Celice AGS – raziskovanje celic AGS pri adenokarcinomu želodca v raziskavah raka
Celice AGS predstavljajo celično linijo človeškega adenokarcinoma želodca, ki se pogosto uporablja v biomedicinskih raziskavah. Uporablja se zlasti za preučevanje biologije raka želodca, vključno z rastjo, razvojem in napredovanjem tumorja ter terapevtskimi posegi. Poleg tega se uporablja za preučevanje interakcij med gostiteljem in patogenom.
- Rastno gojišče
- Za gojenje celic AGS se uporablja gojišče DMEM, ki vsebuje 10 % FBS, 4 mM L-glutamina, 4,5 g/l glukoze, 1,5 g/l NaHCO3 in 1,0 mM natrijevega piruvata. Gojišče je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve celic AGS je med 24 in 48 urami.
- Vrsta rasti
- Celice AGS so adhezivne. Rastejo v monoslojih.
- Raven biološke varnosti
- BSL-2
- Na voljo pri
- Cytion — Naroči AGS
Splošne značilnosti in izvor celic AGS
Preden začnete delati s celično linijo, morate poznati njen izvor in splošne značilnosti. V tem poglavju bomo obravnavali naslednje: Kaj so AGS-celice? Kakšen je izvor AGS-celic? Kakšna je morfologija rakave celične linije AGS?
- Celična linija AGS izhaja iz želodčnega tkiva 54-letne belke z adenokarcinomom želodca. Izolirana je bila leta 1979 [1].
- Celice AGS imajo epitelijsko morfologijo.
- Želodčne epitelne celice AGS so hiperdiploide. Modalno število kromosomov za celice AGS je 49, kar se pojavi v skoraj 60 % celic. Poliploidija se pojavi tudi v približno 3,6 % celic.
Podatki o gojenju celične linije AGS
Za pravilno ravnanje in upravljanje celične linije morate poznati osnovne koncepte gojenja. Zlasti se morate naučiti: Kakšen je čas podvojitve celic AGS? Kakšno je gojišče za celice AGS? Kako se celice AGS subkultivirajo? Katera gojišča za zamrzovanje se uporabljajo za celice AGS želodčnega epitelija?
Ključne točke za gojenje celic AGS
Čas podvojitve:
Čas podvojitve celic AGS je med 24 in 48 urami.
Adherentne ali v suspenziji:
Celice AGS so adhezivne. Rastejo v monoslojih.
Gostota sejanja:
Celice AGS se posejejo v gostoti 1 x 104 celic/cm2. Pri tej gostoti celice v 3 do 5 dneh tvorijo konfluentni monosloj. Po odstranitvi starega gojišča se celice speremo z 1 x PBS in inkubiramo z raztopino za disociacijo Accutase. Odlepljene celice so ponovno suspendirali v gojišču in centrifugirali. Pelet celic so ponovno suspendirali in po štetju celic AGS so jih razdelili v nove kolbe za rast.
Gozdni medij:
Za gojenje celic AGS se uporablja gojišče DMEM, ki vsebuje 10 % FBS, 4 mM L-glutamina, 4,5 g/l glukoze, 1,5 g/l NaHCO3 in 1,0 mM natrijevega piruvata. Gojišče je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.
Pogoji za rast:
Celice AGS se hranijo v vlažnem inkubatorju (pri temperaturi 37 °C) z dovodom 5 % CO2.
Shranjevanje:
Zamrznjene celice AGS se hranijo v električnih zamrzovalnikih pri temperaturi pod -150 °C ali za dalj časa v plinski fazi tekočega dušika.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
Za zamrzovanje celic AGS se uporablja gojišče CM-1 ali CM-ACF. Zamrzovanje celic poteka s postopkom počasnega zamrzovanja, ki omogoča padec temperature le za 1 °C na minuto in ščiti vitalnost celic.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene želodčne epitelne celice se hitro premešajo v vodni kopeli pri 37 °C za 40 do 60 sekund. Odtaljene celice se ponovno suspendirajo v svežem gojišču in prelijejo v nove kolbe za rast. Po 24-urni inkubaciji se medij obnovi, da se odstranijo sestavine zamrzovalnega medija. Nasprotno pa se odmrznjene celice centrifugirajo in odstranijo se elementi zamrzovalnega medija. Nato se pobrane celice ponovno suspendirajo in razporedijo v kolbo, ki vsebuje gojišče.
Raven biološke varnosti:
Za gojenje celic AGS so nujne laboratorijske razmere stopnje biološke varnosti 2.
Celična linija AGS: prednosti in omejitve
V tem delu članka bomo osvetlili nekatere ključne prednosti in omejitve, povezane z AGS-celicami.
Prednosti
Glavne prednosti želodčnih epitelnih celic AGS so:
Enostavna gojitev
Celična linija AGS za raka želodca je enostavna za vzdrževanje v laboratorijih za gojenje celic. Nima nobenih zapletenih in zahtevnih pogojev za gojenje celic. Poleg tega kaže dobre lastnosti rasti, kar jo naredi idealno izbiro za preučevanje biologije raka želodca.
Pomen za raka želodca
Celice AGS izvirajo iz človeškega adenokarcinoma želodca, zaradi česar se pogosto uporabljajo za preučevanje biologije raka želodca in terapevtskih posegov.
Omejitve
Omejitev, povezana s celično linijo AGS, je:
In vitro celični model
Celice AGS se gojijo v biomedicinskih raziskovalnih laboratorijih v umetnih pogojih. Zato morda ne odražajo v celoti mikrookolja raka želodca in drugih celičnih ter molekularnih interakcij v živo.
