Celice B16-F10 – raziskovanje celične linije melanomskih celic B16-F10 v raziskavah metastaz
Celice B16-F10 predstavljajo linijo celic melanoma, pridobljeno iz miši C57BL/6J. Široko se uporabljajo v raziskavah kožnega raka. Raziskovalci te celice uporabljajo za preučevanje razvoja in napredovanja tumorja ter terapevtskih posegov. Ta članek bo obravnaval temeljne vidike celic melanoma B16-F10. Vključeval bo zlasti:
- Rastno gojišče
- Celice B16-F10 se gojijo v gojišču DMEM. Gojišče je dopolnjeno z 10 % FBS, 4 mM L-glutaminom, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukozo in 1,0 mM natrijevim piruvatom za idealno rast celic. Medij je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve celic B16-F10 je približno 20,1 ure. Lahko se giblje med 17 in 21 urami, odvisno od pogojev gojenja.
- Vrsta rasti
- B16-F10 je adhezivna celična linija. Celice rastejo hitro in tvorijo monosloje.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči B16-F10
- Izvor in splošne značilnosti celične linije B16-F10
- Informacije o gojenju celic B16-F10
- Celice B16-F10: prednosti in slabosti
- Raziskovalne aplikacije celic B16-F10
- Objave o celični liniji B16-F10
- Viri za celično linijo B16-F10: protokoli, videi in več
Izvor in splošne značilnosti celične linije B16-F10
V tem poglavju boste spoznali izvor in posebne lastnosti celic melanomskega tumorja B16F10. To vam bo pomagalo pri učinkoviti uporabi celične linije v vašem raziskovalnem delu. Predvsem boste izvedeli: Kaj so celice B16-F10? Od kje izhaja B16F10? Kakšna je morfologija celične linije B16F12? Kakšna je velikost celice B16F10?
- B16-F10 je podklon celične linije tumorja B16, ki izhaja iz kožnega tkiva miši C57BL/6J. V tem primeru so bile celice melanoma B16F10 razvite po intravenski injekciji linije B16 v imunokompromitirane ali singene miši. Te celice so bile izbrane zaradi njihovega potenciala za tvorbo metastaziranih pljučnih kolonij in vivo, nato pa so bile vzpostavljene po desetih ciklih tvorbe pljučnih kolonij in vitro [1]. Razvili so jo Fidler in sodelavci leta 1976.
- Celične linije B16-F10 imajo epitelijsko podoben in vretenast videz.
- Približna velikost celic B16-F10 je 15,4 ± 1,4 μm [2].
Celice B16-F1 in B16-F10
Celice B16-F1 in B16-F10 izhajajo iz matične celične linije B16. Obe izhajata iz istega izvora in imata skoraj enake lastnosti. Glavna razlika med njima pa je njihova sposobnost metastaziranja. Celice B16-F10 imajo visok, medtem ko imajo celice B16-F1 nizek metastazni potencial [3].
Podatki o gojenju celic B16-F10
Pred ravnanjem s celično linijo in njenim gojenjem morate poznati njen čas podvojitve, gojišča, pogoje in protokole za gojenje celic. V tem poglavju bomo obravnavali: Kakšen je čas podvojitve celic B16-F10? Kako gojiti celice B16-F10? Kaj je gojišče za celice B16-F10? Kateri pogoji gojenja so priporočeni za celice B16-F10?
Ključne točke za gojenje celic B16-F10
Čas podvojitve:
Čas podvojitve celic B16-F10 je približno 20,1 ure. Lahko se giblje med 17 in 21 urami, odvisno od pogojev gojenja.
Adhezivne ali v suspenziji:
B16-F10 je adhezivna celična linija. Celice rastejo hitro in tvorijo monosloje.
Razmerje delitve:
Celice B16-F10 se subkultivirajo v razmerju delitve od 1:2 do 1:4. Celice se operejo s fosfatnim pufrom (1x) in nato inkubirajo z raztopino Accutase za pasiranje 8 do 10 minut pri sobni temperaturi. Celicam se doda svež medij in se centrifugirajo. Pridobljeni celični pelet se ponovno suspendira, celice pa se razporedijo v novo kolbo, ki vsebuje svežo gojišče, v skladu z razmerjem delitve.
