Celice B16 – Osnovni vodnik po celicah melanoma B16 v onkoloških raziskavah
B16 je celična linija kožnega raka (melanoma) mišjega izvora. Ta celična linija je učinkovit in vitro model za preučevanje kožnih rakov pri človeku. Pogosto se uporablja za preučevanje nastajanja solidnih tumorjev in metastaziranja rakavih celic.
- Rastno gojišče
- Celice B16 se gojijo v gojišču EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium), ki vsebuje 10 % fetalnega govejega seruma (FBS). Gojišče je treba zamenjati 2–3-krat na teden.
- Čas podvojitve
- Povprečni čas podvojitve populacije celic B16 je ocenjen na 24 ur.
- Vrsta rasti
- Celice B16 so adhezivne in rastejo v monoslojih.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči B16
Ta članek vam bo pomagal razumeti osnove celične linije melanoma B16. Natančneje, obravnaval bo naslednje:
Splošne značilnosti in izvor celične linije B16
V tem delu članka bomo obravnavali značilnosti celične linije B16 za melanom. Spoznali boste odgovore na naslednja pogosto zastavljena vprašanja. Na primer: Kaj je rakava celična linija B16? Od kod izvirajo celice B16? Kakšna je velikost celic B16?
- Celična linija B16 je bila ustanovljena leta 1954. Te celice izvirajo iz miši C57BL/6J, ki so spontano razvile tumor na koži v laboratorijih Jackson Laboratories v zvezni državi Maine.
- To so epitelne celice, ki proizvajajo melanin in imajo sposobnost metastaziranja v vranico, jetra in pljuča.
- Celice melanoma B16 rastejo kot monosloji in imajo epitelijsko podobno in vretenasto celično morfologijo.
- Velikost celic linije B16 je približno 15,4 μm.
- Obstajajo različni subkloni celic B16, vključno z B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 in B16F10. Ti subkloni se razlikujejo od matičnih celic B16 in ohranjajo nekatere specifične lastnosti. Na primer, razlikujejo se v morfologiji, velikosti celic in drugih lastnostih. B16F10 ima visoko sposobnost metastaziranja v pljuča, B164A5 pa je najbolj agresivna linija celic kožnega raka v primerjavi z B16F10, B16-GMCSF in B16FLT3 [1].
Podatki o gojenju celične linije B16
Preden začnete vzdrževati ali gojiti celično linijo, boste morda iskali ključne informacije o času podvojitve, tipu celic, gojiščih, pogojih gojenja itd. Ta razdelek vsebuje vse potrebne informacije za gojenje celic B16.
Ključne točke za gojenje celic B16
Čas podvojitve populacije:
Povprečni čas podvojitve populacije za celice B16 je ocenjen na 24 ur.
Adhezivne ali v suspenziji:
Celice B16 so adhezivne in rastejo v monoslojih.
Gostota sejanja:
Priporoča se, da se celice B16 posejejo v gostoti 1 do 2 x 104 celic/cm2. Prilepljene celice B16 se speremo z 1 x PBS in jih ločimo od površine z raztopino Accutase. Celice se centrifugirajo, celični pelet pa se ponovno suspendira v rastnem mediju. Nato se te celice razporedijo v novo kolbo za rast.
Rastno gojišče:
Celice B16 se gojijo v gojišču EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium), ki vsebuje 10 % fetalnega govejega seruma (FBS). Gojišče je treba zamenjati 2–3-krat na teden.
Pogoji za rast:
Za gojenje celične linije B16 se uporablja vlažen inkubator z dovodom 5 % CO2 in temperaturo 37 °C.
Shranjevanje:
Te celice se shranjujejo pri temperaturi pod -150 °C ali v plinski fazi tekočega dušika, da se ohrani njihova vitalnost.
