) pri (+)-Conocarpan (CNCP), neolignanu, ki povzroča celično smrt v ledvičnih epitelnih celicah HK-2 [2].
- Bolezni ledvic: Celicna linija človeških ledvic 2 se uporablja za preučevanje različnih bolezni ledvic, npr. akutne poškodbe ledvic in diabetične nefropatije, ter njihovih osnovnih celičnih in molekularnih mehanizmov. Raziskave so na primer pokazale, da so ravni metilacije proteina klotho povezane z ledvično okvaro. Zmanjšanje metilacije promotorja gena Klotho lahko okrepi njegovo izražanje in ublaži poškodbe ledvic, povzročene v diabetičnih modelih miši db/db in celicah HK-2, obdelanih z visoko glukozo [3].
- Toksikološke študije: Celice HK-2 so odlično raziskovalno orodje za ocenjevanje potencialnih učinkov različnih zdravil, kemikalij in onesnaževalcev okolja. Študije lahko raziskovalcem pomagajo pri ocenjevanju varnosti zdravil in stranskih učinkov na ledvične celice. Na primer, študija, objavljena leta 2022, je ocenila potencialne učinke polisaharidov naravne zeliščne rastline Polygonatumkingianum (PK) in vodnega izvlečka na uranom povzročeno nefrotoksičnost v celicah HK-2. Ugotovili so, da PK izvaja zaščitne učinke in preprečuje zastrupitev z uranom v ledvičnih celicah [4].
5. Celice HK-2: Raziskovalne publikacije
V nadaljevanju so navedene nekatere zanimive raziskovalne publikacije, ki obravnavajo epitelne celice ledvic HK-2.
Ta študija, objavljena v reviji Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022), predlaga, da lahko krožna RNA HIPK3 zmanjša zaviranje proliferacije celic HK-2, ki ga povzroča toksičnost visoke ravni glukoze. Poleg tega lahko zavira celično smrt z regulacijo kaskade miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Ta raziskovalna publikacija v reviji Nanomedicine (2020) je ocenila različne mehanizme toksičnosti zlatih nanodelcev (AuNPs) v rakavih celicah 786-0 in epitelnih celicah proksimalnih tubulov HK-2.
Ta članek je bil objavljen v reviji Renal Failure (2022). Ugotovitve kažejo, da lahko mikroRNA-320c zmanjša toksičnost, ki jo povzroča visoka raven glukoze v ledvičnih celicah (HK-2), tako da deluje na PTEN in zavira signalno pot PI3K/AKT.
Ta študija v reviji Tissue Engineering Part A (2022) predlaga, da eksosomi, pridobljeni iz mezenhimalnih izvornih celic, preprečujejo epitelno-mezenhimalno prehod HK-2 ledvičnih celic.
Članek v reviji Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) navaja, da lncRNA TapSAKI okrepi vnetni odziv in celično smrt celic HK-2 z regulacijo signalne poti mikroRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
Viri za celično linijo HK-2: protokoli, videi in več
HK-2 je znana celična linija. Tukaj je nekaj virov, ki opisujejo protokol za gojenje celic HK-2.
- Celična kultura HK-2: Ta spletna stran vsebuje obsežne informacije o celični kulturi HK-2. Na primer, ponuja recept za gojišče celic HK-2, protokol za pasiranje ter protokol za ravnanje in vzdrževanje proliferativnih in krioprezerviranih kultur.
- Prenos celic: Ta video vam bo pomagal spoznati splošni protokol delitve ali prenosa adhezivnih celičnih linij.
Sklici
- Handl, J., et al., Vpliv ponavljajočega pasiranja na občutljivost človeških proksimalnih tubularnih celic HK-2 na toksične spojine. Physiological Research, 2020. 69(4): str. 731.
- Yang, G., et al., Aktivacija kanalov TRPC6 prispeva k (+)-conocarpanom povzročeni apoptični celični smrti v celicah HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: str. 281–290.
- Yang, X.H., et al., EGCG zmanjšuje poškodbe ledvic z obratom hipermetilacije klotho pri diabetičnih db/db miših in celicah HK-2. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Zaščitni učinki polisaharidov Polygonatum kingianum in vodnega izvlečka na toksičnost, povzročeno z uranom, v človeških ledvičnih celicah (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: str. 68–79.