Rastno gojišče:
Celice B16-F10 se gojijo v gojišču DMEM. Gojišče se dopolni z 10 % FBS, 4 mM L-glutaminom, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukoze in 1,0 mM natrijevim piruvatom za idealno rast celic. Medij je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.
Pogoji rasti:
Celice B16-F10 se gojijo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C z 5 % dovodom CO2.
Shranjevanje:
Zamrznjene celice se shranjujejo pri temperaturi pod -150 °C v električnem zamrzovalniku za ultra nizke temperature ali v plinski fazi tekočega dušika, da se ohrani vitalnost celic.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
Celice B16-F10 se za shranjevanje zamrznejo v gojiščih CM-1 ali CM-ACF. Za to se priporoča postopek počasnega zamrzovanja, ki omogoča le 1 °C padec temperature na minuto, da se prepreči šok celic.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice B16-F10 se odmrzujejo v vnaprej nastavljeni vodni kopeli pri 37 °C za 40 do 60 sekund. Nato se celice dodajo v svež medij in centrifugirajo, da se odstranijo sestavine zamrzovalnega medija. Zbrane celice se ponovno suspendirajo v rastnem mediju in nalijejo v kolbe za gojenje.
Raven biološke varnosti:
Za ravnanje z in vzdrževanje celične linije B16-F10 je potreben laboratorij z ravnjo biološke varnosti 1.
Celice B16-F10: prednosti in slabosti
Tako kot druge celične linije ima tudi B16-F10 nekaj prednosti in slabosti. V tem poglavju so obravnavane nekatere pomembne prednosti in slabosti te celične linije kožnega melanoma.
Prednosti
Celična linija B16-F10 se pogosto uporablja v raziskavah raka. Prednosti celic B16-F10 so:
Metastazni potencial
Celice kožnega melanoma B16F10 imajo visok metastazni potencial, zaradi česar so dragocene za preučevanje metastaziranja raka in osnovnih mehanizmov.
In vitro model tumorja
Celice B16-F10 služijo kot in vitro model za preučevanje napredovanja in rasti raka, kar raziskovalcem pomaga razumeti celične in molekularne mehanizme, ki povzročajo raka.
Pomanjkljivosti
Pomanjkljivosti, povezane s celično linijo B16-F10, so:
Celična linija, pridobljena iz miši
B16-F10 je celična linija, pridobljena iz miši, kar omejuje njeno uporabnost v študijah, specifičnih za človeka. Raziskovalni izsledki, pridobljeni iz teh celic, se morda ne morejo vedno v celoti prenesti na človeško biologijo.
Raziskovalne aplikacije celic B16-F10
Celična linija B16-F10 se pogosto uporablja v raziskavah raka. Tukaj obravnavamo nekaj obetavnih uporab te celične linije.
- Raziskave raka: Celična linija B16-F10 je dragocen model za preučevanje procesov rakavih celic, vključno s proliferacijo, invazijo, migracijo in celično smrtjo ali apoptozo. Poleg tega raziskovalcem pomaga pridobiti vpogled v molekularne mehanizme in poti, ki poganjajo te celične procese. Študija, izvedena leta 2018, je raziskovala vlogo CCR5 (C-C kemokin receptor tip 5) v prehodu epitelnih celic v mezenhimalne celice in metastaziranju pri celicah melanoma. Ugotovitve so pokazale, da pomanjkanje CCR5 omejuje rast tumorja in metastaze, medtem ko visoka ekspresija vodi do povečane rasti in metastaz celic B16-F10. Nadaljnje raziskave so pokazale, da CCR5 uravnava izražanje TGFβ1, ki uravnava signalizacijo PI3K/AKT/GSK3β za spodbujanje prehoda iz epitelnih v mezenhimalne celice in migracije celic [4].