Postopek zamrzovanja in medij:
Za zamrzovanje celic B16 s postopkom počasnega zamrzovanja se uporablja zamrzovalno sredstvo CM-1 ali CM-ACF.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice B16 se odmrzujejo pri 37 °C v vodni kopeli, ki vsebuje protimikrobno sredstvo. Odmrznjene celice se lahko neposredno gojijo tako, da se jih razporedi v kolbe, ki vsebujejo gojišče. Poleg tega se te celice lahko centrifugirajo, da se odstranijo sestavine sredstva za zamrzovanje, nato pa se gojijo v novem gojišču.
Raven biološke varnosti:
Z celicami linije B16 je treba ravnati ali jih gojiti v laboratoriju z ravnjo biološke varnosti 1.
Celična linija B16: prednosti in slabosti
Tako kot druge celične linije ima tudi B16 svojo edinstveno mešanico prednosti in slabosti. V tem poglavju so navedene nekatere pomembne prednosti in slabosti te celične linije melanoma.
Prednosti
B16 je prvo učinkovito mišje orodje, ki se zaradi svojih prednosti široko uporablja v raziskavah metastaz. Nekatere prednosti te celične linije kožnega raka so:
Enostavna gojitev
Celično linijo B16 je enostavno gojiti v raziskovalnih laboratorijih. Široko se uporablja za preučevanje biologije rakavih celic, signalnih poti in drugih področij.
Hitro rast
Celična linija melanoma B16 kaže visoko stopnjo proliferacije, zaradi česar je primerna za preučevanje procesov celične delitve in rasti.
Tumorigenost
B16 je tumorigena celična linija s tumorjem podobnimi lastnostmi, kot so invazija, migracija in proliferacija. Je dragocena za preučevanje nastajanja tumorjev, njihovega napredovanja in metastaziranja.
Pomanjkljivosti
Pomanjkljivosti, povezane s celično linijo B16, so:
Pomanjkanje relevantnosti za človeka
Ker je B16 mišja celična linija melanoma, morda ne odraža natančno biologije kožnega raka pri človeku, kar omejuje prenosljivost raziskovalnih ugotovitev.
Heterogenost
Celice B16 so heterogene in kažejo različne genetske in fenotipne lastnosti znotraj iste kulture. To lahko vpliva na zanesljivost in ponovljivost rezultatov.
Uporaba celic B16
Celična linija B16 se pogosto uporablja v raziskavah. Nekaj obetavnih uporab te celične linije so:
- Biologija tumorjev: Ta mišja celična linija kožnega raka je tumorigena in se pogosto uporablja za razumevanje biologije tumorjev. Opravljenih je bilo več študij za raziskovanje celičnih mehanizmov, ki stojijo za rastjo, proliferacijo in metastaziranjem tumorskih celic z uporabo celic B16. Raziskava, opravljena leta 2020, je uporabila celice B16 za preučevanje vloge dolge nekodirajoče RNA, LncRNA MEG3, pri nastanku, rasti in metastaziranju melanoma. Ta raziskava je ugotovila, da nekodirajoča RNA modulira os miRNA-21/E-kadherin, da spodbudi te celične dogodke [2]. Podobno je bila izvedena raziskava za preučitev potencialne vloge signalizacije Notch1 pri tumorju povzročeni imunosupresiji z uporabo celic B16 [3].
- Odkrivanje zdravil: Celice B16 se uporabljajo za validacijo in testiranje potencialnih terapevtskih učinkov kandidatov za zdravila. V eni študiji so z uporabo celične linije B16 ocenili protitumorski učinek neogamboginske kisline, naravne spojine. Rezultati študije so pokazali, da ta spojina modulira signalno pot PI3K/Akt/mTOR in tako povzroča smrt rakavih celic [4]. Druga študija je preučevala protimelanomski učinek ginsenozida Rg3, saponina, z uporabo celične linije B16. Raziskava je predlagala, da ta naravna spojina povzroča protitumorsko aktivnost z zaviranjem poti ERK in Akt [5].
5. Raziskovalne publikacije, ki obravnavajo celice B16
Tukaj je nekaj pomembnih raziskovalnih publikacij, ki obravnavajo celično linijo melanoma B16.
