Objavljeno: 2023 | Zadnji pregled: maj 2026

Celovit vodnik po najboljših praksah na področju shranjevanja celic

Pregled upravljanja s celičnimi kulturami

Učinkovito upravljanje celičnih kultur je bistveno za ohranjanje njihove celovitosti za raziskovalne in terapevtske namene. Neprekinjeno ali podaljšano gojenje celičnih linij lahko privede do različnih zapletov, kot so:

• Mikrobna kontaminacija: Odprte kulture so dovzetne za različne mikrobne okužbe, ki lahko spremenijo vedenje in vitalnost celic.
• Sprememba značilnosti: Ključne celične značilnosti, kot so izražanje antigenov ali proizvodnja protiteles, se lahko sčasoma izgubijo.
• Genetske variacije: Genomsko nestabilnost lahko nastane v celičnih linijah, znanih po nestabilnih kariotipih, kar vodi do nezanesljivih eksperimentalnih rezultatov.
• Omejena življenjska doba: Nekateri tipi celic imajo omejeno število delitev, preden vstopijo v senescenco in prenehajo s proliferacijo.
• Tveganje navzkrižne kontaminacije: Podaljšana kultura poveča tveganje, da ena celična linija kontaminira drugo, kar povzroči napačne podatke.
• Intenzivna poraba virov: Dolgotrajne kulture zahtevajo več potrošnega materiala in več dela, kar znatno poveča stroške.

Strateški pristop k shranjevanju celic

Sistem banke celic je strateški pristop k zmanjšanju zgoraj navedenih tveganj. Priporočeni sistem je sistem Master Cell Banking, ki vključuje naslednje korake:

1. Začetna karantena: Novo pridobljene celične kulture je treba izolirati in obravnavati pod strogimi karantenskimi pogoji, da se prepreči kontaminacija v laboratoriju.
2. Ustanovitev referenčnega zaloga: Po začetnem razmnoževanju kulture je treba majhno število ampul (3–5) zamrzniti kot referenčni zalog za nujne primere.
3. Oblikovanje glavne celične banke: Razširite kulture iz ampule zaloge za nujne primere, da vzpostavite glavno celično banko, ki jo sestavlja večje število ampul (10–20 ali več, glede na predvideno uporabo).
4. Strogi nadzor kakovosti: Podskupina glavne celične banke je podvržena temeljitemu nadzoru kakovosti, ki vključuje oceno vitalnosti celic, potrditev odsotnosti mikrobnih kontaminantov ter morebitno izvajanje testiranja na prisotnost virusov in pristnost.
5. Razvoj delovne celične banke: Del glavne celične banke se nato uporabi za vzpostavitev delovne celične banke, ki je primarni vir za aktivno raziskovanje in uporabo.

Podrobni protokoli za nadzor kakovosti

Kontrola kakovosti je ključni del vzdrževanja celične banke. Obsega:

• Preizkuse življenskosti in števila: Zagotavljanje, da so celice žive in prisotne v zadostnem številu.
• Mikrobiološko presejanje: redno testiranje na bakterije, glive in mikoplazmo za preprečevanje ogroženosti celičnih kultur.
• Postopke avtentifikacije: Potrjevanje identitete celičnih linij z metodami, kot je profiliranje DNA.

Priporočila za shranjevanje in uporabo

Primerni pogoji shranjevanja so naslednji:

• Namenski prostori za shranjevanje: Uporabite prostore, ki so posebej zasnovani za shranjevanje celičnih bank, kot so rezervoarji za tekoči dušik ali električni zamrzovalniki, da preprečite navzkrižno kontaminacijo in zagotovite dolgoročno vitalnost.

Doslednost in zagotavljanje kakovosti:

• Dosleden celični material: Sistem celičnih bank zagotavlja, da vsi materiali, uporabljeni v poskusih, izhajajo iz doslednega vira.
• Nadzorovano število pasaz: Z uporabo celic znotraj nadzorovanega obsega števila pasaz se zmanjša eksperimentalna spremenljivost.
• Praksa gojenja celic po načelu »just-in-time«: Gojenje celic le, ko je to potrebno, pomaga ohraniti prvotne lastnosti celične linije in zmanjša stroške, povezane z vzdrževanjem neprekinjenih kultur.