- Testiranje in razvoj zdravil: Tumorske celice melanoma B16F10 so zelo agresivne in zato primerne za testiranje potencialnih protitumorskih zdravil in zdravljenj. Raziskovalci uporabljajo te celice in ocenjujejo učinek različnih spojin na rast celic, proliferacijo in metastaze, kar pomaga pri razvoju zdravil. Študija, ki so jo leta 2018 izvedli Valentina Nanni in sodelavci, je preučevala terapevtske učinke hidroalkoholnega izvlečka cvetov Spartium junceum. Študija je pokazala, da je cvetni ekstrakt učinkovit pri indukciji senescence v celicah B16-F10, kar vodi do zaviranja rasti celic in melanogeneze, zato lahko izvaja potencialne protirakave aktivnosti [5].
5. Objave, v katerih je predstavljena celična linija B16-F10
Tukaj je nekaj pomembnih raziskovalnih publikacij, ki obravnavajo celično linijo melanoma B16-F10:
Ta študija je bila objavljena v reviji Nutrients (2020). V njej je bilo predlagano, da ima etanolni ekstrakt Sorghum bicolor anti-melanogeni učinek na celice kožnega melanoma B16F10.
Kalcitriol zavira proliferacijo in potencialno inducira apoptozo v celicah B16–F10
Raziskava, objavljena v reviji Medical Science Monitor Basic Research (2022), predlaga, da zdravilo kalcitriol deluje protitumorno v celicah melanoma B16-F10 z zaviranjem proliferacije in indukcijo apoptoze.
Ta članek je objavljen v reviji Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Ugotovitve so pokazale, da kardoli, resorcinolni lipidi, izvajajo intenzivno citotoksičnost na celični liniji B16-F10.
Študija, objavljena v reviji Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), je raziskala antimetastatični potencial ekstrakta iz zunanjega plašča ginkga bilobe z uporabo celic B16-F10.
Ta raziskava v reviji World Neurosurgery (2018) je predlagala, da je timokinon lahko učinkovito zdravilo proti intrakerebralnim metastaznim lezijam, saj zavira rast celic B16-F10 in inducira apoptozo.
Viri za celično linijo B16-F10: protokoli, videi in več
Endotelne celice B16F10 se pogosto uporabljajo v raziskavah kožnega raka. Tukaj je nekaj spletnih virov, ki pojasnjujejo protokole za njihovo gojenje in transfekcijo:
- Transfekcija celic melanoma B16F10: Ta video vodič vam lahko pomaga pri učenju protokola transfekcije za celice B16-F10.
- Transfekcija B16-F10: Ta dokument pojasnjuje protokol in vitro transfekcije DNA za celice kožnega melanoma B16F10.
Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic B16-F10:
- Subkultiviranje B16-F10: Ta spletna stran vsebuje koristne informacije o celicah melanomskega tumorja B16F10. Vključuje gojišča, čas podvojitve, pogoje gojenja in protokol za subkultiviranje celic ter ravnanje s krioprezerviranimi in proliferativnimi kulturami.
Sklici
- Poste, G., et al., Primerjava metastaznih lastnosti klonov melanoma B16, izoliranih iz gojenih celičnih linij, podkožnih tumorjev in posameznih pljučnih metastaz. Cancer Research, 1982. 42(7): str. 2770–2778.
- Nakamura, M., D. Ono in S. Sugita, Mehanofenotipizacija variant celic melanoma B16 za oceno učinkovitosti zdravljenja z (-)-epigalokatehin galatom z uporabo koničaste mikrofluidne naprave. Micromachines, 2019. 10(3): str. 207.
- Danciu, C. in sod., Obnašanje štirih različnih podlinij mišjih celic melanoma B16: koža C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): str. 73–80.
- Liu, J., et al., Visoka ekspresija CCR5 v melanomu poveča epitelno-mezenhimalno prehod in metastaze prek TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): str. 481–493.
- Nanni, V., et al., Hidroalkoholni ekstrakt cvetov Spartium junceum L. zavira rast in melanogenezo v celicah B16-F10 z indukcijo senescence. Phytomedicine, 2018. 46: str. 1–10.