Celice DLD-1: Uporaba in spoznanja o celicah DLD-1 v raziskavah raka debelega črevesa
DLD-1 je linija človeških celic kolorektalnega karcinoma, ki se pogosto uporablja v raziskavah raka. Je dragoceno orodje za preučevanje različnih vidikov raka debelega črevesa, vključno z razvojem tumorja, napredovanjem bolezni, osnovnimi molekularnimi mehanizmi in odzivom na terapevtska sredstva. Zato je DLD-1 izjemno pomemben za razumevanje bolezni in razvoj potencialnih strategij zdravljenja.
- Rastno gojišče
- Za gojenje celic DLD-1 se uporablja RPMI 1640 z dodatki, vključno z 10 % fetalnim govejim serumom (FBS), 2,1 mM stabilnim glutaminom in 2,0 g/l NaHCO3. Gojišče je treba zamenjati 2–3-krat na teden.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve DLD-1 je približno 15 ur.
- Vrsta rasti
- DLD-1 je adhezivna linija človeških celic raka debelega črevesa. Celice rastejo v monoslojih.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči DLD-1
Splošne značilnosti in izvor celic DLD-1
Preden se raziskovalec loti dela s celično linijo, najprej preuči njen izvor in splošne lastnosti. Ta del članka je podrobna predstavitev celične linije DLD-1. Obravnava naslednja pogosto zastavljena vprašanja: Kaj so celice DLD-1? Kaj je rakava celična linija DLD-1? Kakšne so mutacije celične linije DLD-1? Kakšna je velikost celice DLD-1? Kakšna je morfologija celic DLD-1?
- DLD-1, celična linija raka debelega črevesa, izvira iz debelega črevesa 67-letnega moškega pacienta z adenokarcinomom debelega črevesa. Izolirali so jo D.L. Dexter in sodelavci v letih 1977–1979. Ta celična linija ima isti izvor kot celične linije HCT-8, HCT-15 in HRT-18.
- Podobno kot kolorektalni raki imajo tudi celice DLD-1 fenotip mikrosatelitske nestabilnosti [1].
- Mutacije DLD-1 vključujejo KRAS, P53, BRAF, BRCA1 in BRCA2. Zaradi statusa DLD-1 P53, mutacij DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 in DLD-1 KRAS se te celice štejejo za idealne za raziskave raka.
- Te celice imajo epitelijsko podobno morfologijo.
- Velikost celic linije DLD-1 je približno 15 µm.
- Človeška celična linija kolorektalnega raka DLD-1 ima psevdodiploidni kariotip. Okoli 86 % celic ima modalno število kromosomov 46. Vendar pa lahko pri 17,1 % celične populacije obstaja tudi poliploidija.
Podatki o gojenju celične linije DLD-1
Pred gojenjem katere koli celične linije morate poznati njene osnovne zahteve za gojenje celic. V tem poglavju bomo poudarili pomembne točke, ki jih morate poznati pred začetkom dela s celično linijo DLD-1. To vključuje: Kaj je čas podvojitve DLD-1? Kaj je gojišče DLD-1? Kakšna je gostota posevka celic DLD-1? Kako gojite celice DLD-1?
Ključne točke za gojenje celic DLD-1
Čas podvojitve:
Čas podvojitve DLD-1 je približno 15 ur.
Adherente ali v suspenziji:
DLD-1 je adhezivna linija človeških celic raka debelega črevesa. Celice rastejo v monoslojih.
Gostota sejanja:
Celice DLD-1 se posejejo v gostoti od 1 do 2 x 104 celic/cm2. Adherentne celice se operejo z 1x fosfatnim pufrom (PBS) in inkubirajo s pasážno raztopino (Accutase) pri sobni temperaturi. Po 8 do 10 minutah inkubacije se odlepljene celice dodajo v gojišče in centrifugirajo. Celicni pelet se nato previdno ponovno suspendira, celice pa se prelijejo v nove posode za gojenje, ki vsebujejo gojišče.
Rastno gojišče:
Za gojenje celic DLD-1 se uporablja RPMI 1640 z dodatki, vključno z 10 % fetalnim govejim serumom (FBS), 2,1 mM stabilnim glutaminom in 2,0 g/l NaHCO3. Gojišče je treba zamenjati 2–3-krat na teden.
Pogoji rasti:
Kulture DLD-1 se gojijo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C z dovodom 5 % CO2.
Shranjevanje:
Celice DLD-1 se shranjujejo v plinski fazi tekočega dušika ali v električnem zamrzovalniku z izredno nizko temperaturo (pri temperaturi pod -150 °C).
Postopek zamrzovanja in gojišče:
Za zamrzovanje celic DLD-1 se lahko uporabita zamrzovalna sredstva CM-1 ali CM-ACF. Vedno se priporoča počasen postopek zamrzovanja, ki omogoča postopno zniževanje temperature za 1 °C, s čimer se prepreči šok celic in zaščiti njihova sposobnost preživetja.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice se odmrzujejo v vodni kopeli, nastavljeni na temperaturo 37 °C, 40 do 60 sekund, dokler ne ostane le majhen kepec ledu. Nato se celice dodajo v svežo gojišče in centrifugirajo. Ta korak je potreben za odstranitev sestavin sredstva za zamrzovanje iz celic. Zbrane celice se ponovno suspendirajo v gojišču za rast in se razporedijo v kolbo za rast.
Raven biološke varnosti:
Celična linija DLD-1 se vzdržuje v laboratorijih stopnje biološke varnosti 1.
Celična linija DLD-1: prednosti in omejitve
V tem delu članka bomo pregledali prednosti in omejitve celične linije DLD-1 za raka debelega črevesa.
