Celice B16-F10 - Raziskovanje celične linije melanoma B16-F10 v raziskavah metastaz
CeliceB16-F10 so melanomska celična linija, pridobljena iz miši C57BL/6J. Pogosto se uporabljajo pri raziskavah kožnega raka. Raziskovalci te celice uporabljajo za preučevanje razvoja in napredovanja tumorjev ter terapevtskih posegov. Ta članek obravnava temeljne vidike melanomskih celic B16-F10. Predvsem bo vključeval:
- Izvor in splošne značilnosti celične linije B16-F10
- Informacije o gojenju celic B16-F10
- Celice B16-F10: Prednosti in slabosti
- Raziskovalne aplikacije celic B16-F10
- Publikacije s celično linijo B16-F10
- Viri za celično linijo B16-F10: B1616: protokoli, videoposnetki in drugo
1. Izvor in splošne značilnosti celične linije B16-F10
V tem razdelku boste dobili vpogled v izvor in značilne lastnosti melanomskih tumorskih celic B16F10. To vam bo pomagalo pri učinkoviti uporabi celične linije pri vašem raziskovalnem delu. Naučili se boste predvsem naslednje: Kaj so celice B16-F10? Iz česa so pridobljene celice B16F10? Kakšna je morfologija celične linije B16F12? Kakšna je velikost celic B16F10?
- B16-F10 je podklon tumorske celične linije B16, pridobljene iz kožnega tkiva miši C57BL/6J. Melanomske celice B16F10 so bile razvite po intravenoznem vbrizgavanju linije B16 imunsko oslabljenim ali singeničnim mišim. Te celice so bile izbrane glede na njihov potencial za tvorbo pljučnih kolonij z metastazami in vivo in nato po desetih ciklih tvorbe pljučnih kolonij in vitro [1]. Razvili so jo Fidler in sodelavci leta 1976.
- Celične linije B16-F10 imajo epitelijski in vretenast videz.
- Približna velikost celic B16-F10 je 15,4 ± 1,4 μm [2].
Celici B16-F1 in B16-F10
Celici B16-F1 in B16-F10 sta bili pridobljeni iz matične celične linije B16. Obe izhajata iz iste in imata skoraj podobne lastnosti. Glavna razlika pa je njuna metastatska sposobnost. Celice B16-F10 imajo visoko, medtem ko imajo celice B16-F1 nizko metastatsko sposobnost [3].
2.podatki o gojenju celic B16-F10
Pred ravnanjem s celično linijo in njenim gojenjem morate poznati njen čas podvojitve, gojišča, pogoje in protokole za gojenje celic. V tem poglavju so obravnavane naslednje teme: Kakšen je čas podvojitve celic b16-f10? Kako gojite celice B16F10? Kakšno je gojišče za celice B16-F10? Kateri pogoji gojenja so priporočljivi za celice B16-F10?
