Celična linija A375 – vodnik po raziskavah melanoma

A375 je človeška celična linija melanoma, ki se pogosto uporablja v toksikoloških in imunoonkoloških raziskavah. Raziskovalci to celično linijo uporabljajo za preučevanje biologije raka in signalnih poti, testiranje ali presejanje potencialnih protirakovih sredstev ter razvoj novih in učinkovitih terapij.

Izvor in splošne značilnosti celic A375

Poznavanje izvora in splošnih značilnosti celične linije vam lahko pomaga pri načrtovanju njene uporabe v raziskavah. Ta del članka bo obravnaval izvor in značilnosti celične linije A375. Na primer, kaj je celična linija A375? Katere so značilnosti celične linije A375? Od kod izvirajo celice A375? Kakšna je morfologija celic melanoma A375? Kakšna je velikost celic A375?

• Celična linija kožnega raka A375 izvira iz eksplantatne kulture solidnega tumorja 54-letne ženske z malignim melanomom [1].
• Celice A375 imajo epitelijsko podobno morfologijo.
• Velikost celic A375 je relativno manjša v primerjavi z drugimi celičnimi linijami. Njihov premer je približno 12 µm.
• Melanomske celice A375 so hipotriploide. Modalno število kromosomov za to celično linijo je 62. Običajno ima vsaka celica devet markernih kromosomov in eno kopijo normalnih kromosomov N2, N6 in N22.

Celice A375: Informacije o gojenju celic

Kulture celic A375 so enostavne za vzdrževanje. Njihove zahteve glede gojenja niso pretirano zahtevne. Ta poglavje vam bo pomagalo spoznati potrebne informacije o gojenju celic. Na primer, kakšen je čas podvojitve celic A375? Kakšna je gojišče za celično linijo A375? Kakšna je gostota posevka celic A375? Ali so celice melanoma A375 adhezivne?

Ključne točke za gojenje celic A375

Čas podvojitve populacije:

Čas podvojitve A375 je 20 ur.

Adhezivne ali v suspenziji:

A375 je adhezivna človeška celična linija melanoma.

Gostota sejanja:

Gostota 1 x 10⁴ celic/cm² je idealna za celične kulture A375. Adherentne celice se speremo z 1 x fosfatnim pufrom (PBS) in inkubiramo s pasážno raztopino (Accutase). Nato celicam dodamo gojišče in jih centrifugiramo. Pridobljene celice ponovno suspendiramo v gojišču in jih razdelimo v nove kolbe za rast.

Gozdno gojišče:

DMEM se priporoča kot idealno gojišče za A375, če je dopolnjeno z 10 % fetalnim govejim serumom (FBS), 4,5 g/l glukoze, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamina in 1,0 mM natrijevega piruvata. Gojišče A375 je treba zamenjati 2–3-krat na teden.

Pogoji za gojenje:

Melanomske celice A375 se gojijo v vlažnem inkubatorju (37 °C) z 5 % dovodom CO2.

Shranjevanje:

Zamrznjene celice A375 je treba hraniti pri temperaturi pod -150 °C v plinski fazi tekočega dušika ali v električnem zamrzovalniku.

Postopek zamrzovanja in gojišče:

Za zamrzovanje celične linije A375 se uporabljata gojišča CM-1 ali CM-ACF. Za zaščito vitalnosti celic se je izbral postopek počasnega zamrzovanja, ki omogoča postopno zniževanje temperature za 1 °C.

Postopek odmrzovanja:

Vialo z zamrznjenimi celicami melanoma A375 se hitro pretrese v vodni kopeli 40 do 60 sekund, dokler ne ostane le majhen kepec ledu. Celicam se doda svež medij in se centrifugirajo, da se odstranijo elementi zamrzovalnega medija. Dobljeni celični pelet se ponovno suspendira in prelije v nove kolbe.

Raven biološke varnosti:

Kulture A375 se obdelujejo in vzdržujejo v laboratorijskih pogojih stopnje biološke varnosti 1.

Raziskovalne uporabe celične linije A375

Celična linija A375 ima obsežne raziskovalne aplikacije v raziskavah raka. Tukaj je nekaj pogostih področij, kjer se celice A375 uporabljajo.