Prednosti
Glavne prednosti celične linije DLD-1 so:
Model raka debelega črevesa
Celice DLD-1 imajo mutacije, ki se pogosto pojavljajo pri bolnikih z rakom debelega črevesa, kot so mutacija DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA in DLD-1 BRCA2. Zaradi te relevantnosti so klinično primeren celični model za preučevanje te bolezni.
Tumorigena celična linija
Celice DLD-1 so tumorogene. Pri injiciranju v golo miško lahko povzročijo nastanek tumorjev. Zato raziskovalci te celice uporabljajo za razvoj modelov tumorjev s presaditvijo, ki pomagajo pri preučevanju nastanka, razvoja in napredovanja tumorjev in vivo.
Omejitve
Omejitve, povezane s celicami DLD-1, so:
Heterogenost
Populacije celic raka debelega črevesa DLD-1 kažejo genetsko in fenotipsko heterogenost. To lahko vpliva na splošno veljavnost rezultatov raziskav.
Raziskovalne aplikacije celične linije DLD-1
Celična linija DLD-1 ponuja vrsto uporab v raziskavah raka. V tem poglavju so obravnavane nekatere pomembnejše uporabe.
- Raziskave raka: Celice DLD-1 služijo kot dragocen in vitro model za razumevanje molekularnih mehanizmov, ki so osnova za rast, razvoj in napredovanje raka debelega črevesa. Poleg tega se uporabljajo za preučevanje genske ekspresije, signalnih poti in vpliva specifičnih genetskih mutacij na vedenje rakavih celic. Raziskava, izvedena leta 2022, je pokazala, da signalna kaskada PI3K/Akt/YAP uravnava migracijo in invazijo celične linije DLD-1 za kolorektalnega raka [2].
- Razvoj zdravil: Raziskovalci uporabljajo celično linijo DLD-1 za testiranje učinkovitosti zdravil proti raku in ocenjevanje njihovega potenciala za zdravljenje raka debelega črevesa. To pomaga pri razvoju zdravil in učinkovitem boju proti bolezni. V študiji, izvedeni leta 2022, so uporabili rakavo celično linijo DLD-1 in raziskali protirakovo aktivnost silicijevih ftalocianinov, kemično sintetiziranih spojin. Rezultati študije so nakazali, da so te spojine močna protirakova sredstva [3]. Zanimivo je, da je druga raziskava z uporabo celic DLD-1 odkrila protirakav potencial beljakovine P8, pridobljene iz probiotikov [4].
5. Raziskovalne publikacije o celicah DLD-1
V tem poglavju bomo izpostavili nekaj zanimivih in pogosto citiranih publikacij, ki obravnavajo celično linijo DLD-1 za raka debelega črevesa.
Ta publikacija je objavljena v reviji Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Študija je ugotovila, da je flavonoid diosmin povzročil celično smrt v celicah DLD-1 in ustavil celični cikel; zato je lahko potencialno sredstvo proti raku.
Bromelain učinkovito zavira kolorektalnega raka z mutacijo Kras s spodbujanjem ferroptoze
Ta študija, objavljena v reviji Animal Cells and Systems (2018), je pokazala, da bromelain, encim, zavira mutacijo DLD-1 KRAS in ima močne citotoksične učinke.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen leta 2019 v reviji »Environmental Toxicology«. Študija je raziskovala protitumorske učinke naravne spojine, bergaptana, z uporabo kolorektalne celične linije DLD-1.
Ta študija, objavljena v reviji „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials“ (2023), je ugotovila, da so nanokompoziti kurkumina in železovega oksida zelo učinkoviti proti celicam kolorektalnega raka DLD-1.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen leta 2020 v reviji Turkish Journal of Biology. Študija je predlagala, da naravni produkt, epibrassinolid, posreduje aktivacijo AKT v celicah DLD-1, kar stimulira avtofagijo, povezano s poliamini.
Viri za celično linijo DLD-1: protokoli, videi in več
Spodaj je navedenih nekaj virov o celicah DLD-1:
- Transfekcija DLD-1: Ta video vodič je izčrpen priročnik o protokolu in vitro transfekcije DLD-1.
- Celice DLD-1: Ta raziskovalni članek na kratko opisuje zahteve za gojenje celic DLD-1, vključno z gojišči in pogoji gojenja. Poleg tega vam lahko pomaga pri učenju protokola transfekcije, ki se uporablja za celice DLD-1.
Naslednje povezave vsebujejo protokol za gojenje DLD-1, človeških celic raka debelega črevesa.
- Celična linija DLD-1: Ta spletna stran ponuja osnovne informacije o celični liniji DLD-1. Pomagala vam bo pri spoznavanju različnih protokolov za gojenje celic DLD-1, vključno s subkultiviranjem ter ravnanjem s kriokonzerviranimi in proliferativnimi kulturami.
Sklici
- Gavrilas, L.I., et al., Proapoptotični geni kot novi cilji za enojna in kombinirana zdravljenja z resveratrolom in kurkuminom pri raku debelega črevesa. Food & function, 2019. 10(6): str. 3717–3726.
- Takeda, T., et al., Signalizacija PI3K/Akt/YAP spodbuja migracijo in invazijo celic kolorektalnega raka DLD‑1. Oncology Letters, 2022. 23(4): str. 1–9.
- Farajzadeh, N., et al., Protirakova aktivnost novih silicijevih ftalocianinov proti celični liniji kolorektalnega adenokarcinoma (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): str. 19863–19873.
- An, B.C., et al., Proti-rakovne vloge proteina P8, pridobljenega iz probiotikov, v celični liniji kolorektalnega raka DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): str. 9857.