Ključne točke za gojenje celic B16-F10
|
Čas podvojitve: |
Čas podvojitve celic B16-F10 je približno 20,1 ure. Odvisno od pogojev gojenja lahko traja od 17 do 21 ur. |
|
Prilepljene ali v suspenziji: |
B16-F10 je adherentna celična linija. Celice hitro rastejo in tvorijo enovrstne plasti. |
|
Razmerje delitve: |
B16-F10 se subkultivira v razmerju 1:2 do 1:4. Celice speremo s fiziološko raztopino fosfatnega pufra (1x) in jih nato 8 do 10 minut pri sobni temperaturi inkubiramo z raztopino za prehod Accutase. Celicam dodamo sveže gojišče in jih centrifugiramo. Zbrana celična peleta se ponovno resuspendira in celice se razporedijo v novo bučko s svežim gojiščem v skladu z razmerjem delitve. |
|
Rastno gojišče: |
Celice B16-F10 gojimo v gojišču DMEM. Gojišče je dopolnjeno z 10 % FBS, 4 mM L-glutaminom, 1,5 g/L NaHCO3, 4,5 g/L glukoze in 1,0 mM natrijevega piruvata za idealno rast celic. Medij je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden. |
|
Pogoji za rast: |
Celice B16-F10 gojimo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C s 5-odstotnim dovajanjem CO2. |
|
Shranjevanje: |
Zamrznjene celice shranjujemo pod -150 °C v električnem zamrzovalniku za zelo nizke temperature ali v parni fazi tekočega dušika, da ohranimo njihovo vitalnost. |
|
Postopek zamrzovanja in medij: |
Celice B16-F10 se zamrznejo v mediju CM-1 ali CM-ACF za shranjevanje. Pri tem se priporoča počasen postopek zamrzovanja, ki omogoča znižanje temperature le za 1 °C na minuto, da se prepreči šok za celice. |
|
Postopek odtaljevanja: |
Zamrznjene celice B16-F10 se 40 do 60 sekund odtajajo v vnaprej nastavljeni vodni kopeli pri 37 °C. Nato celice dodamo v sveže gojišče in jih centrifugiramo, da odstranimo sestavine gojišča za zamrzovanje. Zbrane celice ponovno suspendiramo v rastnem gojišču in jih prelijemo v bučke za gojenje. |
|
Raven biološke varnosti: |
Za ravnanje s celično linijo B16-F10 in njeno vzdrževanje je potreben laboratorij 1. stopnje biološke varnosti. |
3.celice B16-F10: Prednosti in slabosti
Tako kot druge celične linije ima tudi B16-F10 nekaj prednosti in slabosti. V tem razdelku so obravnavane nekatere pomembne prednosti in slabosti te celične linije kožnega melanoma.
Prednosti
Celična linija B16-F10 se pogosto uporablja pri raziskavah raka. Prednosti celic B16-F10 so:
|
Metastatski potencial |
Celice kožnega melanoma B16F10 imajo visok metastatski potencial, zato so dragocene za preučevanje metastaziranja raka in mehanizmov, na katerih temeljijo. |
|
Model tumorja in vitro |
Celice B16-F10 služijo kot model in vitro za preučevanje napredovanja in rasti raka ter raziskovalcem pomagajo razumeti celične in molekularne mehanizme, ki povzročajo nastanek raka. |
Slabosti
Slabosti, povezane s celično linijo B16-F10, so:
|
Celična linija, pridobljena z mišjo |
B16-F10 je mišja celična linija, kar omejuje njeno uporabnost za študije, specifične za človeka. Ugotovitve raziskav na teh celicah se ne morejo vedno resnično prenesti na človeško biologijo. |
4.raziskovalne aplikacije celic B16-F10
Celična linija B16-F10 se pogosto uporablja pri raziskavah raka. Tukaj je obravnavanih nekaj obetavnih aplikacij te celične linije.
- Raziskave raka: Celična linija B16-F10 je dragocen model za preučevanje procesov v rakavih celicah, vključno s proliferacijo, invazijo, migracijo in celično smrtjo ali apoptozo. Poleg tega raziskovalcem pomaga pridobiti vpogled v molekularne mehanizme in poti, ki poganjajo te celične procese. V študiji, izvedeni leta 2018, je bila raziskana vloga CCR5 (C-C kemokinski receptor tipa pet) pri prehodu melanomskih celic iz epitelijskih v mezenhimske celice in metastaziranju. Ugotovitve so pokazale, da pomanjkanje CCR5 omejuje rast in metastaziranje tumorjev, medtem ko visoko izražanje vodi v okrepljeno rast in metastaziranje celic B16-F10. Nadaljnje raziskave so pokazale, da CCR5 uravnava izražanje TGFβ1, ki uravnava signalizacijo PI3K/AKT/GSK3β in tako spodbuja prehod iz epitelija v mezenhim in migracijo celic [4].
