Celice BV2 - Raziskave centralnega živčnega sistema, pojasnjene s celicami mikroglije BV2

BV2 je linija mikroglijskih celic, pridobljenih iz miške, ki se pogosto uporablja v nevroznanstvenih raziskavah. Ta imortalizirana celična linija lahko služi kot model in vitro za preučevanje nevrodegenerativnih bolezni ter z njimi povezanih celičnih stanj in procesov, tj. nevrovnetja. Poleg tega celice BV2 veljajo za alternativni modelni sistem za primarne mikroglije.

Ta članek obravnava izvor, informacije o celični kulturi in raziskovalne aplikacije linije mišjih mikroglijskih celic BV2. Zlasti bomo obravnavali naslednje:

Izvor in splošne značilnosti celic BV2
Celična linija BV2: Informacije o gojenju
Prednosti in omejitve celic BV2
Uporaba celične linije BV2 v raziskavah
Celice BV2: Raziskovalne publikacije
Viri za celično linijo BV2: Viri, protokoli, videoposnetki in drugo

1. Izvor in splošne značilnosti celic BV2

Ta del članka pojasnjuje izvor celične linije BV2 in splošne značilnosti, po katerih se razlikuje od drugih mikroglijskih celičnih linij. V tem poglavju boste preučili: Kaj so celice BV2? Od kod prihajajo celice BV2? Kakšna je velikost celic BV2?

Mikroglijska celična linija BV2 je bila pridobljena iz mikroglije neonatalnih (novorojenih) celic C57/BL6 Celična linija je bila imortalizirana z okužbo celic z retrovirusom J2, ki nosi onkogen v-raf/v-myc [1].
Nestimulirane celice BV2 imajo hipertrofirano morfologijo, podobno amebi. Ta morfologija kaže na zelo aktivirano in vnetno stanje celic BV2 v primerjavi s primarnimi mikroglijami [2].
Premer celične linije BV-2 se giblje med 10 in 15 μm.

BV2 v primerjavi s celično linijo ECO 2

Obe sta mišji mikroglijski celični liniji, vendar se med seboj razlikujeta. Glavna razlika je v tem, da je bila BV2 imortalizirana z gensko manipulacijo, medtem ko je bila ECO 2 imortalizirana spontano. Poleg tega ima ECO 2 enake splošne značilnosti kot BV2, vendar je za njeno gojenje potrebno dodajanje faktorja za stimulacijo kolonij 1 (CSF-1).

Animacija skozi barvito mrežo živčnih celic z impulzi.

2.celična linija BV2: Informacije o gojenju

Pred ravnanjem in vzdrževanjem kulture celične linije so ključnega pomena informacije o gojenju celic. Ta del članka vam bo pomagal spoznati vse ključne točke za gojenje celičnih linij BV2. Govorili bomo zlasti o naslednjem: Kakšen je čas podvojitve BV2? Katera gojišča se uporabljajo za gojenje celic BV2? Ali je celična linija BV2 adherentna ali suspenzijska? Kako odmrznete celice BV2?

Ključne točke za gojenje celic BV2

Čas podvojitve:	Mikroglijske celice BV2 rastejo zelo hitro, povprečni čas podvojitve BV2 je 34,5 ure.
Prilepljene ali v suspenziji:	BV2 je adherentna celična linija.
Razmerje delitve:	Ta adherentna mikroglijska celična linija se subkulturira v razmerju 1:2 do 1:4. Celice se sperejo s PBS in inkubirajo z akutazo (raztopina za disociacijo). Po 10 minutah jih centrifugiramo in poberemo. Te celice se nato dodajo v bučke s svežim rastnim medijem v skladu s priporočenim razmerjem delitve.
Rastno gojišče:	Za gojenje celične linije BV2 se uporablja medij RPMI 1640. BV2 RPMI je za idealno rast celic dopolnjen z 10 % FBS, 2,0 mM stabilnega glutamina in 2,0 g/L NaHCO3. Medij se obnavlja 2- do 3-krat na teden.
Pogoji rasti:	BV2 kulture vzdržujemo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C s stalnim dovajanjem 5 % CO2.
Shranjevanje:	Zamrznjene viale s celicami BV2 hranimo pod temperaturo -150 °C v parni fazi tekočega dušika ali v električnem zamrzovalniku.
Postopek zamrzovanja in medij:	Za celične linije BV2 se priporočajo mediji za zamrzovanje CM-1 ali CM-ACF. Celice se zamrznejo s počasnim postopkom zamrzovanja, ki omogoča padec temperature le za 1 °C na minuto, da se ohrani vitalnost celic.
Postopek odtaljevanja:	Vialico z zamrznjenimi celicami BV2 hitro mešamo v vodni kopeli (37 °C) 40 do 60 sekund, dokler ne ostane majhen košček ledu. Odmrznjene celice se dodajo s svežim rastnim medijem in centrifugirajo, da se odstranijo sestavine zamrzovalnega medija. Zbrane celice ponovno resuspendiramo in jih vlijemo v bučko za rast.
Raven biološke varnosti:	Za gojenje celične linije BV2 se priporoča raven biološke varnosti 1.