• Raziskave raka: Celice A375 imajo široko uporabo v raziskavah melanoma. Raziskovalci so te celice uporabili za preučevanje biologije kožnega raka, procesov in osnovnih mehanizmov celičnega signaliziranja, vključno s celično proliferacijo, migracijo in invazijo. To lahko raziskovalcem pomaga tudi pri identificiranju novih molekularnih terapevtskih ciljev. V študiji, ki so jo leta 2019 izvedli Lin Zhu in sodelavci, so uporabili zelo agresivne celice melanoma A375 in ugotovili vlogo mikroRNA-3662 pri rasti in invaziji celic melanoma A375. Ugotovitve študije navajajo, da mikroRNA-3662 deluje na gen ZEB1 in regulira rast celic melanoma in vitro ter in vivo v tumorju A375 [2]. Podobno je raziskava, izvedena leta 2018, ugotovila, da so poti PI3K/AKT in MAPK/ERK vključene v proliferacijo in metastaze celične linije A375 [3].
• Odkrivanje in testiranje zdravil: Celična linija A375 je uporaben in vitro tumorni model za testiranje in presejanje potencialnih protirakavih sredstev. Raziskovalci z uporabo teh celic melanoma A375 ocenjujejo toksičnost in učinkovitost novih kemoterapevtskih zdravil, spojin in drugih terapij. Na primer, študija je raziskala protirakave lastnosti mikro- in nanovesiklov, pridobljenih iz grenivke, na celicah človeškega melanoma A375. Rezultati so pokazali, da mikro- in nanovesikli povzročajo zaustavitev celičnega cikla in apoptozo ter ovirajo gensko ekspresijo pri celični proliferaciji, migraciji in invaziji [4].

Celice A375: publikacije

Tukaj so navedene nekatere pomembne raziskovalne publikacije, ki obravnavajo celice A375.

Vitamin D in njegovi analogi z nizko kalcijemodulirajo protirakave lastnosti cisplatina in dakarbazina v človeški celični liniji melanoma A375

Ta študija je bila objavljena v reviji Journal of Oncology leta 2019. Študija je predlagala, da sočasno zdravljenje z vitaminom D in analogi izboljša protirakovo aktivnost cisplatina in dakarbazina v celicah melanoma A375.

In vitro ocena protimelanomskih učinkov (celicna linija A375) gela in izvlečkov celih listov izbranih vrst aloe

Ta raziskava je bila objavljena v reviji Journal of Herbal Medicine leta 2022. Ta študija je raziskovala protimelanomske učinke gela aloe vere v celicah melanoma A375.

Član družine fermitinov 2 spodbuja napredovanje melanoma s povečanjem vezave p-α-Pix na Rac1 za aktivacijo poti MAPK

Ta študija v reviji Oncogene (2021) je predlagala, da član družine fermitin 2 (FERMT2 ali kindlin-2) spodbuja napredovanje melanoma prek aktiviranja MAPK z vezavo s p-α-Pix in Rac1.

FARP1 olajšuje celično proliferacijo z moduliranjem signalne poti MAPK pri kožnem melanomu

Ta študija v reviji The American Journal of Dermatopathology (2019) predlaga, da FARP1 lahko olajša razvoj in napredovanje kožnega melanoma. Zato je lahko koristen terapevtski cilj.

Citotoksični in apoptični potencial izvlečkov Phyllodium elegans na človeških rakavih celičnih linijah

Ta raziskovalni članek je bil objavljen v reviji Bioengineered (2019). Ta študija je raziskovala citotoksično in apoptotično aktivnost izvlečka rastline Phyllodium elegans na človeških karcinomskih celičnih linijah, vključno z A375.

Viri za celično linijo A375: protokoli, videi in več

V nadaljevanju je navedenih nekaj spletnih virov, ki obravnavajo celice A375.

• Transfekcija celic A375: Ta video vodič vam bo pomagal, da se korak za korakom naučite transfekcije celic A375.
• Gojenje celic: Ta video vsebuje zelo koristne informacije o gojenju celičnih linij.

Protokoli za gojenje celic A375 so navedeni tukaj.

• Celična linija A375: Ta povezava vsebuje koristne informacije o gojenju in vzdrževanju celične linije A375, vključno z gojišči A375 ter ravnanjem z zamrznjenimi in proliferativnimi kulturami A375.

Viri

1. Avram, S., et al., Standardizacija modelov človeškega melanoma A375 na korioalantoični membrani piščančjih zarodkov in golih miših Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): str. 89–99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 cilja na ZEB1 in zmanjšuje invazijo zelo agresivne celične linije melanoma A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: str. 5845–5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C zavira proliferacijo in metastaziranje celic melanoma A375 prek zaviranja poti PI3K/Akt in MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: str. 35–44.
4. Stanly, C., et al., Mikro- in nanovesikle, pridobljene iz grenivke, kažejo različne metabolomske profile in protirakave aktivnosti v človeški celični liniji melanoma A375. Cells, 2020. 9(12): str. 2722.