- Testiranje in razvoj zdravil: Melanomske tumorske celice B16F10 so zelo agresivne in zato primerne za testiranje potencialnih protitumorskih zdravil in načinov zdravljenja. Raziskovalci uporabljajo te celice in ocenjujejo učinek različnih spojin na rast, proliferacijo in metastaziranje celic, kar pomaga pri razvoju zdravil. V študiji, ki jo je leta 2018 izvedla Valentina Nanni s sodelavci, so preučevali terapevtske učinke hidroalkoholnega izvlečka cvetov Spartium junceum . V študiji so predlagali, da je izvleček cvetov učinkovit pri induciranju senescence v celicah B16-F10, kar vodi v zatiranje celične rasti in melanogeneze, zato lahko izvaja potencialne protirakave aktivnosti [5].
5.objave z značilnostmi celične linije B16-F10
Tukaj je nekaj pomembnih raziskovalnih publikacij, ki vključujejo celično linijo melanoma B16-F10:
Ta študija je bila objavljena v reviji Nutrients (2020). Predlagala je, da ima etanolni izvleček Sorghum bicolor protimelanogeni učinek v celicah kožnega melanoma B16F10.
Kalcitriol zavira proliferacijo in potencialno povzroča apoptozo v celicah B16-F10
Raziskava, objavljena v reviji Medical Science Monitor Basic Research (2022), predlaga, da zdravilo kalcitriol deluje protitumorsko na celice melanoma B16-F10 tako, da zavira proliferacijo in inducira apoptozo.
Članek je objavljen v reviji Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Ugotovitve so razkrile, da kardoli, resorcinolni lipidi, delujejo intenzivno citotoksično na celično linijo B16-F10.
V študiji, objavljeni v reviji Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), je bil raziskan antimetastatični potencial izvlečka eksokarpa ginka bilobe z uporabo celic B16-F10.
Ta raziskava v reviji World Neurosurgery (2018) je predlagala, da je timokinon lahko učinkovita terapija proti intracerebralnim metastatskim lezijam, saj zavira rast celic B16-F10 in inducira apoptozo.
6.viri za celično linijo B16-F10: B1616: protokoli, videoposnetki in drugo: protokoli, videoposnetki in drugo
Endotelijske celice B16F10 se pogosto uporabljajo pri raziskavah kožnega raka. Tukaj je nekaj spletnih virov, ki pojasnjujejo njene protokole gojenja in transfekcije:
- B16F10 melanomske celice transfekcija: Ta video vadnica vam lahko pomaga pri učenju protokola transfekcije celic B16-F10.
- Transfekcija celic B16-F10: Ta dokument pojasnjuje protokol in vitro transfekcije DNK za celice kožnega melanoma B16F10.
Naslednja povezava vsebuje protokol celične kulture za celice B16-F10:
- B16-F10 subkultivacija: Ta spletna stran vsebuje koristne informacije o tumorskih celicah melanoma B16F10. Vključuje gojišča, čas podvojitve, pogoje gojenja in protokol za subkultiviranje celic ter ravnanje s kriokonzerviranimi in proliferativnimi kulturami.
Reference
- Poste, G., et al., Primerjava metastatskih lastnosti klonov melanoma B16, izoliranih iz gojenih celičnih linij, podkožnih tumorjev in posameznih pljučnih metastaz. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono in S. Sugita, Mechanophenotyping of B16 Melanoma Cell Variants for the Assessment of the Efficacy of (-)-Epigallocatechin Gallate Treatment Using a Tapered Microfluidic Device (Mehanofenotipizacija različic celic melanoma B16 za oceno učinkovitosti zdravljenja z (-)-Epigalokatehin galatom z uporabo koničaste mikrofluidne naprave). Mikrostroji, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Behaviour of four different B16 murine melanoma cell sublines (Obnašanje štirih različnih podlinij celic mišjega melanoma B16): C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., High expression of CCR5 in melanoma enhances epithelial-mesenchymal transition and metastasis via TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalcoholic extract of Spartium junceum L. flowers inhibits growth and melanogenesis in B16-F10 cells by inducing senescence. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.