Uporaba celic AGS
Celice AGS se uporabljajo posebej za preučevanje biologije raka želodca. Imajo še mnoge druge obetavne uporabe na biomedicinskem področju. Nekatere zanimive raziskovalne uporabe celic AGS so:
- Raziskava raka želodca: Celice AGS so odlično raziskovalno orodje za preučevanje celičnih in molekularnih mehanizmov, ki so osnova za rast, metastaze in invazijo raka želodca. Raziskovalci uporabljajo tudi želodčne epitelne celice AGS za preučevanje različnih celičnih procesov, genetskih mutacij in signalnih poti pri razvoju raka želodca. Študija v reviji Oncology Reports (2019) je ugotovila, da mikroRNA-183-5p.1 spodbuja proliferacijo, migracijo in invazijo tumorskih celic z zaviranjem signalne kaskade Bcl 2/P53. Poleg tega za doseganje teh učinkov tudi zavira gen TPM1. Zato se tako mikroRNA kot TPM1 predlagata kot učinkoviti molekularni cilji za razvoj ciljnih terapij proti raku želodca [2].
- Presejanje zdravil: Celice AGS se pogosto uporabljajo za presejanje novih in učinkovitih zdravil proti raku želodca. Raziskovalci ocenjujejo citotoksičnost in učinkovitost potencialnih zdravil z uporabo celične linije AGS. Izvedene so bile tudi študije o identifikaciji novih molekularnih tarč in razvoju novih ciljnih terapij za boj proti karcinomom želodca. Raziskava, izvedena leta 2021, je uporabila celice raka želodca AGS in proučevala terapevtski učinek zdravila paklitaksel. Ugotovitve so pokazale, da paklitaksel povzroča mitotično katastrofo, ki je sestavni mehanizem apoptoze ali celične smrti v celicah AGS. Poleg tega je spodbujal tudi avtofagijo v celicah raka želodca [3].
- Interakcije med gostiteljem in patogenom: Celična linija raka AGS se ukvarja tudi z raziskovanjem interakcij med gostiteljem in patogenom. To raziskovalcem pomaga razumeti celične mehanizme in odzive, vključene v okužbo. Na primer, študija, izvedena leta 2020, je ugotovila, da majhne nekodirajoče RNA, prisotne v veziklah zunanje membrane Helicobacter pylori, zmanjšujejo izločanje interlevkina 8 v človeških celicah AGS [4].
5. Raziskovalne publikacije o celični liniji AGS
V tem delu članka bomo predstavili nekaj zanimivih in najpogosteje citiranih raziskovalnih publikacij, ki obravnavajo celice AGS.
Ta študija v reviji Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) je predlagala, da salidrosid, naravna spojina, inducira zaščitno avtofagijo in celično smrt v celicah AGS želodčnega epitelija prek modulacije signalne poti PI3K/AKT/mTOR.
Ta študija je bila objavljena v reviji Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Raziskovala je sinergistične protirakave učinke polisaharida astragalusa in zdravila apatinib v celicah AGS. Ugotovitve študije so pokazale, da astragalus okrepi protitumorske učinke apatiniba prek zaviranja signalne poti AKT.
Ta raziskava, objavljena v reviji Journal of Ethnopharmacology (2018), je pokazala, da kurkuzedoalid, naravna spojina iz rastline Curcuma zedoaria Roscoe, prispeva k njenemu citotoksičnemu potencialu proti celicam AGS.
Prekomerna ekspresija FOXA1 zavira celično proliferacijo in EMT celic AGS človeškega raka želodca
Ta publikacija v reviji Gene (2018) predlaga, da povečana ekspresija FOXA1 zavira proliferacijo celic AGS človeškega adenokarcinoma želodca ter epitelno-mezenhimalno preoblikovanje (EMT) in invazijo.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen v reviji International Journal of Medical Microbiology leta 2020. V tej študiji so bile za preučevanje interakcij med gostiteljem in patogenom uporabljene celice AGS. Ugotovitve so pokazale, da Helicobacter pylori v veziklah zunanje membrane vsebuje nekaj nekodirajočih RNA, ki vplivajo na ravni IL-8 v celicah AGS.
Viri za celično linijo AGS: protokoli, videi in več
V nadaljevanju je navedenih nekaj virov, ki obravnavajo celice AGS.
- Protokol transfekcije celic AGS: Ta video je podrobna navodila za učenje protokola transfekcije za želodčne epitelne celice AGS.
Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic AGS.
- Protokol za gojenje celic AGS: Ta spletna stran vsebuje koristne informacije o gojiščih za celice AGS in protokolih za gojenje celic. Na kratko, ponuja protokol za subkultiviranje želodčnih epitelnih celic AGS ter ravnanje s proliferativnimi in krioprezerviranimi kulturami AGS.
- Subkultiviranje celic AGS: Ta spletna stran podrobno pojasnjuje postopek subkultiviranja celic AGS.
Sklici
- Phuc, B.H., et al., Primerjalna genomika dveh vietnamskih sevov Helicobacter pylori, CHC155 iz bolnika z rakom želodca brez kardije in VN1291 iz bolnika z razjedo dvanajstnika. Scientific Reports, 2023. 13(1): str. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 spodbuja migracijo in invazijo celic AGS raka želodca z usmerjanjem na TPM1 Popravek v/10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): str. 2371–2381.
- Khing, T.M., et al., Učinek paklitaksela na apoptozo, avtofagijo in mitotično katastrofo v celicah AGS. Scientific Reports, 2021. 11(1): str. 23490.
- Zhang, H., et al., sncRNA, zapakirani v vezikle zunanje membrane Helicobacter pylori, zmanjšujejo izločanje IL-8 v človeških celicah. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): str. 151356.