Mikroglijske celice BV2 pod mikroskopom pri 40- in 20-kratni povečavi.

3.prednosti in omejitve celic BV2

Tako kot druge celične linije so tudi celice BV2 povezane z nekaterimi prednostmi in omejitvami. Nekatere od njih so navedene tukaj.

Prednosti

Prednosti celične linije BV2 so:

Primarne lastnosti, podobne mikrogliji	Celice BV2 imajo nekatere primarne lastnosti, podobne mikrogliji, in se uporabljajo kot alternativni model za preučevanje mikroglijskih funkcij in odzivov. Izražajo F4/80, CD11b in Iba1, ki so bistveni biomarkerji primarne mikroglije.
Imortalizacija	Celice BV2 so nesmrtne, kar jim omogoča neprekinjeno rast. Zaradi te lastnosti so idealne za dolgoročne poskuse na celičnih kulturah.

Omejitve

Omejitve, povezane s celicami BV2, so:

Celična linija mišjega izvora	Celična linija BV2 je pridobljena iz mišjih mikroglijev. Ugotovitve raziskav z uporabo celic BV2 so lahko omejeno uporabne pri boleznih in raziskavah, značilnih za človeka.
In vitro model	Celice BV2 služijo kot in vitro model za preučevanje mikroglijskih funkcij. Vendar je treba opozoriti, da morda ne posnemajo v celoti značilnosti in kompleksnosti mikroglijskih celic v možganih in vivo.

4.uporaba celične linije BV2 v raziskavah

Celična linija BV2 omogoča več aplikacij v nevroznanstvenih raziskavah. V tem razdelku so navedene nekatere pogoste uporabe celic BV2 v raziskavah.

Raziskave nevrodegenerativnih bolezni: Miška mikroglijska celična linija BV2 je dragoceno raziskovalno orodje za preučevanje nevrodegenerativnih bolezni, kot so Parkinsonova in Alzheimerjeva bolezen ter multipla skleroza. Raziskovalci so preučevali nevrotoksičnost in patologijo bolezni ter ocenjevali terapevtska sredstva z uporabo celičnih linij BV2. V študiji iz leta 2020 so na primer ocenili protivnetni in nevroprotektivni učinek naravnega hidroksistilbena Rhaponticin iz rastline Rheum rhaponticum z uporabo celic BV2, aktiviranih z lipopolisaharidom, kot modela Parkinsonove bolezni. Spojina omili aktivacijo BV2, ki jo posreduje lipopolisaharid (LPS), tako da zavira dušikov oksid sintazo ter zmanjšuje reaktivne kisikove vrste in proinflamatorne mediatorje. Na kratko, raponticin deluje protivnetno in nevroprotektivno na model mikroglije (BV2), povzročene z LPS [3]. Podobno so v študiji preučevali vpletenost signalnih poti v nevrovnetje. Raziskovalci so razvili model vnetja z aktivacijo BV2, ki jo je povzročil lipopolisaharid. Ugotovili so, da je v nevrovnetje vključena signalna os AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB. Poleg tega so s tem modelom ocenili tudi protivnetne in nevroprotektivne učinke naravnega flavonoida beta-naftoflavona (BNF). Spojina je te terapevtske učinke dosegla z zaviranjem aktivacije BV2 [4]. Podobno so v raziskavi uporabili celice BV2 in preučevali izboljševalni učinek zdravila zonisamid na mitohondrijsko disfunkcijo v mikroglijskih celicah. Ugotovitve te študije podpirajo klinično uporabo zonisamida za zdravljenje Parkinsonove bolezni [5].

650,00 €*

Vsebina: 1.5 milliliter

Cene brez davkov in stroškov dostave

cryovial

Številka izdelka: 305156

5.celice BV2: Raziskovalne objave

V nadaljevanju je predstavljenih nekaj zanimivih in najpogosteje citiranih raziskovalnih študij o celicah BV2.