LncRNA MEG3 spodbuja rast, metastaze in nastanek melanoma z moduliranjem osi miR-21/E-kadherin
Ta publikacija v reviji Cancer Cell International (2020) predlaga, da dolga nekodirajoča RNA MEG3 pospešuje nastanek, rast in metastaze celic melanoma B16 z moduliranjem osi miRNA-21/E-kadherin.
Ta članek je bil objavljen v reviji International Journal of Molecular Medicine leta 2018. Ta študija je preučevala melanogeni učinek in mehanizme derivata psoralena – 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g]kromen-2-ona (MPFC) – v celicah B16. Študija je predlagala, da ta derivat spodbuja melanogenezo s stimulacijo celičnega signaliziranja PKA in p38 MAPK.
Ta raziskava je bila objavljena leta 2018 v reviji Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. Ugotovitve študije kažejo, da aktivacija signalizacije Notch1 v celicah B16 lahko prepreči protitumorsko imunost s povečanjem izražanja gena TGF-β1.
Neogamboginska kislina inducira apoptozo celic melanoma B16 prek signalne poti PI3K/Akt/mTOR
To študijo so leta 2020 izvedli Chunlan Wu in njegovi sodelavci, objavljena pa je bila v reviji Acta Biochimica Polonica. Ta raziskava navaja, da lahko neogamboginska kislina, naravna spojina, povzroči smrt celic melanoma B16 z moduliranjem signalne kaskade PI3K/Akt/mTOR.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen v reviji European Journal of Medicinal Chemistry leta 2018. V tej študiji so raziskovalci preučevali protirakovo aktivnost spojine, kompleksa iridija (III), z uporabo celic melanoma B16.
Ailanton inducira zaustavitev celičnega cikla in apoptozo v celicah melanoma B16 in A375
Ta študija je predlagala, da ima rastlinski bioaktivni Ailanthone protirakav potencial, saj lahko inducira apoptozo in zaustavitev celičnega cikla v celicah melanoma B16 in A375. Ta članek je bil objavljen v reviji Biomolecules leta 2019.
Viri za celično linijo B16: protokoli, videi in več
O celični liniji B16 je na voljo le omejeno število virov, ki pojasnjujejo protokole za njeno gojenje in transfekcijo.
- Gojenje celic melanoma: Ta video ponuja dragocene nasvete za gojenje celičnih linij melanoma.
- Subkultiviranje celične linije: Ta video posnetek pojasnjuje splošni protokol subkultiviranja celične linije.
- Transfekcija celične linije B16F10: Ta video posnetek pojasnjuje protokol transfekcije za podlinijo celic melanoma B16. Lahko vam pomaga optimizirati protokol transfekcije za celice B16.
V nadaljevanju so navedeni nekateri protokoli za gojenje celic B16.
- Gojenje celic B16: Ta spletna stran vsebuje vse potrebne informacije za gojenje celic B16, vključno z gojišči, subkultiviranjem, odmrzovanjem in zamrzovanjem celic.
Sklici
- Danciu, C., et al., Obnašanje štirih različnih podlinij mišjih melanomskih celic B 16: koža C57 BL/6J. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): str. 73–80.
- Wu, L., et al., LncRNA MEG3 spodbuja rast, metastaze in nastanek melanoma prek modulacije osi miR-21/E-kadherin. Cancer cell international, 2020. 20: str. 1–14.
- Yang, Z., et al., Signalizacija Notch1 v celicah melanoma je spodbujala tumor-inducirano imunosupresijo prek upregulacije TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): str. 1–13.
- Wu, C., et al., Neogamboginska kislina inducira apoptozo celic melanoma B16 prek signalne poti PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): str. 197–202.
- Meng, L., et al., Protitumorska aktivnost ginsenosida Rg3 pri melanomu prek zmanjšanja aktivnosti poti ERK in Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): str. 2069–2079.