Mitohondrijski lizati povzročajo vnetje in spremembe, pomembne za Alzheimerjevo bolezen, v mikroglijskih in nevronskih celicah

Ta raziskava je bila objavljena v reviji Journal of Alzheimer's Disease (2015). V študiji je bilo predlagano, da lahko molekula mtDNA, ki izhaja iz mitohondrijske poškodbe DAMP (damage-associated molecular pattern), povzroči vnetne spremembe v mikroglijskih celicah (BV2). Tako lahko tudi te prispevajo k nevrovnetnim spremembam pri Alzheimerjevi bolezni.

Terapevtski učinek čaja huanglian jiedu na Alzheimerjevo bolezen z uravnavanjem fagocitoze, ki jo povzroča aβ v mikroglijskih celicah bv-2

V članku, objavljenem v reviji FARMACIA (2021), so uporabili celice BV2 in določili terapevtski učinek Huanglian Jiedu Decoction (HLJDD) na Alzheimerjevo bolezen. Študija je pokazala, da HLJDD spodbuja fagocitozo amiloida beta v BV2 s povečanjem izražanja proteina Trm2, kar je bilo potrjeno z analizo BV2 western blot.

Alfa-sinuklein aktivira mikroglije BV2 v odvisnosti od agregatnega stanja

V tem raziskovalnem članku, objavljenem v Biochemical and Biophysical Research Communications (2016), je bilo predlagano, da lahko alfa-sinuklein, topna beljakovina v odraslem osrednjem živčevju, aktivira celice BV2 glede na njihovo agregatno stanje.

Eksosomi celic BV-2, ki jih inducira alfa-sinuklein: pomemben posrednik nevrodegeneracije pri PD

Ta raziskava je bila objavljena v reviji Neuroscience Letters leta 2013. Ta študija navaja, da so lahko eksosomi, izločeni iz mikroglijskih celic BV2, ki jih aktivira alfa-sinuklein, bistveni posredniki nevrodegeneracije pri Parkinsonovi bolezni.

Idebenon ublaži nevrovnetje in modulira polarizacijo mikroglijev v celicah BV2, stimuliranih z LPS, in pri miših s Parkinsonovo boleznijo, povzročeno z MPTP

Ta študija je bila objavljena v reviji Frontiers Cellular Neuroscience (2019). Predlagala je, da idebenon, antioksidant, modulira polarizacijo mikroglije in zmanjšuje vnetje v celicah BV2, aktiviranih z lipopolisaharidom, in v modelu miši s Parkinsonovo boleznijo, povzročeno z 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridinom (MPTP).

6.viri za celično linijo BV2: Viri: protokoli, videoposnetki in drugo

Spletni viri, ki so na voljo za BV2, so omejeni. Tukaj je nekaj izmed njih.

Subkultiviranje celične linije BV2: Ta spletna povezava vsebuje kratek protokol za subkultiviranje celičnih linij BV2.
Odtajanje zamrznjenih celic: Ta videoposnetek vam bo pomagal spoznati osnovni protokol za odmrzovanje in gojenje zamrznjenih celic.

Tu je naveden protokol za gojenje celic BV2.

Kultivacija celic BV2: Ta spletna povezava vsebuje protokol gojenja celic BV2. Poleg tega vsebuje tudi podatke o sestavi medijev za gojenje celic in medijev za zamrzovanje za celično linijo BV2.

Sklici

Wang, Y., Y. Peng in H. Yan, komentar: Neuroinflammatory In Vitro Cell Culture Models and the Potential Applications for Neurological Disorders (Nevrovnetni modeli celičnih kultur in vitro in možne aplikacije za nevrološke bolezni). Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
Sarkar, S., et al, Characterization and comparative analysis of a new mouse microglial cell model for studying neuroinflammatory mechanisms during neurotoxic insults (Karakterizacija in primerjalna analiza novega modela mišjih mikroglijskih celic za preučevanje nevrovnetnih mehanizmov med nevrotoksičnimi insulti ). Neurotoxicology, 2018. 67: p. 129-140.
Zhao, F., et al., Nevroprotektivni učinek raponticina proti Parkinsonovi bolezni: (1): Vpogled v in vitro model BV-2 in in vivo model miši, povzročen z MPTP. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, 2021. 35(1): str. e22631.
Gao, X., et al. beta-naftoflavon zavira vnetje, ki ga povzroči LPS, v celicah BV-2 prek signalne osi AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB. Imunobiologija, 2020. 225(4): p. 151965.
Tada, S., et al., Zonisamide Ameliorates Microglial Mitochondriopathy in Parkinson's Disease Models (Zonisamid izboljšuje mikroglijsko mitohondriopatijo v modelih Parkinsonove bolezni). Brain Sciences, 2022. 12(2): p. 268.